微型月季组织培养快繁体系的建立

王 禹

(黑龙江省农科院园艺分院，哈尔滨150069)

微型月季，植株矮小，花色奇异，花期长，因其品性独特又被称为“钻石月季”，主要用于盆栽花卉和园林绿化，应用前景广泛，微型月季的需求量在逐年增加。在生产中发现，微型月季在常规扦插繁育时，因植株矮小,节数少的特性；且各品种之间成活率差异较大，有的成活率可达到80%，有的还达不到50%，导致扦插繁殖率低, 难以满足规模化生产的需求，制约着微型月季规模化生产发展。在此背景下，应探索出高效的微型月季繁育技术。

植物组织培养技术具有繁育周期短、繁殖系数高的特性。本试验筛选适宜组织培养的外植体、适宜外植体萌发的培养基、丛生芽增殖和生根的培养基及移栽的适宜条件，建立微型月季组织培养的快繁体系，提高微型月季的繁殖速度和数量，为微型月季应用提供技术支撑。

1 试验材料

本试验采用微型月季品种“旋转木马(红色系)”和“金太阳(黄色系)”为材料。采集地点为黑龙江省农业科学院园艺分院。

2 实验内容与方法

2.1 微型月季组织培养适宜的外植体

采集微型月季的一年生嫩、半木质化、木质化的枝条，剪成带一个芽的茎段，自来水流冲洗1h，置于超净工作台中，75%酒精消毒，蒸馏水冲洗2次，0.1%的升汞消毒，蒸馏水冲洗2次，接种到增殖培养基上，培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂pH 5.4～5.8；培养温度为22～25℃，光照时间14h/d，培养30d，调查茎段污染及腋芽萌发情况。

2.2 微型月季适宜腋芽萌发的培养基

将嫩或木质化枝条的茎段(不同外植体消毒时间不同)，接种到生长培养基上，生长培养基采用6-BA+IAA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂pH 5.4～5.8；培养温度为22～25℃，光照时间14h/d，培养30d，调查6-BA、IAA对腋芽萌发的影响。

2.3 微型月季丛生芽增殖适宜的培养基

将萌发的腋芽转接到增殖培养基上，增殖培养基采用6-BA或TDZ+IAA或KT+30 g/L 蔗糖+7g/L 琼脂pH5.4～5.8；培养温度为22～25℃，光照时间14h/d，培养30d，调查6-BA、TDZ、IAA、KT对月季丛生芽增殖的影响。

2.4 微型月季组培苗生根适宜的培养基

待组培苗长到1cm高转入到生根培养基中，生根培养基采用IBA+IAA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂pH5.4～5.8；培养温度为22～25℃；光照时间12h/d，培养30d，调查IBA、IAA对草莓生根的影响。

2.5 微型月季组培苗适宜的移栽条件

组培苗移栽20d后，调查遮光率、组培苗高度、根系长度、空气湿度及环境温度对移栽成活率的影响。

3 结果与分析

3.1 筛选微型月季组织培养适宜的外植体

表1 微型月季组织培养适宜的外植体筛选

从表1得出，“旋转木马”与“金太阳”嫩枝和半木质化枝的茎段污染率可控制到20%以下，萌芽率可达到80%以上；木质化枝条的茎段虽萌芽率较高，但污染率太高。综合以上因素，应选取嫩枝和半木质化枝的茎段作为外植体。

3.2 不同生长激素对微型月季腋芽萌发的影响

表2 生长激素对微型月季腋芽萌发的影响

从表2得出，微型月季生长培养基添加0.5～1mg/L 6-BA旋转木马腋芽萌发率达到80%以上，金太阳腋芽萌发率达到70%以上；添加IAA对促进腋芽萌发效果不明显且浓度高会抑制芽的萌发，可不添加。生产中为降低成本，微型月季生长培养基可采用MS+0.5mg/L 6-BA。

3.3 不同生长激素对月季丛生芽增殖的影响

表3 生长激素对丛生芽增殖的影响

从表3得出，不同品种的微型月季在同种培养基中增殖效果有差异，含TDZ的培养基对丛生芽增殖效果较好。旋转木马为MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ、金色太阳为MS+1mg/L TDZ+0.1mg/L KT增殖系数高，芽长势强壮。

3.4 不同生长激素对月季组培苗生根的影响

从表4得出，IBA对微型月季组培苗生根有促进作用，但浓度达到0.5mg/L时生根率和生根条数都下降，起到抑制作用。旋转木马以0.2mg/L IBA、金太阳以0.2mg/L IBA或0.2mg/L IBA+0.2mg/L IAA培养基生根效果好，生根率可达到80%以上。结果显示添加IAA对组培苗生长有促进作用，但要注意使用量，太高会加快苗生长，不利于驯化成活。生产中建议“旋转木马”与“金太阳”都使用生根培养基0.2mg/L IBA。

表4 生长激素对组培苗生根的影响

3.5 筛选微型月季组培苗适宜的移栽条件

表5 微型月季组培苗移栽适宜条件筛选

实验中发现，空气湿度高微型月季易患白粉病，温度高易感染红蜘蛛。从表5得出，草莓组培苗移栽的适宜条件为组培苗高度达到2～3cm、根系长度0.5～1cm、遮光率20%～40%、空气湿度40%～50%、环境温度20～25℃，移栽成活率可达到91%。

4 结论与讨论

微型月季组织培养快繁体系的步骤为：采集微型月季的一年生嫩、半木质化的枝条，剪成带一个芽的茎段；自来水流冲洗1h，置于超净工作台中，75%酒精消毒(嫩枝30s、半木质化枝50s)，蒸馏水冲洗2次，0.1%的升汞消毒(嫩枝5min、半木质化枝6min)，蒸馏水冲洗2次，接种到生长培养基上，培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂 pH 5.4～5.8；培养温度为22～25℃，光照时间14h/d。待腋芽萌发，转接到增殖培养基上，增殖培养基可采用MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ或者MS+1mg/L TDZ+0.1mg/L KT，pH 5.4～5.8；培养温度为22～25℃，光照时间14h/d。将长到1cm高的组培苗转入到生根培养基中，生根培养基采用0.2mg/L IBA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂pH 5.4～5.8；培养温度为22～25℃；光照时间12h/d。待根系长至0.5～1cm，株高2～3cm，转至移栽环境开盖放置3d。移栽基质采用草炭土，拌入30%的多菌灵(多菌灵∶土=1∶100)，喷洒73%炔螨特乳油2000倍液，覆盖塑料布消毒3d。将组培苗洗净根部培养基栽入育苗盘中，育苗盘采用72穴，厚度6cm。移栽后遮光率20%～40%、空气湿度40%～50%、环境温度20～25℃，移栽成活率可达到91%。微型月季由茎段萌发转接到增殖培养基时，萌发的新芽不易太高，否则降低增殖系数。微型月季驯化时根系不宜太长，植株不可太高，否则不利于驯化成活，可能原因是植株太高蒸腾作用增加，小苗失水严重；根系太长，栽植时易碰伤根部。此实验采用了2个微型月季品种，在同种培养基上萌芽率、增殖系数及生根率都有差异，如“金太阳(黄色系)”的生根率低于“旋转木马(红色系)”的生根率，这些差异与田间品种特性表现相似，因此在实际生产中不同品种繁育时，要适当调整培养基，以提高繁殖速度。