分子病理学诊断技术在食管癌患者诊断中的应用

吴长发

【摘要】 目的：探讨分子病理学诊断技术在食管癌患者中的诊断效果及与预后的相关性研究。方法：选取2016年5月-2017年5月本院食道癌患者64例，按照随机数字表法分为对照组与研究组，每组各32例。对照组采用常规传统的病理学诊断，研究组采用FISH检测法。对两组患者活检组织中病理结果、病例等级、检测的准确度、FISH的检测结果进行分析检测。结果：研究组患者病情程度显著高于对照组（P<0.05），检测结果表明食道癌与3号、17号染色体着丝粒异常拷贝有关（P<0.05）。结论：对于食管癌患者进行诊断时，采取更为敏感的FISH检测，显著提高检测的准确度，3号与17号染色体着丝点可以作为诊断食道癌的探针，分子病理学诊断技术可以进一步推广应用。

【关键词】 分子病理学; 食管癌; 诊断效果; 相关性研究

【Abstract】 Objective：To investigate the effect of molecular pathology in the diagnosis of esophageal cancer and its correlation with prognosis.Method：Sixty-four patients with esophageal cancer in our hospital from May 2016 to May 2017 were selected and divided into control group and research group according to random number table method，32 cases in each group.Conventional pathological diagnosis was used in the control group and FISH was used in the study group.The pathological results，case grade，accuracy of detection and FISH detection results in biopsy tissues of the two groups were analyzed and detected.Result：The degree of illness in the study group was significantly higher than that in the control group（P<0.05）.FISH results showed that esophageal cancer could be associated with abnormal centromere copies of chromosomes 3 and 17（P<0.05）.Conclusion：For the diagnosis of esophageal cancer patients，more sensitive FISH detection can significantly improve the accuracy of detection.Chromosome 3 and 17 centromeres can be used as probes for the diagnosis of esophageal cancer.Molecular pathological diagnosis technology can be further promoted and applied.

【Key words】 Molecular pathology; Esophageal carcinoma; Diagnostic effect; Correlation study

First-authors address：Wuhan Hongshan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430070，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.13.035

食管癌屬于较为常见的消化道肿瘤，我国食道癌具有较高的发病率和死亡率，且该病的主要发病人群为40岁以上的中年[1]。食管癌的临床症状表现为咽下困难，患者依次下咽的食物为干的食物、半流质食物，若病情逐渐恶化，则患者对水以及唾液难以下咽[2]。本院选取2016年5月-2017年5月本院食道癌患者64例，对其采用不同的诊断技术，对分子病理学诊断技术在食管癌患者中的诊断效果及与预后的相关性研究进行了探究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年5月-2017年5月本院收治的食道癌患者64例，按照随机数字表法分为对照组与研究组，每组各32例。纳入标准：（1）患者已诊断为食道癌。（2）患者精神正常。排除标准：患者患较严重的凝血功能障碍、严重的高血压和糖尿病等全身性疾病[3]。患者均知情并同意本研究，且经过医院伦理委员会批准。

1.2 方法 所有患者在手术前已诊断为食道癌，均采取纤维食管胃镜进行检查，同时在病变区使用标准活检钳，选取部分活检组织[4]。对照组采用常规传统的病理学诊断，研究组采用FISH检测法，将新鲜活检组织放置于载玻片上，25 ℃室温环境下进行干燥处理，-80 ℃环境下进行存储。分别采用橙色、绿色荧光对3号、17号染色体着丝粒进行标记，将其作为探针。探针以及相对应的试剂（雅培分子公司、美国）[5]。74 ℃环境下，采用70%甲酰胺液对活检标本进行分解变性，该过程持续2 min后，将其依次放入70%，85%和100%的乙醇中，分别进行2 min梯度脱水操作[6]。待其自然干燥后，将其置于45 ℃电热板上，首先进行5 min预热处理，在标本标记区内滴入10 μL探针混合液，采用橡胶水泥进行密封，在42 ℃且较为潮湿的环境中，进行长达16 h的杂交处理[7]。将载玻片放入70 ℃的2XSSC溶液中进行洗涤，处理5 min后，再将其置入25 ℃的环境中的2XSSC溶液进行洗涤2 min。使用DAPI-II液（雅培分子公司）对细胞核进行染色同时封片处理[8]。采用荧光显微镜、特殊图像采集分析系统（莱卡微系统公司，德国），对各染色体着丝粒信号进行统计，每个标本中包含100个细胞核，细胞核出现重叠、破损、未去除细胞质等情况时，不用被记录其中。判定为阳性的原则为各细胞核中的高拷贝数大于10%时，采用双盲式的方式进行FISH检测[9]。

1.3 观察指标及评价标准 观察两组患者的活检组织的病理结果、病例等级，对FISH的检测结果中3号及17号染色体着丝粒异常拷贝、假阴性等准确度进行分析。病理形态学分级标准：若鳞状上皮出现轻度增生则为Ⅰ级，若出现轻度不典型增生为Ⅱ级，若出现中度不典型增生，但未出现癌变的状况则为Ⅲ级。对患者的病理诊断标准，由专业医师进行判定。

1.4 统计学处理 使用SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料采用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用率（%）表示，比较采用字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者基线资料比较 研究组年龄27～63岁，平均（45.5±8.4）岁。对照组年龄28～63岁，平均（46.4±7.5）岁。两组患者一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。見表1。

2.2 两患者活检组织的检测结果比较 研究组患者病情程度显著高于对照组（P<0.05）。见表2。

2.3 两组患者的检测结果比较 检测结果表明，食道癌与3号、17号染色体着丝粒异常拷贝有关（P<0.05）。见表3。

3 讨论

分子病理学包括运用分子和遗传学方法对肿瘤进行诊断和分类，设计和验证对治疗反应和病情发展的预测性生物标记物，不同的基因构成造成的对肿瘤的个人易感性，还有环境因素和生活方式对肿瘤发生的影响。食管癌是常见的消化道肿瘤，全世界每年约有30万人死于食管癌，其发病率和死亡率各国差异很大[10]。食管癌典型的症状为进行性咽下困难，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，最后水和唾液也不能咽下。在食道癌高发区的粮食中可以分离出多种真菌，其中某些真菌存在致癌作用，对癌症的发生起到促进[11]。食道癌患者的饮食中缺乏维生素A、维生素B2等，食道癌患者共同的特点为蔬菜、水果摄入量较低。且长期饮酒、抽烟，食用的食物过硬、过热，导致患者出现慢性刺激、炎症等情况。食道癌的临床症状容易忽视，但当患者吞咽较硬的食物时，存在不同程度的不适感，但病程发展较为缓慢[12]。食管癌患病的中晚期临床症状变现为进行性咽下困难，经常性地吐黏液样痰，为下咽的唾液和食管的分泌物。患者逐渐消瘦、脱水。若患者出现持续性的胸痛、背痛，则表明癌发展为中晚期。若癌症对喉返神经造成伤害，患者的声音逐渐嘶哑[13]。对颈交感神经节产生压迫，引发Horner综合征的发生。本研究中，对两组患者的检测结果分析，对比两组食道癌患者的鳞状细胞癌、腺癌、黏液癌、小细胞癌等状况的出现例数相比，差异均无统计学意义（P>0.05）。

目前对食道癌患者的治疗手段有手术治疗、化学治疗、中医中药相结合的综合治疗，缓解食管癌患者症状，延长存活期。但那需要及时对患者的基本生理功能进行检测，同时并注意药物反应[14-17]。由于我国的食道癌发病率较高，我国开展专门的食管癌防治研究，在食道癌高发区建立研究点，向人们采取宣教食道癌的诊断方法与早期症状，尽量做到早期发现、早期治疗，提高患者的治愈率[18-19]。本研究中，本院选取近三年食道癌患者64例，将其分为对照组与研究组。对照组采用常规诊断方法，研究组采用FISH检测方法，对食管癌患者的诊断效果分别进行判断。研究组FISH的检测结果表明，食道癌可以与3号、17号染色体着丝粒异常拷贝有关（P<0.05），且病例中发生假阴性2例。

随着医疗技术的不断发展，分子病理学的主要研究方面为疾病的亚微观。在分子病理学中对肿瘤进行诊断、分类，主要运用分子与遗传学的方法，设定研究对治疗反应、病情发展有关的标记物，不同的基因、环境因素、生活方式等对肿瘤的影响[20]。本研究中，两组活检组织采用检测方法，对比两组诊断方法的准确度，研究组患者的准确度显著高于对照组（P<0.05），表明分子病理学诊断技术具有更高的准确度以及敏感度。

综上所述，对于食管癌患者进行诊断时，采取更为敏感的FISH检测，显著提高检测的准确度，3号与17号染色体着丝点可以作为诊断食道癌的探针，分子病理学诊断技术可以进一步推广应用。

参考文献

[1]李玉生，胡挺，刘晓昀，等.诊断时间延迟对颅内静脉窦血栓形成患者临床特征及预后相关性的影响[J].医学研究生学报，2017，30（6）：615-618.

[2] Shi M，Feng J，Sun X，et al.Expression of lncRNA RP11-259P1.1 in esophageal squamous cell cancer and its correlation with clinical prognosis[J].Chinese Journal of Cancer Biotherapy，2017，73（3）：32-33.

[3]李亭亭，潘德锋，朱红.血浆微小核糖核酸-1和微小核糖核酸-146b表达水平与急性ST段抬高型心肌梗死诊断及预后的相关性研究[J].中国循环杂志，2017，32（11）23-29.

[4]孙江涛，原翔，宋开放.ERCC1表达与晚期NSCLC吸烟患者预后的相关性研究[J].安徽医科大学学报，2017，52（7）：1069-1072.

[5]刘宇宁，王小兵，王腾，等.巨噬细胞抑制因子-1与早期非小细胞肺癌诊断及预后相关性[J].中国肺癌杂志，2016，19（4）：207-215.

[6] Abudoushalamu A，Madinyet N，Zhang H P，et al.The gene phenotype，protein expression of TP53 gene in Uygurs esophageal carcinoma and its correlation with prognosis[J].China Medical Herald，2018，65（7）：45-46.

[7]阎晓初，杨景.中华医学会病理学分会第二十一次学术会议曁第五届中国病理年会在昆明市召开[J].中华病理学杂志，2016，34（2）：96.

[8]王福栋，宁振，王阿曼，等.胰腺导管内乳头状黏液肿瘤的分子病理学研究进展[J].中国普通外科杂志，2017，26（3）：359-366.

[9] Xiao L U，Feng X S，Gao S G，et al.Expression of STAT3 and Nanog Gene in Esophageal Cancer and Its Correlation with the Clinicopathological Characteristics[J].Journal of Henan University of Science & Technology，2016，7（54）：46-49.

[10]吳旻，陆艳荣，张瑾熔.AGGF1和HIF-1α及VEGF表达与食管鳞癌放疗预后相关性研究[J].中华肿瘤防治杂志，2016，23（17）：1159-1164.

[11]李纯，刘静，关正元，等.TRAP1在食管癌中的表达及对预后的影响[J].临床与实验病理学杂志，2017，33（2）：135-139.

[12] Yang Y，Wei S Z，DU Y X，et al.Expression of p53，Ki-67 and PCNA in esophageal squamous cell carcinoma and correlation with radiotherapy effect and prognosis[J].Journal of Southeast University，2017，53（86）97-99.

[13]杜渐.胆管细胞癌的分子病理学研究进展[J].中国普通外科杂志，2017，26（2）：241-245.

[14]郑唯强.乳腺癌分子病理诊断的机遇与挑战[J].临床与实验病理学杂志，2017，33（5）：473-476.

[15] Inage T，Nakajima T，Fujiwara T，et al.Pathological diagnosis of pulmonary large cell neuroendocrine carcinoma by endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration[J].Thoracic Cancer，2017，15（5 Suppl）：131-133.

[16]李涛，赖春凤，郑敏莉，等.MTHFR基因多态性与客家人群食管癌易感性的关系[J].广东医学，2018，54（7）：45-47.

[17]张冬云，陆蒂青，刘安丽，等.人食管鳞状细胞癌组织TIM-3表达临床意义[J].中华肿瘤防治杂志，2016，54（s2）：35-36.

[18]刘建化，金浩生，田红霞，等.HBsAg阳性肝癌患者预后及病理因素与ALK基因表达的相关性研究[J].中国病理生理杂志，2016，32（5）：841-846.

[19]程云杰，焦文鹏，王军，等.食管小细胞癌肿瘤标志物与淋巴结转移和预后的相关性分析[J].中华肿瘤防治杂志，2016，23（21）：1426-1430.

[20]孙威，孙志强，汪建林，等.食管癌放疗肿瘤病理缓解程度及血管内皮生长因子变化与预后的相关性分析[J].中华放射医学与防护杂志，2018，38（7）：517-523.

（收稿日期：2018-10-18） （本文编辑：周亚杰）