三种侧耳提取物抗氧化活性及对小鼠免疫功能的影响

王晓岩 刘芳芳 包海鹰

（1长春科技学院，吉林长春130600；2吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心，吉林长春130118）

糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）又称平菇，阿魏侧耳（Pleurotus nebrodensis）又称白灵菇，金顶侧耳（Pleurotus citrinipileatus Sing）又称榆黄蘑，三种真菌均隶属于担子菌门（Basidiomycota），伞菌纲（Agaricomycetes），伞菌目（Agaricales），侧耳科（Pleurotaceae），侧耳属（Pleurotus）[1-4]。侧耳属真菌具有药理活性，对人体具有养身保健作用，是一类良好的具有极大药用潜质和食用价值的食用菌[5-6]，侧耳属真菌具有丰富的营养物质，包括多糖、蛋白质、氨基酸、脂肪酸等，这些生物活性成分具有提高机体免疫力、延缓衰老、抗疲劳、抗肿瘤、调节血糖、调节血脂、化学预防[7-9]等重要作用。笔者以三种侧耳子实体为材料研究其不同溶剂提取物的抗氧化活性，并测定了其水提物对小鼠血清中细胞因子表达水平，以评价其免疫功能。

1 材料与方法

1.1 供试材料

糙皮侧耳子实体、阿魏侧耳子实体及金顶侧耳子实体均由吉林农业大学名优参茸中心提供。

试验动物：健康昆明小鼠110只，雌性，体重（22±2）g，年龄6～8周，由长春生物制品有限公司提供，许可证号：SCXK-（吉）2017-0075。

1.2 主要试剂与仪器

苦味酸购自安美实验器材有限公司；胸腺肽肠溶片购自西安迪赛生物药业有限责任公司；总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS法）及小白细胞介素2（IL-2）酶联免疫试剂盒购自碧云天生物技术研究所；酶标仪（TECAN公司Nano Quant infinite 200PRO）。

1.3 成分提取[10]

取干燥的糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳子实体各300 g，粉碎后用1 L石油醚40℃、二氯甲烷50℃、乙酸乙酯55℃、甲醇60℃回流提取3次，减压回收各有机溶剂，得石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇浸膏。

1.4 抗氧化试验

将1.3中得到的提取物分别用80%的乙醇配成浓度为0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL的溶液，参照文献[11]的方法测定其DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除能力，根据文献[12]的方法测定ABTS自由基清除能力。分别以相同浓度的BHT（抗氧剂264）和Trolox（托伦试剂）为对照。

1.5 三种侧耳属水提物对小鼠血清中IL-2、IFN-γ（干扰素）、SOD（超氧化物歧化酶）和GSH-Px（谷胱甘肽过氧化物酶）的影响[13]

水提物制备：将粉碎的糙皮侧耳、阿魏侧耳及金顶侧耳子实体各150 g，加入1 L蒸馏水，65℃提取2 h，重复3次，合并滤液，减压浓缩，冷冻干燥得水提物。小鼠分组及给药：将110只小鼠分组，每组10只。将糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳水提物分别设高（12.5 mg/kg）、中（6.25 mg/kg）、低（3.125 mg/kg）3个剂量浓度（中剂量组根据人给药量的体表面积与小鼠等效计量换算得到[14]）。

小鼠血清中的 IL-2、IFN-γ、SOD和GSH-Px水平的影响：小鼠取血前一晚禁食不禁水，待眼球取血后，将离心备用的血清按照试剂盒说明书检测待测指标，显色终止后450 nm处测量OD值，绘制线性标准曲线，计算各项指标实际浓度并分析。

图1 糙皮侧耳提取物清除DPPH自由基能力

图2 阿魏侧耳提取物清除DPPH自由基能力

图3 金顶侧耳提取物清除DPPH自由基能力

图4 糙皮侧耳提取物清除ABTS自由基能力

2 结果与分析

2.1 三种侧耳属提取物的抗氧化能力

2.1.1 各提取物对DPPH自由基清除作用

由图1、图2、图3可知，糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳不同溶剂的提取物均有一定清除DPPH自由基能力。其中，在金顶侧耳中，乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基能力最高，也是三种侧耳属所有试验组中清除DPPH自由基能力最高的；甲醇提取物次之，二氯甲烷提取物较弱，石油醚提取物最弱。糙皮侧耳与阿魏侧耳的乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基能力也是各侧耳属中最高，石油醚层提取物在各侧耳属中最弱；糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳乙酸乙酯提取物在质量浓度为1.0 mg/mL时，DPPH自由基清除率分别达78.58%、81.79%和91.45%。金顶侧耳的乙酸乙酯提取物IC50为0.172 mg/mL，清除效果明显高于其他溶剂提取物，并且高于阳性对照；阿魏侧耳乙酸乙酯提取物IC50为0.186 mg/mL，清除效果较明显，效果弱于金顶侧耳及阳性对照，但高于糙皮侧耳（糙皮侧耳乙酸乙酯提取物IC50为0.206 mg/mL）。

2.1.2 对ABTS自由基清除作用

由图4、图5、图6可知，糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳相同提取物在相同浓度下对ABTS的清除能力相近，其中乙酸乙酯提取物的清除能力最强，糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳乙酸乙酯提取物在质量浓度为1.0 mg/mL时，ABTS自由基清除率分别为55.72%、56.37%和65.24%，糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳乙酸乙酯提取物IC50分别为0.636 mg/mL、0.581 mg/mL和0.472 mg/mL，其余溶剂提取物对ABTS清除率很弱，IC50均大于1 mg/mL。

2.2 三种侧耳属水提物对小鼠血清IL-2、IFN-γ、SOD和GSH-Px表达水平的影响

结果表明，小鼠灌胃不同剂量的糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳水提物20 d后，金顶侧耳水提物3个剂量处理的小鼠血清中IL-2表达水平明显高于其他侧耳属的对应剂量及阳性对照；阿魏侧耳高剂量处理的小鼠血清中IL-2表达水平高于糙皮侧耳高剂量及阳性对照；糙皮侧耳高剂量处理的小鼠血清中IL-2表达水平略低于阳性对照；但所有剂量均与阴性对照有极显著差异。金顶侧耳与阿魏侧耳高剂量处理的小鼠血清中IFN-γ表达水平均高于阳性对照，糙皮侧耳高剂量处理的小鼠血清中IFN-γ表达水平略低于阳性对照，但高于阴性。金顶侧耳与阿魏侧耳高剂量处理的小鼠血清中GSH-Px表达水平略高于阳性，糙皮侧耳高剂量处理的小鼠血清中GSH-Px低于阳性组，但明显高于阴性组。三种侧耳不同剂量处理小鼠血清中SOD表达水平与阳性组相差无几，但均高于阴性组。

图5 阿魏侧耳提取物清除ABTS自由基能力

图6 金顶侧耳提取物清除ABTS自由基能力

图7 三种侧耳属水提液对小鼠血清中IL-2水平的影响

图8 三种侧耳属水提液对小鼠血清中IFN-γ水平的影响

图9 三种侧耳属水提液对小鼠血清中GSH-Px水平的影响

图10三种侧耳属水提液对小鼠血清中SOD水平的影响

3 小结与讨论

在清除DPPH自由基抗氧化能力中，糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳均有不同程度的抗氧化能力，并且在质量范围内均呈现一定的量效关系，其中糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳乙酸乙酯提取物对DPPH及ABTS的清除率最好。这三种侧耳属真菌能够诱导IFN-γ、SOD和GSH-Px等细胞因子表达水平，其中金顶侧耳水提物效果明显，从而提高机体免疫力，可预防癌症、高血压、糖尿病等疾病的发生[15-16]。

因此，糙皮侧耳、阿魏侧耳与金顶侧耳有开发为抗氧化产品或免疫功能产品的良好前景。