STAT 3、versican在胆囊癌中的表达及与患者临床特征的关系

胡晟，刘永国，陈翔

重庆市第四人民医院肝胆外科，重庆400014

胆囊癌患者的预后较差，且生活质量明显下降[1-2]。在对胆囊癌病情进展的内在机理进行研究的过程中发现，肿瘤调控蛋白的改变在胆囊癌病情进展过程中发挥重要作用。信号转导蛋白和转录激活物3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表达上调，能够通过提高肿瘤细胞内肿瘤信号通路的激活程度，提高肿瘤基因的转录激活程度，进而促进胆囊上皮细胞的早期异常分裂[3]。多能蛋白聚糖（versican）的表达，能够通过提高胆囊癌细胞对邻近间质组织成分的黏附和浸润能力，促进胆囊癌细胞的扩散和转移[4]。本研究对胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT3、versican蛋白的表达情况进行分析，并探讨其与患者临床特征的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月至2017年7月重庆市第四人民医院收治的胆囊癌患者。纳入标准：①符合人民卫生出版社《外科学》第8版中胆囊癌的诊断标准[5]；②经术后病理学检查确诊为胆囊癌；③年龄≤79岁；④TNM分期为Ⅰ～Ⅲ期。排除标准：①合并其他部位恶性肿瘤；②获取标本前，患者具有放化疗史。根据纳入和排除标准，本研究共纳入胆囊癌患者58例作为胆囊癌组。另外，选取同期因胆囊息肉于重庆市第四人民医院行手术切除的胆囊息肉患者80例作为胆囊息肉组，所有患者均符合人民卫生出版社《外科学》第8版中胆囊息肉的诊断标准[5]。胆囊癌组患者中，男28例，女30例；年龄47～76岁，平均（58.6±8.0）岁；组织学分化程度：高分化16例，中分化23例，低分化19例；有淋巴结转移30例，无淋巴结转移28例；TNM分期：I期14例，Ⅱ期23例，Ⅲ期21例。胆囊息肉组患者中，男40例，女 40例；年龄 43～79岁，平均（59.2±13.0）岁。收集胆囊癌组患者的胆囊癌组织标本进行研究，并选取胆囊息肉组患者的胆囊息肉组织标本作为对照。

1.2 检测方法

采用免疫组化染色法检测胆囊癌组织和胆囊息肉组织中STAT3、versican蛋白的表达。采用二甲苯将组织石蜡切片常规脱蜡至水，5%双氧水常温孵育10 min，采用磷酸盐缓冲液孵育5 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min；5%山羊血清抗体封闭10 min，不冲洗，滴加一抗（购自英国Abcam公司，浓度1∶500），4℃冰箱孵育过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min；滴加生物素标记的二抗（购自北京康泰生物，浓度1∶1000），37℃孵育30 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min；滴加第二代辣根过氧化物酶标记的工作液体，37℃孵育10 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，显色后采用乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片，镜下观察。

1.3 判定标准

免疫组化染色评分标准：以细胞质内出现淡黄色、黄色、棕黄色、褐色或黑色颗粒为STAT3蛋白阳性表达，以细胞核或细胞质内出现黄色、橙色、棕色或褐色颗粒为versican蛋白阳性表达。根据染色强度进行评分：0分，未染色；1分，淡黄色；2分，棕黄色；3分，褐色、黑色。根据阳性细胞所占比例进行评分：1分，阳性细胞所占比例≤10%；2分，阳性细胞所占比例为11%～50%；3分，阳性细胞所占比例为51%～75%；4分，阳性细胞所占比例≥76%。将着色程度与阳性细胞所占比例评分相乘，最终得分＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0软件对数据进行分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 STAT 3蛋白、versican蛋白表达情况的比较

胆囊癌组织中STAT3蛋白、versican蛋白的阳性表达率均明显高于胆囊息肉组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 不同组织中STAT 3蛋白、Versican蛋白阳性表达情况的比较[ n（%）]

2.2 胆囊癌组织中STAT 3蛋白、versican蛋白表达与胆囊癌患者临床特征的关系

TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移的胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT3蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=5.100、4.592，P＜0.05）；不同分化程度胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT3蛋白的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。TNM分期为Ⅲ期、分化程度为低分化、有淋巴结转移的胆囊癌患者胆囊癌组织中versican蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为中高分化、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=4.196、5.100、7.067，P＜0.05）。（表2）

表2 不同临床特征胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT 3蛋白、versican蛋白的阳性表达情况（ n=58）

3 讨论

胆道系统基础性疾病、胆囊息肉或有胆囊癌家族史等因素，均能够促进胆囊癌的发生[6]。已有研究显示，胆囊癌患者的5年生存率不足40%，胆囊癌患者接受综合性治疗方案治疗后，总体生存时间不足38个月[7-9]。目前，临床仍缺乏对胆囊癌患者病情评估的肿瘤相关指标。本研究通过对胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT3、versican蛋白的表达情况进行分析，旨在揭示胆囊癌疾病进展机制的同时，为临床上胆囊癌的病情评估提供新的参考指标。

STAT3是信号转导相关因子，其表达水平升高时能够通过激活下游丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）或信号转导与转录激活子（signal transducer and activator of tranions，STAT）信号通路，提高肿瘤细胞转录上游的基因激活程度[10]。已有研究表明，STAT3能够促进肿瘤细胞纺锤体的异常分裂，增加肿瘤基因错配修复的风险[11]。versican是肿瘤细胞间糖蛋白黏附因子，能够通过提高肿瘤细胞的黏附和浸润能力，促进肿瘤细胞间质成分的分解，从而为肿瘤细胞的扩散提供前提。相关研究对STAT3表达与胆囊癌的关系进行探讨，结果发现相比于胆囊结石良性组织，胆囊癌病灶组织中STAT3蛋白表达水平明显升高，但缺乏对versican表达的分析研究[12-13]。

本研究结果显示，胆囊癌组织中STAT3蛋白、versican蛋白的阳性表达率均明显高于胆囊息肉组织（P＜0.01），提示STAT3、versican蛋白可能与胆囊癌的发生有关。李福利等[14]研究发现，在胆囊癌患者中，versican的阳性表达率明显升高，相比于无淋巴结转移的患者，在发生明显腹腔内转移或淋巴结转移的患者中，versican蛋白的阳性表达率可进一步上升。本研究在探讨STAT3、versican蛋白表达与胆囊癌患者临床特征的关系过程中发现，TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT3蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者（P＜0.05），提示STAT3蛋白表达能够影响到胆囊癌患者的病情进展。但本研究并未发现不同分化程度胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT3的表达差异。本研究还发现，TNM分期为Ⅲ期、分化程度为低分化、有淋巴结转移胆囊癌患者胆囊癌组织中versican蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为中高分化、无淋巴结转移的患者（P＜0.05），提示versican的表达与胆囊癌患者病情进展同样密切相关，分析其原因可能与以下两点有关[15-16]：①STAT3表达水平增高，能够影响到肿瘤细胞基因错配修复能力，导致癌基因的异常激活；②versican水平增高，能够提高肿瘤细胞生物学特征的恶化程度，加剧肿瘤细胞浸润能力的改变。因此，临床上可以通过检测STAT3、versican等指标，对胆囊癌患者的临床病情进行评估。

综上所述，胆囊癌患者胆囊癌组织中STAT3、versican蛋白的阳性表达率均明显升高，而且STAT3、versican蛋白的表达均与胆囊癌患者的临床分期及淋巴结转移有关。希望后续研究能够继续深入探讨STAT3、versican蛋白表达与胆囊癌患者临床转归的关系。