柴胡皂苷D对非酒精性脂肪性肝炎大鼠糖脂代谢紊乱的影响*

阮 君 肖铁刚 王 兵△

1.上海交通大学附属第六人民医院中医科 (上海， 200233) 2.上海中医药大学附属上海市中西医结合医院

柴胡皂苷含量占柴胡总干重的7%[1]，其中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷D被认为是柴胡药理活性最强的物质[2,3]。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发病率在世界范围内呈上升趋势，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是NAFLD的一个临床和组织学分支，与全球人口死亡率、肝硬化和终末期肝病、心血管疾病死亡率的增加以及与肝相关和非肝相关癌症发病率的增加有关，本文研究柴胡皂苷D对NASH大鼠糖脂代谢和肝脏脂肪变性的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级雄性Wistar大鼠44只，体重(130±15)g，由上海斯莱克试验动物有限责任公司提供，动物生产许可证号[SCXK(沪)2007-0005]，自由进食饮水，12 h明暗交替照明，适应性普通饲料喂养1 周。

1.2 药物与试剂 柴胡皂苷D由中国药品生物制品研究所提供；罗格列酮片，葛兰素史克(天津)有限公司，批号：H20020475；碘125胰岛素放射免疫分析试剂盒，购于上海西唐生物有限公司。

1. 3 造模和分组方法 44只雄性Wistar 大鼠随机分为空白对照组(C) 10 只和造模组34只。C组大鼠给予普通饲料喂养，造模组大鼠给予高脂高糖饲料(68%基础饲料+15%猪油+15%蔗糖+2%胆固醇)喂养。以上饲料均由中国科学院上海斯莱克实验动物有限公司提供。于第2、4、6、8周末各处死1只造模大鼠，行肝组织病理切片HE染色，判断造模情况。造模8周后，将造模成功大鼠随机分为模型组(M，n=10)、罗格列酮组(R，n=10)、柴胡皂苷D组(CD，n=10)。

1.4 给药方法 CD组大鼠以100 mg/kg剂量的柴胡皂苷D灌胃R组大鼠以0.4 g/kg剂量的罗格列酮的灌胃，均1次/d，连续4周。M组和C组大鼠均以等量生理盐水灌胃。CD、R和M组大鼠继续给予高脂高糖饲料，C组大鼠给予普通饲料。用药4周后处死大鼠取材。

1.5 观察指标 观察大鼠行为、状态、食欲、毛发及死亡情况；称量体重；观察肝脏形态，包括重量、外形、色泽、质地；计算肝体比(肝体比=肝脏湿重/体重×100%) 。检测血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST、FFA、TBA、FBG及FINS水平，计算IRI：IRI=(FBG×FINS)/22.5。

1.6 病理学检测 取各组大鼠肝右叶相同部位大小(1.0×0.8×0.3)cm3两块肝组织放入 4% 甲醛中固定，石蜡包盐、切片后行HE染色，光镜下观察各组大鼠肝脏脂肪变性和炎症程度。

2 结果

2.1 4组大鼠体重、肝湿重、肝体比测定情况 见表1。

表1 4组大鼠体重、肝湿重、肝体比比较

2.2 4组大鼠肝功能检测结果 见表2。

表2 4组大鼠肝功能结果比较

2.3 4组大鼠总胆汁酸、游离脂肪酸检测结果 见表3。

表3 4组大鼠TBA、FFA结果比较

2.4 4组大鼠血脂指标检测结果 见表4。

表4 4组大鼠血脂情况比较

2.5 4组大鼠血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数结果 见表5。

表5 4组大鼠血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数比较

2.6 4组大鼠肝脂肪变性和炎症情况 见表6。

表6 4组大鼠肝脂肪变性、炎症程度比较

3 讨论

非酒精性脂肪性肝病以全身性代谢障碍为主要特点,归属中医“肝癖”“积聚”“胁痛”“痰浊”等范畴[4]。“凡脏腑十二经之气化, 皆必藉肝脏之气化以鼓舞之, 始能调畅而不病”(清代周学海《读医随笔》)”，肝脏为气机升降之枢, 有研究认为肝主疏泄对气机的调节功能为脂类代谢主要途径[5]。脾失健运，肝气郁结，最终导致气机郁阻、痰瘀互结是NAFLD的发病趋势和特点[6]。

柴胡为伞形科植物柴胡(DC.)或狭叶柴胡(Willd.)的干燥根，有“北柴胡”“南柴胡”之分[7]，以柴胡为主药的方剂对防治脂肪肝有良好效果，如小柴胡汤及其类方大柴胡汤、柴胡疏肝散、柴胡桂枝干姜汤、柴胡加龙骨牡蛎汤、柴苓汤等[8]。柴胡皂苷D的药理作用较为广泛，包括抗肿瘤、抗癌、保肝、镇静、抗癫痫及雌激素样作用等[9],且疗效确切。

糖脂代谢紊乱包括胰岛素抵抗、糖耐量异常和脂质代谢改变，被认为是NAFLD和NASH的分子发病机制。机体营养过剩时脂质转录因子包括碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)以及甾醇调节元件结合蛋白-1c (SREBP-1c)上调，导致脂肪生成基因的表达增加，乙酰辅酶a羧化酶(ACC)升高，促进新生脂肪生成(NDL)，抑制肝内脂肪酸氧化作用来驱动脂肪变性[10]。有实验证明，NAFLD患者不仅肝新生脂肪生成升高，而且血浆FFAs也升高，胰岛素抵抗(IR)时，抑制激素敏感脂肪酶的作用消失，导致脂肪组织向血液中大量释放游离脂肪酸[11]。本次实验结果显示M组大鼠血清TC、TG和FFA均升高，与上述结果符合，柴胡皂苷D可降低NASH大鼠血脂、血糖和游离脂肪酸水平，改善糖脂代谢紊乱状态。

IR与NAFLD之间存在关联，并且IR还是一种独立的危险因素，可用于预测NAFLD的发生发展[12，13]。本研究发现，M组大鼠血糖、胰岛素含量和胰岛素抵抗均有增加，经过柴胡皂苷D治疗后，血糖、胰岛素含量和胰岛素抵抗均明显降低，柴胡皂苷D可有效改善胰岛素抵抗，从而减轻NASH。

实验表明柴胡皂苷D具有利胆保肝作用。戴维等[14]证明柴胡皂苷D能够通过降低胆汁酸的浓度，抑制肝细胞钙超载，上调 STIM1 mRNA 的表达，进而减轻阻塞性黄疸对大鼠肝脏的损伤。法尼醇X受体(FXR)作为胆汁酸相关受体，当胆汁酸增加到一定程度时，可以通过诱导 Fxr 来调节胆汁酸转运基因的表达，达到调节胆汁酸平衡的作用。如柴胡皂苷D通过诱导 Abcc4 mRNA 表达促进胆汁酸从肝细胞进入体循环进而降低胆汁酸的含量；在回肠中，柴胡皂苷D通过诱导 Mdr1 mRNA 表达促进其外排来调节胆汁酸的含量[15]。本研究结果也证明柴胡皂苷D能降低血清总胆汁酸水平、降低ALT，对NASH大鼠有利胆保肝之效。