循环肿瘤细胞对非小细胞肺癌术后复发转移的预测价值

吴晓明，刘渊源，陈家令

河南省胸科医院胸外科，郑州4500000

在人类所有恶性肿瘤中，肺癌的增长尤其迅速，已成为全球第一大肿瘤，发病率和病死率均居首位，成为严重的公共健康问题[1]。按病理分型，肺癌可分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，前者占85%左右[2]。由于肺癌早期症状缺乏特异性，多数患者确诊时已处于中晚期，一般错过了手术切除治疗时机。研究表明，早期肺癌患者术后仍有近27%死于复发转移[3]。因此，有效预测肺癌的复发转移在其临床治疗中具有重要意义。肿瘤转移是造成肿瘤患者死亡的主要原因，血液循环和淋巴循环是肿瘤转移的主要途径，肿瘤细胞进入血液循环或淋巴循环，即为循环肿瘤细胞，进而形成转移灶。国内外研究结果表明，相较于影像学检查和组织病理学检查，循环肿瘤细胞检测在评估恶性肿瘤中具有显著优势[4]。本研究分析了循环肿瘤细胞对非小细胞肺癌术后复发转移的预测价值，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2015年5月至2016年5月于河南省胸科医院接受手术治疗的120例非小细胞肺癌患者为研究对象。纳入标准：①均经组织病理学检查确诊为非小细胞肺癌；②年龄≥18岁；③预计生存期＞3个月。排除标准：①合并严重肝肾功能异常的患者；②妊娠期患者；③合并糖尿病的患者；④合并其他恶性肿瘤的患者；⑤有移植器官的患者。120例患者中，男72例，女48例；年龄36～68岁，平均（48.8±9.6）岁；鳞癌82例，腺癌38例。本研究经医院医学伦理委员会审批通过，所有患者均对本研究知情并签署知情同意书。

1.2 检测方法

循环肿瘤细胞的检测方法：①样本采集。采集4 ml全血样本，置于乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝管中，上下颠倒充分混匀，置于4℃冰箱中保存。24 h内对样本进行检测。②富集样本。采取密度梯度离心法对样本进行富集，用商品化分离液将血液标本加入惰性梯度介质中进行离心沉降。根据样本中细胞密度的差异，对离心后的各种细胞成分进行分层，由下向上依次为红细胞、中性粒细胞、分离液、单个核细胞（包括循环肿瘤细胞）和血浆。使用Onco Quick带有多孔筛的离心管盛装样本。③循环肿瘤细胞检测。使用循环肿瘤细胞检测分析系统对样本中的循环肿瘤细胞数量进行统计。根据术后循环肿瘤细胞测量值将120例非小细胞肺癌患者分为两组，测量值≥1为A组，测量值=0为B组。

1.3 观察指标

比较术前和术后非小细胞肺癌患者的循环肿瘤细胞测量值及A组和B组患者的复发转移率。观察并比较复发转移和未复发转移患者的性别、年龄、手术时间、TNM分期、分化程度及术后循环肿瘤细胞测量值。分析非小细胞肺癌患者术后复发转移的影响因素及其与复发转移的相关性。

1.4 随访方法

所有患者均随访2年，统计患者的复发转移情况，随访截止时间为2018年5月。随访方法为电话随访及门诊随访。

1.5 统计学方法

采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析，计量数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。多因素分析采用Logistic回归分析，相关性分析采用Pearson相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 术前和术后循环肿瘤细胞测量值的比较

术后120例非小细胞肺癌患者的循环肿瘤细胞测量值为（11.65±10.55）/ml，明显低于术前的（33.25±32.85）/ml，差异有统计学意义（t=9.08，P＜0.01）。

2.2 A组和 B组患者复发转移率的比较

根据术后循环肿瘤细胞测量值，A组75例（62.5%，75/120）患者，复发转移率为64.0%（48/75）；B组45例（37.5%，45/120）患者，复发转移率为35.6%（16/45）。B组患者的复发转移率明显低于A组，差异有统计学意义（χ2=9.68，P＜0.01）。

2.3 复发转移和未复发转移非小细胞肺癌患者临床特征的比较

复发转移和未复发转移非小细胞肺癌患者的性别、年龄和手术时间比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。复发转移和未复发转移非小细胞肺癌患者的TNM分期、分化程度和术后循环肿瘤细胞测量值比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 复发转移和未复发转移非小细胞肺癌患者临床特征的比较

2.4 非小细胞肺癌患者术后复发转移影响因素的多因素分析

以术后循环肿瘤细胞测量值、TNM分期、分化程度为自变量，以术后复发转移为因变量进行Lo-gistic回归分析，结果显示，术后循环肿瘤细胞测量值≥5/ml、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期和分化程度为中低分化均是非小细胞肺癌患者术后复发转移的独立危险因素（P＜0.01）。（表2）

表2 120例非小细胞肺癌患者术后复发转移影响因素的多因素Logistic回归分析

2.5 相关性分析

Pearson相关性分析结果显示，非小细胞肺癌患者术后循环肿瘤细胞测量值、TNM分期与肿瘤复发转移呈正相关（r=4.181、3.792，P＜0.05），分化程度与肿瘤复发转移呈负相关（r=-3.374，P＜0.05）。

3 讨论

研究表明，肿瘤细胞可通过血液和淋巴结转移后形成转移灶，手术治疗后血液中的残余肿瘤细胞可能是造成肿瘤复发转移的重要因素[5]。非小细胞肺癌是肺癌最主要的类型，尽管近些年肿瘤防治水平明显提高，但肺癌患者的5年生存率仍较低，术后复发转移是造成患者死亡的主要原因。国内外的研究指出，与病理组织学检查比较，液体活检在疾病的诊断和预测中具有更明显的优势[6-8]。动态监测循环肿瘤细胞对恶性肿瘤患者的疗效评估和复发预测具有重要的参考价值。循环肿瘤细胞检测的样本更容易获取，且能够反复取样，因此在临床上具有广泛的应用前景[9]。

研究表明，健康人的血液中也有循环肿瘤细胞，数量为（0.05±0.26）/7.5 ml，而乳腺癌、直肠癌和前列腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞检出≥2/7.5 ml时，出现转移的风险较大，由此可以看出循环肿瘤细胞可能在肿瘤的复发转移过程中发挥重要作用[10]。本研究检测了术前和术后非小细胞肺癌患者的循环肿瘤细胞数量，结果显示，术后非小细胞肺癌患者的循环肿瘤细胞测量值明显低于术前（P＜0.01）。在已有的报道中，直肠癌、卵巢癌、前列腺癌患者中也获得同样的结果[11]。循环肿瘤细胞是指恶性肿瘤从原发部位脱落进入血液循环，本研究结果表明，术后循环肿瘤细胞测量值≥1的患者的复发转移率明显高于循环肿瘤细胞测量值=0的患者，说明循环肿瘤细胞与非小细胞肺癌患者术后复发转移具有一定的关系。本研究结果还表明，复发转移和未复发转移非小细胞肺癌患者的TNM分期、分化程度和术后循环肿瘤细胞测量值比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。林赟等[12]研究纳入100例非小细胞肺癌患者，随访2年后，复发转移53例，未复发转移47例，复发转移与未复发转移患者的TNM分期、分化程度和循环肿瘤细胞测量值比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），与本研究结果一致。TNM分期越高表示肿瘤进展速度越快，是术后复发转移的危险因素。有研究指出，非小细胞肺癌的分化程度越低，肿瘤细胞的形态结构越差，与正常细胞的差异越大，恶性程度越高，分化程度低是非小细胞肺癌患者术后复发的危险因素[13]。本研究多因素Logistic回归分析结果表明，术后循环肿瘤细胞测量值≥5/ml、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期和分化程度为中低分化是非小细胞肺癌患者术后复发转移的独立危险因素（P＜0.01）。相关性分析结果表明，非小细胞肺癌患者术后循环肿瘤细胞测量值、TNM分期与肿瘤复发转移均呈正相关，分化程度与肿瘤复发转移呈负相关（P＜0.05）。循环肿瘤细胞是一种量化性指标，能够帮助临床医师对患者的治疗效果和预后做出判断，从而制订针对性的预防及治疗策略。

综上所述，非小细胞肺癌患者术后循环肿瘤细胞测量值明显降低，且与肿瘤复发转移呈正相关，对预后评估具有重要的指导价值。因此，可将循环肿瘤细胞测量值作为评估非小细胞肺癌患者术后复发转移的重要参考依据。