Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白在直肠癌组织中的表达特点及意义

雷哲，高改云，倪猛，杨旭

(南阳市中心医院，河南 南阳 473400)

随着人们饮食习惯的改变，结直肠癌的发生率明显的上调，流行病学研究证实，结直肠癌的发病率接近373～482/10万人左右[1]。临床上结直肠癌治疗后的五年内病死率仍然超过35%，治疗后的无瘤生存时间仍然不足48个月[2]。

不同的肿瘤相关蛋白能够影响结直肠上皮黏膜腺体细胞的异常病变，促进了消化系统恶性肿瘤的发生。Fascin-1蛋白是重要的肌动蛋白相关因子，其能够提高癌细胞的变形能力，进而提高癌细胞对于临近正常上皮组织的浸润风险；HSPB1蛋白是热休克蛋白家族成员，其表达浓度的改变能够影响癌细胞的增殖和耐药过程，提高癌细胞对于基底膜组织的浸润风险。部分研究者报道了Fascin-1蛋白在卵巢癌或者食管癌患者病灶组织中的表达情况，认为高表达的Fascin-1蛋白能够显著促进卵巢癌患者临床分期的进展，降低放化疗的敏感性[3，4]，但对于 Fascin-1与 HSPB1蛋白与结直肠癌的关系研究不足。为了揭示Fascin-1与HSPB1蛋白与结直肠癌发病的关系，本次研究收集了相关结直肠癌病例，探讨了Fascin-1与HSPB1蛋白的表达特点及与患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2015年3月-2017年5月收集的100例结直肠癌术后组织 （病灶组）、50例符合标准的为癌旁组织标本（癌旁组）。病灶组，年龄 39～79岁，平均为 56.5±12.8岁，男 60例、女40例，TNM分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期30例、Ⅲ期38例、Ⅳ期14例；淋巴结转移63例；组织分化：高分化26例、中分化37例、低分化37例；结肠癌57例、直肠癌43例。癌旁组，年龄42～77岁，平均为57.8±13.0岁，男28例、女22例。两组研究对象的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：⑴结肠癌、直肠癌的诊断以病理学检查结果作为标准[5]；⑵结直肠癌患者获取癌组织标本前未进行放化疗、免疫治疗；⑶本次研究获得的病理学标本均来源于术后；⑷患者年龄＜80岁。排除标准⑴未经病理学证实；⑵转移性肿瘤；⑶既往伴有风湿免疫系统疾病；⑷既往具有开腹手术病史或长期炎症病史。

1.2 免疫组化检测方法 所有组织标本经石蜡包埋后作连续切片，厚度约为4mm，采用免疫组化链霉卵白素一生物素复合体法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基联苯胺(diamionben zidene，DAB)显色。Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白通用型二抗以及SP试剂盒和DAB显色盒均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。以阳性片及PBS代替一抗分别作为阳性及阴性对照，高倍显微镜下观察Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白的表达情况，具体染色步骤严格按照SP试剂盒说明书进行操作。

1.3 免疫组化判断标准 免疫组化结果判定：Fascin-1蛋白阳性着色定位于细胞质、HSPB1蛋白阳性着色定位于细胞质及细胞膜，阳性着色呈黄色、棕黄色、褐色表达，⑴根据着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；⑵根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1分、阳性细胞所占比例11%～50%为2分、阳性细胞数51%～75%为3分、阳性细胞数所占比例＞75%为4分，两种积分相乘总分＜3分为阴性、≥3分为阳性。

2 结果

2.1 两组标本中的Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白检测结果比较 病灶组中的Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白阳性表达率56.00%、78.00%均显著的高于癌旁组的5.00%、15.00%，差异具有统计学意义（P＜0.05）；见表 1。

表1 两组标本中的Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白检测结果比较[n（%）]

2.2 结直肠癌组织中的Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白相关关系 结直肠癌组织中的Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白阳性表达呈显著的正相关关系（Spearman R=0.502，P＜0.000）；见表 2。

表2 Spearman秩相关分析结果

2.3 结直肠癌组织中的Fascin-1蛋白与HSPB1蛋白表达与患者临床病理学特征的关系 结直肠癌组织中的Fascin-1蛋白在不同TNM分期、是否发生淋巴结转移组织中阳性表达率差异具有统计学意义（P＜0.05）；见表 3。

表3 Fascin-1蛋白表达与结直肠癌患者临床病理学特征的关系

结直肠癌组织中的HSPB1蛋白在不同TNM分期、不同分化程度、是否发生淋巴结转移组织中阳性表达率差异具有统计学意义 （P＜0.05）；见表4。

表4 HSPB1蛋白表达与结直肠癌患者临床病理学特征的关系

3 讨论

在持续性的病理性因素刺激下，结直肠腺体细胞的异常增殖风险可以显著上升。特别是在合并有家族性肠道息肉的人群中，结直肠癌的发生风险更高，临床病死率等生存预后指标更差[6]。长期的临床随访观察研究认为，结直肠癌的五年生存率不足35%[7]，手术、放化疗等综合性治疗措施治疗后的无瘤生存时间不足48个月[8]。免疫治疗或者靶向治疗近年来被认为能够显著改善恶性肿瘤患者的生存预后，改善结直肠癌患者的病情转归。而本次研究对于相关肿瘤相关蛋白的研究，能够对于结直肠癌的发生和发展的相关标记物的筛选提供一定的参考。

Fascin-1能够通过提高肌动蛋白的活性，促进癌细胞的粘附和转移过程。Fascin-1蛋白还能够通过激活多种肿瘤相关生物学信号通路，提高癌细胞DNA上游的转录活性，增强癌细胞的浸润能力。相关文献研究者认为，Fascin-1能够显著提高结直肠癌患者的发病风险，导致肿瘤患者放化疗治疗敏感性的下降[9]，但对于其与患者临床病理特征的关系研究不足；HSPB1是热休克蛋白家族的重要成员，HSPB1的高表达能够通过影响到癌细胞的周期调控，提高癌细胞G1/S期的细胞比例，进而影响到早期恶性肿瘤的发生过程。基础方面的研究也认为，HSPB1的高表达能够诱导癌细胞的分化成熟障碍，导致低分化或者中低分化的细胞比例的提高[10]。部分研究探讨了HSPB1蛋白的表达与鼻咽癌的关系，认为HSPB1蛋白表达浓度的上升能够显著促进鼻咽癌患者淋巴结转移或者临床分期的进展[11]，但缺乏对于HSPB1与结直肠癌的关系研究。

免疫组化的结果分析可见，Fascin-1与HSPB1在结直肠癌患者病灶组织中的表达阳性率均明显的上升，高于癌旁组织，差异较为明显，提示了Fascin-1与HSPB1蛋白均可能参与到了结直肠癌的病情进展过程，通过回顾分析相关的临床文献，笔者认为Fascin-1与HSPB1的高表达对于结直肠癌的发生影响可能与下列几个方面的因素有关[12-14]：⑴Fascin-1蛋白的上升能够提高癌细胞的浸润能力，导致癌细胞对于肠道黏膜基底膜组织的突破风险的上调；⑵HSPB1蛋白的高表达能够提高癌细胞DNA的扩增速度，增加癌细胞的持续性异常核分裂的发生。戚峰等[15]研究者也认为，在结直肠癌患者中，Fascin-1基因表达水平可平均上升35%以上，特别是在短期内肿瘤临床分期进展较快或者病灶明显增大的患者中，Fascin-1基因表达水平可进一步的上升。相关关系分析可见，Fascin-1与HSPB1的表达具有一定的相关关系，提示二者在促进结直肠癌的发生发展过程中可能发挥了一定的协同作用，但具体的内在机制仍然需要后续基础研究的探索。临床病理特征的分析研究可见，在发生了淋巴结转移或者临床分期较晚的患者中，Fascin-1蛋白的表达阳性率可显著的上升，提示了Fascin-1蛋白与结直肠癌患者的临床病理特征密切相关，这主要由于Fascin-1蛋白的高表达能够影响到癌细胞对于临近正常组织的浸润能力，提高癌细胞对于淋巴结内皮细胞的粘附能力等有关。而在发生了淋巴结转移、临床分期较晚或者癌细胞分化程度较差的患者中，HSPB1的表达阳性率可进一步的上升，提示了HSPB1蛋白的表达与结直肠癌患者的临床病理特征同样具有密切的关系，这主要由于HSPB1蛋白的表达能够影响到癌细胞生物学特征的改变，导致癌细胞的分化成熟异常等病理机制的进展。

综上所述，Fascin-1与HSPB1在结直肠癌患者中表达明显上升，同时二者的表达与肿瘤患者的临床病理特征密切相关。