血清Toll样受体4和NF-kB联合检测在早产儿脑损伤中的诊断价值研究

张 洋，王显赫*,吴祥红,王 影,常 璐

(1.佳木斯大学附属第一医院 儿内一科，黑龙江 佳木斯154000；2.佳木斯大学附属第一医院 儿内二科，黑龙江 佳木斯154000;3.佳木斯大学，黑龙江 佳木斯154007)

早产儿脑损伤(Brain damage of prematurity,BIPI)是严重威胁新生儿健康和导致其致残、致死的主要原因[1]。通常，BIPI导致早产儿神经发育障碍、运动功能缺损、认知及行为异常[2,3]。随着围产医学的不断进步，早产儿的存活率显著提高，但BIPI的发生率也却逐渐增加[4]。研究表明，胎龄、宫内严重感染及剖宫产均是导致BIPI的重要因素[5]。

Toll样受体4 (Toll-like receptor-4,TLR4)作为一种胞外富含亮氨酸重复域和细胞质信号域的跨膜受体蛋白，能激活NF-kB、TNF-α、IL-1β等，从而引起炎症级联反应和调节前炎症因子的释放[6,7]。Cui HX等发现花青素能够通过抑制TLR4/NF-kB信号通路，从而促进脑缺血再灌注损伤神经功能的恢复[8]。Sun Y等指出体育锻炼将抑制TLR4/NF-kB信号通路的激活，从而减少炎症因子的释放，最终促进脊髓损伤患者神经功能的恢复[9]。在本实验中，我们通过联合检测BIPI患者TLR4与NF-kB的表达，分析两者在BIPI诊断中的价值，从而为BIPI患者的临床诊断提供重要依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年12月至2018年12月我院新生儿科收治的BIPI 患者30例作为实验组。同时，选取同期住院的无脑损伤早产儿30例作为对照组。其中，所有入选研究对象均为男婴，胎龄为30±2周，出生体重为1 500 g±200 g。此外，排除母亲患甲状腺疾病，胎儿中枢神经系统畸形、、先天性心脏病、遗传代谢紊乱、胆红素脑病、TORCH感染等。

1.2 BIPI诊断标准

根据2012版《早产儿脑损伤诊断与防治专家共识》和结合头颅MRI进行诊断。按照神经病理学分类及方法，脑损伤纳入标准为：①脑白质损伤(whitematterdamage,WMD)，PVL、脑室周围出血性梗死、缺血性脑梗死、晚期的脑室扩张；②非脑实质区的出血及其他部位损伤，如GMH-IVH、IVH、蛛网膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage，SAH)、脉络丛出血、小脑、基底节、脑干出血等。常规头颅MRI表现：①白质非出血性损伤：早期T1WI可见白质区域的高信号，T2WI则为低信号或者等信号；后期白质区域的T1WI信号消失或表现为低信号或白质容积减少，T2WI呈现为高信号或者表现为弥漫性过度高信号，严重者有脑室形态改变。②出血在头颅MRI的表现：早期出血呈现在T1WI上为高信号，T2WI上为低信号，后期在T1WI、T2WI上出血区均为高信号。根据头颅MRI结果，分为脑损伤组及非脑损伤组，出现分类中任何一种形式即纳入实验组。

1.3 样本采集

分别采集出生后1 d、3 d、7 d实验组和对照组患者外周静脉血5 ml，后置于高速冷冻离心机中离心10分钟(3 000 r/min)。收集上清液于EP管内，-80℃超低温冰箱保存备用。

1.4 检测方法

采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)分别检测实验组和对照组样本中TLR4与NF-kB的表达水平。试剂盒购买自美国RayBiotech公司，具体实验方法按照说明书进行。

1.5 统计学方法

通过SPSS19.0统计学软件对实验数据进行统计学处理，计量资料表示为均数±标准差。采用T检验进行比较，P<0.05表示有统计学差异。

2 结果

2.1 一般资料及常规生化指标结果

各组别之间进行比较，结果表明对照组和实验组性别、胎龄、出生体重均无统计学差异(P>0.05)，见表1。

表1 不同组一般临床资料及生化指标比较

2.2 TLR4和NF-kB的表达水平

为了调查TLR4和NF-kB在BIPI中的表达水平，我们利用ELISA法分别检测实验组和对照组1 d、3 d、7 d外周静脉血中TLR4与NF-kB的含量。结果表明，1 d、3 d和7 d实验组血清TLR4含量均明显高于对照组(图1A,P<0.05)。同时，1 d、3 d和7 d实验组血清NF-kB表达水平均明显高于对照组(图1B,P<0.05)。

(A)TLR4在不同组的表达水平；(B)NF-kB在不同组的表达水平。*P<0.05，对照组与实验组比较差异有统计学意义。

2.3 TLR4和NF-kB与BIPI的相关性分析

由表2可知，TLR4和NF-kB与BIPI呈正相关(P<0.05)。

表2 TLR4和NF-kB与BIPI相关性分析

3 讨论

早产儿脑损伤(Brain damage of prematurity,BIPI)是一种好发于早产儿的临床常见疾病，其主要由于胎儿出生时脑部组织发育不成熟，脑组织极易受到缺氧、缺血环境的影响，从而引起颅内出血或脑白质损伤[10]等。通常，BIPI将导致患儿神经发育迟缓、智力低下、脑瘫、言语障碍及行为异常等，甚至还会引起患儿急性死亡[2,3,11]。因此，对BIPI实施早期监测和干预，避免或减轻后遗症的发生，对改善患儿生活质量和预后具有重要意义。

TLR4在中枢神经系统高表达，其与相应配体结合后将激活NF-KB，从而进一步调节多种细胞因子的表达[12]。研究表明，TLR4缺失将导致炎症因子表达下调，从而减轻小鼠脑部缺血再灌注损伤[13]。在大脑中动脉闭塞小鼠模型中，NF-KB表达明显上调，而在TLR4敲除后大脑中动脉闭塞小鼠中发现NF-KB表达降低，表明TLR4/NF-KB信号通路在脑缺血损伤过程中发挥重要作用[14]。Wang SL等发现右美托咪啶可以通过抑制TLR4/NF-KB 信号通路，从而在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用[15]。

在本研究中，我们发现实验组1 d、3 d和7 d血清中TLR4和NF-kB表达水平均明显高于对照组。该结果表明，TLR4和NF-kB共同参与了BIPI的发生与发展，血清中TLR4和NF-kB联合检测将有助于BIPI的早期诊断及病情严重程度的判断。