类风湿关节炎患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白的变化及其意义

郭冬芳，党 筝，刘 喆，孟庆防

(驻马店市中心医院 1.检验科；2.风湿免疫科，河南 驻马店463000)

摘要：目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清免疫球蛋白、14-3-3η蛋白的变化及其意义。方法选取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者110例(RA组)和年龄、性别相匹配的健康对象40例(对照组)，检测两组的血清IgA、IgG、IgM、补体C3、C4、14-3-3η蛋白水平，并根据RA患者是否处于疾病活动期和放射学分级进行分层分析。结果RA组的血清IgG、14-3-3η蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)，血清IgA、IgM、补体C3、C4蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；活动期RA患者血清IgG、14-3-3η蛋白水平显著高于非活动期的RA患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、补体C3、C4水平与非活动期的RA患者比较差异无统计学意义(P>0.05)；放射学分级3级、4级RA患者血清IgG、补体C3、14-3-3η蛋白水平显著高于非活动期组的2级患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、补体C4水平与放射学分级2级RA患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论RA患者血清IgG、补体C3 14-3-3η蛋白水平较高，血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平变化与RA患者病情、活动情况具有一定的相关性。

关键词：类风湿关节炎；免疫球蛋白；14-3-3η蛋白

中图分类号：R593.22文献标识码：A

Relationshipbetweenserum14-3-3ETAandimmunoglobulinlevelandthedevelopmentofRApatients

GUODong-fang1，DANGZheng1，LIUZhe2，etal.

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofRheumatologyandImmunology,ZhumadianCentralHospital,Zhumadian463000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the changes and significance of serum immunoglobulin and 14-3-3 ETA protein in patients with rheumatoid arthritis (RA).MethodsIn our hospital (2015.02-2017.12),110 cases of RA patients (group RA),age and sex matched healthy subjects (control group)were selected to detect the levels of serum IgA,IgG,IgM,complement C3,C4,14-3-3 ETA protein in the two groups,and stratified analysis according to whether the patients were in the period of disease activity and the radiological classification.ResultsSerum IgG and 14-3-3 ETA protein levels in group RA were significantly higher than those in the control group(P<0.05).There was no significant difference in serum IgA,IgM,complement C3 and C4 protein levels between the RA group and the control group(P>0.05),and the serum IgG and protein levels of the RA patients in the active group were significantly higher than those in the non active group.There was no significant difference in serum IgA,IgM,complement C3,and C4 levels between the patients with RA in the dynamic phase group and the RA patients in the inactive group (P>0.05);the serum IgG,complement C3,14-3-3 ETA protein levels of the radiological classification (grade 3,4)were significantly higher than those of the group 2 in the inactive group (P<0.05),and the radiological classification (grade 3)There was no significant difference in serum IgA,IgM and complement C4 levels between patients with RA and those of grade 2 RA (P>0.05)in patients with RA.ConclusionCombined detection of serum IgG and complement C314-3-3 ETA protein level is helpful for clinicians to make judgments on the condition and activity of RA patients,so as to guide treatment.

Keywords:Rheumatoid arthritis;immunoglobulin;14-3-3 ETA protein

(ChinJLabDiagn,2019,23:0784)

近年来类风湿关节炎(RA)发生率明显上升，流行病学研究证实，RA的发病率可达373-583/万人左右[1]。临床上RA的发生能够导致患者关节功能损伤风险的上升，并能够增加患者远期的致残率[2]。血清免疫球蛋白的紊乱能够通过对免疫因子的吞噬作用，促进滑膜组织上皮细胞的凋亡，导致局部关节腔内环境的异常[3,4]；14-3-3η蛋白是重要的酸性蛋白成分，能够参与到多种生物学活性的调控过程中。14-3-3η蛋白的高表达能够激活下游肿瘤坏死因子α，促进炎症性信号通路的激活，参与到关节的炎症性损伤过程[5]。为了揭示14-3-3η蛋白或者免疫球蛋白与RA病情的关系，从而为临床上RA患者的病情评估提供参考，本研究选取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者为研究对象，探讨14-3-3η蛋白或者免疫球蛋白的表达及其与患者病情的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者110例为RA组，其中男26例，女84例，年龄42-77岁，平均(61.5±13.0岁)；RA活动期患者64例，非活动期患者46例。选取同期年龄、性别相匹配的健康者40例为对照组，其中男8例，女32例，年龄40-76岁，平均(63.0±12.4)岁。纳入标准：(1)RA患者的诊断及分期参考1987年美国风湿病协会(ARA)修订的诊断标准[6]；(2)患者具有典型的关节肿胀、疼痛、畸形等症状，经X线检查、血清学检查确诊；(3)对照组来源于我院体检健康的自愿者；(4)本研究获得研究对象的知情同意和医学伦理委员会的批准。排除标准：(1)伴有凝血功能疾病、血液系统疾病；(2)伴有恶性肿瘤；(3)结核；(4)急性心肌梗死；(5)免疫功能缺陷；(6)长期使用糖皮质激素或免疫抑制剂。两组研究对象年龄、性别比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 指标检测方法

采集患者入院后静脉血，离心后收集上清液，采用免疫发光法检测IgG、IgA、IgM、补体C3、C4水平，检测仪器为美国Bio-Bad全自动酶标仪，配套试剂盒购自罗氏检测公司。

将采集患者的静脉血3 ml,加入14-3-3η蛋白单抗，标本和标准品中的14-3-3η蛋白会与单抗结合,PBS液体洗涤5 min。按照1∶500的比例加入羊标志的一抗5 ml，4℃放置过夜，PBS缓冲液洗涤3次，每次5 min，加入鼠来源的二抗(1∶1 000)2 ml，室温放置2 h，PBS液体洗涤5 min。加入显色底物,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450 nm处测OD值。

1.3 放射学分级评价标准

RA患者的放射学分级评价标准采用Steinbrocker标准。1级：正常或可能存在骨质疏松；2级：骨质疏松伴软骨下骨质破坏和轻度的关节间隙狭窄；3级：可见明显的关节面下骨质破坏、关节变形、关节间隙狭窄或消失，但未出现纤维性或骨性强直；4级：除伴有2级和3级的表现外，伴有纤维性或骨性强直。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组研究对象血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比较

RA组的血清IgG、14-3-3η蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)，血清IgA、IgM、补体C3、C4蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组研究对象的血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比较

2.2 不同分期的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比较

活动期RA患者的血清IgG、14-3-3η蛋白水平显著高于非活动期的RA患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、补体C3、C4水平与非活动期组RA患者比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 不同分期RA患者的血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比较

2.3 不同放射学分级的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比较

放射学分级3级、4级RA患者的血清IgG、补体C3、14-3-3η蛋白水平显著高于非活动期组的2级患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、补体C4水平与2级的RA患者比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 不同放射学分级的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比较

3 讨论

多种病理性因素均能够导致关节滑膜组织损伤，特别是在有相关家族易感基因携带的基础上，RA的发生风险具有进一步上升趋势。炎症性损伤、自身免疫性功能紊乱等均能够导致滑膜基底细胞的凋亡，加剧软骨组织的破坏，进而增加了RA不良临床预后的发生风险[7,8]。现阶段临床上主要通过免疫抑制剂、糖皮质激素等治疗RA，但一项囊括了627例样本量的RA治疗的临床结局分析发现，RA治疗后的病情缓解率不足36%，治疗后的远期关节脱位、关节坏死、骨折或者关节畸形等的发生率仍然较高[9]。而本次对于RA患者血清中免疫球蛋白或者14-3-3η蛋白水平的分析研究，不仅能够为深入揭示RA的发病机制提供依据，同时还能为RA的免疫靶向治疗提供新的治疗靶点。

14-3-3η蛋白是糖蛋白家族的重要成员，能够通过羧基结构的磷酸化修饰或者甲基化修饰作用，影响生物体的炎症反应、自身免疫应答或者组织细胞的退行性病变过程。14-3-3η蛋白的表达能够通过结合细胞膜上的多种糖蛋白配体，导致上皮细胞膜内的信号通路的激活，影响上皮细胞的凋亡和氧化应激损伤过程。基础方面的研究还认为，14-3-3η蛋白的表达能够通过激活三磷酸腺苷或者钙离子的表达，进而提高MAPK下游效应因子的上调程度，导致组织炎症性损伤及淋巴细胞毒性作用的加强[10,11]。有部分研究者探讨14-3-3η蛋白的表达与RA的关系认为，14-3-3η蛋白的表达上升能够显著促进RA患者的病情进展，导致患者免疫抑制剂治疗敏感性的下降[12]，但缺乏对于14-3-3η蛋白的表达与RA患者的不同分期或者不同影像学评级间的关系研究。

本研究发现，RA组的血清IgG、14-3-3η蛋白的表达水平均明显高于对照组，差异较为明显，提示血清IgG、14-3-3η蛋白均可能影响RA的病情进展过程。通过荟萃分析不同的相关文献，笔者认为血清IgG、14-3-3η蛋白的高表达主要通过下列几个方面的途径促进RA的发生或者病情进展[13,14]：(1)血清IgG的上升能够通过激活巨噬细胞或者单核细胞，导致其对于滑膜组织上皮细胞吞噬作用的增强，促进了滑膜组织的自身免疫性损伤程度，导致滑膜上皮细胞的凋亡明显加速；(2)14-3-3η蛋白表达浓度的上升能够促进体内炎症信号通路AKT或者MAPK的激活，导致下游IL-6或者肿瘤坏死因子的上调，增加了炎症性因子对于关节软骨或者关节腔的浸润过程。曾婷婷等[15]研究发现，在RA患者血清或者局部关节腔液体中，免疫球蛋白IgG的表达浓度明显上升，特别是在病情进展速度较快或者糖皮质激素治疗敏感性较低的RA患者中，血清IgG的表达浓度可进一步的下调。活动期RA患者的病情进展速度、临床预后等均不佳。本次研究发现，处于活动期的RA患者血清IgG、14-3-3η蛋白的表达均明显的上调，提示二者的表达与RA患者的病情密切相关，这主要是由于血清IgG、14-3-3η蛋白的表达上升导致衬里细胞增生、间质大量炎性细胞浸润等病理过程的进展，并促进了血管翳的形成及软骨和骨组织的破坏等病理过程。但本次研究中并未发现IgA、IgM、补体C3、C4水平等在RA患者不同分期中的表达差异，提示相关指标并不能评估患者的病情状态。放射学分级通过关节面下骨质破坏程度、关节有无变形、关节间隙等情况进而评估RA患者病理性损害的程度，随着放射学分级的上升，可以发现RA患者的血清IgG、补体C3、14-3-3η蛋白水平均显著上升，提示IgG、补体C3、14-3-3η蛋白能够显著促进RA患者关节解剖结构的破坏，加剧关节的退行性和炎症性病变程度。

本次研究的创新性在于探讨了IgG、14-3-3η蛋白在不同放射学分级和RA分期中的差异性表达情况。综上所述，RA患者血清IgG、补体C314-3-3η蛋白水平较高，血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平变化与RA患者病情、活动情况具有一定的相关性。