精子DNA完整性与顶体酶活性在精索静脉曲张所致不育患者术前术后的观察*

马征兵

安阳市妇幼保健院男性科，河南 安阳 455000

精索静脉曲张可引起多种临床表现，发病机制复杂, 也是导致男性不育症的原因之一[1-2],手术可取得较好的治疗效果[3]。精子DNA完整性、顶体酶活性与精子的受精能力密切相关，是评价男性精子质量的重要指标[4-5]。本研究旨在探讨精子DNA完整性与顶体酶活性在精索静脉曲张所致不育患者行精索静脉高位结扎手术前后的变化，为寻找精索静脉曲张导致不育的发病机制提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年1月—2018年9月期间在我院男性科门诊就诊的100例患有Ⅱ度及以上精索静脉曲张所致不育症患者(实验组)与100例行健康体检的健康男性志愿者(对照组)进行前瞻性研究，其中，实验组的年龄为23～45岁，平均年龄为(33.72±9.51)岁，对照组的年龄为22～44岁，平均年龄为(33.15±9.68)岁，组间年龄比较，P>0.05，研究可比。两组均符合纳入标准和排除标准，纳入标准为：(1)育龄期男性；(2)实验组患者的性生活规律，未采取避孕措施至少1年而其配偶未受孕，对照组男性无不育症情况；(3)对研究知情同意。排除标准：(1)配偶存在某种异常所致不孕症；(2)年龄超过育龄期；(3)不配合研究或资料不完整。

1.2 方法

1.2.1 精子动态学、形态学检查 嘱患者禁欲3～5天后手淫留取完整精液于一干净容器，置37 ℃水浴箱内，待精液充分液化后按照WHO关于精液处理标准(第五版)的具体要求和操作步骤进行分析[6]，其中精子动态学主要参数(浓度、活率、前向运动率)采用WLJY-9000型北京伟力彩色精子质量检测系统软件进行计算，精子形态学主要参数(正常形态精子百分率)采用人工计数方法计算。将精液滴片、制片后，按照WHO推荐的Diff-Quik法进行染色，在光学显微镜油镜(×l 000)下，每张片至少读取200个精子，用严格判断标准进行判别，人工计数正常形态及畸形精子数，最后取2张片子结果的均数。

1.2.2 精子顶体酶活性测定 选用临床上应用的精子顶体酶活性检测试剂盒(底物酶法，BAPNA法)，购自天津瑞爱金生物科技有限公司(津械注准20172400007)，在精液动态学检查结束后的3个小时之内即刻进行取样测定，严格按照试剂盒使用说明书的步骤进行操作，结果判定为在24℃反应温度下，每水解1.0 μmolBAPNA/min的底物量定义为1 IU顶体酶活性。计算公式：顶体酶活性(μIU/106精子)=(测定管OD-空白管OD)×106/247.5×10。正常参考值为：48.2～218.7 μIU/106精子。

1.2.3 精子DNA完整性测定 购自深圳市博锐德生物科技有限公司生产的精子DNA 碎片检测试剂盒，采用精子染色质扩散法(SCD)检测原理，根据精子头部光晕的有无和大小判断精子DNA碎片化程度，按照实验操作说明书进行操作，精子DNA 碎片率( %) =存在DNA 碎片精子数÷被观察精子总数×100%，根据精子DNA 碎片指数(DNA fragmentation index，DFI)来判断精子DNA完整性。

1.2.4 手术方法 对不育症患者实施精索静脉高位结扎术治疗，于患者脐孔下缘作2cm切口，入腹建立人工气腹，将腹腔镜置入，对患者腹腔内情况进行探查，分别于脐孔与两侧髂前上棘连线中点腹直肌外缘作5mm长的主操作孔、副操作孔，在腹腔镜直视下采用剪刀对输精管上1.5 cm处后腹膜予以剪开，显露精索静脉，对精索静脉进行游离，迅速结扎，电凝止血，消除气腹，撤出手术器械，分层缝合皮肤切口。

1.3 观察指标 比较实验组与对照组的精子浓度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率、精子DNA完整率(DFI指数)、精子顶体酶活性。比较不育症患者手术前后的精子浓度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率、精子DNA完整率、精子顶体酶活性。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0软件，计数资料行χ2检验，计量资料行t检验，P≤0.05时具有统计学意义。

2 结 果

2.1 实验组与对照组的精液分析指标比较 实验组的精子浓度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率、精子DNA完整率、精子顶体酶活性均低于对照组(P<0.05)，其DFI指数高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 实验组与对照组的精液分析指标比较

注：*表示与对照组相比，P<0.05。

2.2 不育症患者手术前后的精液分析指标比较

不育症患者手术后的精子浓度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率、精子DNA完整率、精子顶体酶活性均较手术前增高(P<0.05)，其DFI指数较手术前降低(P<0.05)。见表2。

表2 不育症患者手术前后的精液分析指标比较(n=100)

注：#表示与手术前相比，P<0.05。

3 讨 论

当前，在二孩政策放开后，有生育需求的高龄男性增多，加上原发不育的青年患者，男性不育症已经成为一种常见的男科疾病，这与男性长期不良生活习惯、从事有害职业、处于有害工作环境、泌尿生殖系统外科疾病如精索静脉曲张等有关，其可对男性精子的宏观和微观结构造成影响。基于此，深入研究精子DNA损伤机制、评估精子顶体酶活性改变情况，探讨有效的治疗方法，显得尤为迫切[7-8]。

本研究针对精索静脉曲张所致男性不育症患者的精子质量进行检测后发现，实验组的精子浓度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率、精子DNA完整率、精子顶体酶活性均低于对照组(P<0.05)，其DFI指数高于对照组(P<0.05)，这说明精索静脉曲张所致不育症患者普遍存在精子DNA损伤和顶体酶活性减弱情况。

资料显示，约有5.7%～41%的男性不育症患者伴随有不同程度的精索静脉曲张，临床上认为精索静脉曲张是导致男性不育症的重要原因，主要是由于精索静脉丛发生曲张后，其血液回流受阻，导致其睾丸生精功能受损，进而影响到男性的生殖功能，因此，临床上主张对精索静脉曲张所致男性不育症予以充分重视[9]。由于精索静脉曲张所致不育症的发生主要原因为精索静脉曲张，故临床上主张对这类不育症患者实施精索静脉高位结扎术治疗[1-3]。该手术主要是通过对患者精索静脉进行结扎，可有效纠正静脉回流受阻，减少精索静脉内血液淤积。我们手术时采取保留睾丸动脉的手术方式，避免影响睾丸血供，从而改善睾丸生精功能[10-11]。

本研究发现，不育症患者手术后的精子密度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率、精子DNA完整率、精子顶体酶活性均较手术前增高(P<0.05)，其DFI指数较手术前降低(P<0.05)，说明精索静脉高位结扎术可有效改善不育症患者的精子质量，减轻其精子DNA损伤，增强其精子顶体酶活性。

综上所述，精索静脉曲张所致不育症患者的精子DNA完整性、精子顶体酶活性普遍受损，经精索静脉高位结扎术可有效改善患者的精子DNA完整性和顶体酶活性。