Skp2、P27和CyclinE在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

吴金训

福建省连江县医院病理科，福建连江 350500

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，位居女性恶性肿瘤第三位，严重威胁妇女健康，具有较高的发病率与死亡率[1-2]。我国每年因该病的死亡人数达5.3万，且每年新发病例数高达13.15万[3]。研究表明，多种因素长期共同作用促进了宫颈癌的发生发展，在此过程中涉及多基因、多分子水平的改变。S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein2，Skp2）属于F-box蛋白家族成员，研究表明，Skp2主要参与细胞周期的调控，与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关[4]。P27和细胞周期蛋白E1（Cyclin E1）是与增殖相关的细胞周期调控基因，检测P27蛋白在宫颈癌及其周围正常宫颈组织的表达，有利于探讨它们与宫颈癌发生、发展的关系。有研究结果显示，Cyclin E1/CDK2激活加上FBW7丢失途径，通过CENP-A-介导的着丝粒功能障碍促进染色体不稳定和肿瘤进展[5]。本研究通过过检测浸润性宫颈癌（infiltrating cervical carcinoma，ICC）患者标本中Skp2、P27和CyclinE表达，旨在探讨它们与宫颈癌临床病理因素及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月～2018年1月我院病理科存档石蜡包埋ICC组织标本70例为ICC组，年龄35～67岁，平均47.5岁，收集患者具有完整的临床、病理资料及随访情况，排除术前放、化疗病例。另选取宫颈上皮内瘤变（CIN）组织标本30例为CIN组和正常子宫颈鳞状上皮（NCE）组织标本50例为NCE组。

1.2 方法

采用免疫组织化学法检测各组标本中Skp2、P27和CyclinE表达情况，以购买的阳性片免疫组化染色结果为阳性对照，以PBS替代第一抗体的免疫组化染色结果为阴性对照。按说明书操作，石蜡切片经过二甲苯脱蜡→梯度酒精脱水→抗原修复→柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复→过氧化物酶阻断溶液阻断内源性过氧化物酶→封闭非特异性抗原→加一抗→过夜→二抗→三抗（链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液）→DAB染色→苏木素复染→脱水、透明→封片。

1.3 统计学方法

采用统计学软件SPSS13.0对数据进行统计分析，计数资料以百分数（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组Skp2、P27、CyclinE表达的比较

ICC组、CIN组、NCE组Skp2、CyclinE蛋白表达的阳性呈明显降低趋势，P27蛋白表达的阳性呈明显升高趋势，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 ICC组Skp2、P27及CyclinE蛋白表达情况

在ICC组中，Skp2蛋白、CyclinE蛋白及P27蛋白表达与年龄、肿瘤大小、临床分期无明显关系（P＞0.05）；而与组织学Ⅲ级、间质浸润＞浅肌层、盆腔淋巴结转移阳性和脉管浸润阳性者Skp2蛋白、CyclinE蛋白表达阳性率分别显著高于组织学≤Ⅱ级、间质浸润≤浅肌层、盆腔淋巴结转移阴性和脉管浸润阴性者，P27蛋白表达阳性率于分别显著低于组织学≤Ⅱ级、间质浸润≤浅肌层、盆腔淋巴结转移阴性和脉管浸润阴性者，差异有统计学意义（P＜ 0.05），见表 2。

2.3 ICC组Skp2、P27及CyclinE的表达与预后的关系

随访资料显示，ICC组生存期≥5年者38例，生存期≥5年者Skp2和CyclinE蛋白表达阳性率明显低于生存期＜5年者，P27蛋白表达阳性率明显高于生存期＜5年者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表2 ICC组Skp2、P27及CyclinE蛋白阳性表达的情况[n（%）]

表3 Skp2、P27及CyclinE蛋白表达阳性率与预后的关系[n（%）]

3 讨论

Skp2是zhang等于1995年从大量的恶变细胞中发现的一种能与S期激酶CyclinA-CDK2相互作用的蛋白。因其主要存在于恶变细胞的S期，且与CyclinA-CDK2活性相关，故命名为Skp2（S-phase kinase-associated proteins）。P27是从静息细胞抽提物中发现的一种分子量为27kD的热稳定蛋白[6-7]。P27作为细胞周期负性调控因子，广泛抑制各种细胞周期蛋白和激酶的活性，P27在细胞周期的调控中起重要作用，作为细胞周期Gl期的重要限速因子，与肿瘤的发生、发展及预后有着密切的关系。在人类几乎所有的上皮性肿瘤中都有P27蛋白表达的下降或缺失[8-10]。CyclinE是细胞周期G1期的正性调控因子，在控制细胞由G1进入S期过程中起限速作用。CyclinE的过度表达参与宫颈癌的发生及恶性进展。CyclinE是细胞周期正性调控因子，促进细胞周期由G1期向S期转化，是细胞进入S期的关键性调节基因，过度表达可导致细胞增殖失控，形成肿瘤。P27是细胞周期负性调控因子[11]。

本研究结果显示，ICC组、CIN组、NCE组Skp2、CyclinE蛋白表达的阳性呈明显降低趋势，P27蛋白表达的阳性呈明显升高趋势，差异有统计意义（P＜0.05）。在ICC组中，Skp2蛋白、CyclinE蛋白及P27蛋白表达与年龄、肿瘤大小、临床分期无明显关系（P＞0.05）；而与组织学Ⅲ级、间质浸润＞浅肌层、盆腔淋巴结转移阳性和脉管浸润阳性者Skp2蛋白和CyclinE蛋白表达阳性率分别显著高于组织学 ≤Ⅱ级、间质浸润≤浅肌层、盆腔淋巴结转移阴性和脉管浸润阴性者，P27蛋白表达阳性率分别显著低于组织学 ≤Ⅱ级、间质浸润≤浅肌层、盆腔淋巴结转移阴性和脉管浸润阴性者，差异有统计学意义（P＜0.05）。 随访资料显示，ICC组生存期≥5年者38例，生存期≥5年者Skp2和CyclinE蛋白表达阳性率明显低于生存期＜5年者，P27蛋白表达阳性率明显高于生存期＜5年者，差异有统计学意义（P＜0.05）。本研究结果提示，三者联合检测可预示宫颈癌的高恶性度，并提示肿瘤预后不良。随着宫颈癌分化程度降低，Skp2、CyclinE的表达逐渐增高，而P27的表达逐渐降低。有研究发现Skp2与P27蛋白之间呈负相关。有研究发现，肺腺癌和鳞状细胞癌、卵巢肿瘤，前列腺癌均与Skp2和P27有关[12-13]。多数研究者认为，Skp2的一个最重要功能是靶向降解P27，Skp2过量表达可下调P27，从而促进肿瘤的产生，发挥其致瘤作用[14-15]。

综上所述，Skp2、CyclinE的高表达和P27的低表达或表达缺失可能与宫颈癌的发生发展有关。Skp2和CyclinE蛋白高表达可能是宫颈组织恶变的重要生物学标志，P27蛋白表达降低提示肿瘤具有更高的侵袭性及不良预后。