盐酸小檗碱喷膜剂的制备与质量标准研究

佟若菲，张金芬，孙燕燕

(天津市儿童医院，天津 300134)

喷膜剂是一种新型透皮制剂，结合了贴剂、膜剂、喷雾剂的优点,以溶液状态储存，并能以雾状喷出后快速形成通气性良好的生物膜[1]。盐酸小檗碱喷膜剂为本院研制的口腔科用药，临床用于治疗小儿鹅口疮取得较好疗效。该制剂以盐酸小檗碱为主药，采用聚维酮为成膜材料，以龙脑、氮酮为促渗剂，加入菠萝香精等调味制备而成；根据《中国药典》(2015年版)中关于膜剂的要求及目前文献关于喷膜剂的质量控制的研究情况，采用HPLC测定盐酸小檗碱的含量，初步建立了其质量标准。

1 仪器与试药

1.1仪器 HPLC-2010(日本岛津)；LC solution色谱工作站；XS-205电子天平(瑞士-梅特勒托利多公司)；柱温箱(Model 100，天津科贝尔公司)；KQ-100B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；酸度计PHS-25(数显，上海精密科学仪器有限公司)。

1.2试药 盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号130555-200602)；盐酸小檗碱原料药(上海源叶生物科技有限公司，批号Y18D8C50814)；龙脑[阿拉丁试剂(上海)有限公司，批号E1816012，药用]；聚维酮(天津市光复精细化工研究所，批号20140314，药用)；氮酮(山东优索化工科技有限公司，批号20150419，药用)；菠萝香精(广东省阳东县化工工业公司，批号20171226，食品用)；庚烷磺酸钠(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号201811010，药用)；磷酸二氢钾、三乙胺、95%乙醇均为分析纯；乙腈(色谱纯，迪马科技有限公司，批号R141552)；水为去离子水。

2 方法与结果

2.1盐酸小檗碱喷膜剂的制备

2.1.1处方 盐酸小檗碱33.6 g，龙脑 1.5 g，聚维酮100 g，氮酮10 ml，菠萝香精0.50 g，95%乙醇300 ml，纯化水加至1 000 ml。

2.1.2制备 ①取盐酸小檗碱33.6 g，95%乙醇300 ml溶解，取1.5 g龙脑、10 ml氮酮放入盐酸小檗碱溶液中，使之充分溶解；②称取100 g聚维酮置烧杯中，加纯净水300 ml使其溶胀，静置过夜，加200 ml沸水溶解，放置冷却后，加入菠萝香精0.50 g；③将聚维酮混合液缓慢加入盐酸小檗碱溶液中，搅拌混匀，纯化水加至1 000 ml，即得[2-4]。

2.2盐酸小檗碱喷膜剂的含量测定

2.2.1色谱条件 色谱柱：依利特Sinochrom ODS-BP(150 mm ×4.6 mm,5 μm)；流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05 mol/L庚烷磺酸钠溶液(1∶1)(含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH 值至3.0)-乙腈(60∶40)，流速：1 ml/min，检测波长为263 nm；柱温：40 ℃；进样量20 μl[5]。

2.2.2溶液制备

2.2.2.1对照品溶液 精密称取盐酸小檗碱对照品10 mg，置10 ml量瓶中，加沸水使溶解，静置放冷后稀释至刻度，摇匀。精密量取3 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml中含0.06 mg的溶液。

2.2.2.2供试品溶液 精密称取本品1 ml(约相当于盐酸小檗碱33.6 mg)，置量瓶中，加水20 ml，于水浴上温热使溶，放冷，于4 ℃下放置2 h，滤过，滤液置100 ml量瓶中，残渣用20 ml水分4次洗涤，合并洗液与滤液，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取10 ml，置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.3阴性样品溶液 按处方比例配成不含盐酸小檗碱的喷膜剂，按供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液。

2.2.3专属性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20 μl,按照“2.2.1”项下色谱条件测定，盐酸小檗碱出峰时间适宜，峰型良好，且辅料无干扰；理论板数按盐酸小檗碱峰计算值为3 136，见图1。

1.盐酸小檗碱图1 供试品(A)对照品(B)阴性样品(C)HPLC色谱图

2.2.4线性范围 精密称取盐酸小檗碱对照品50 mg，置50 ml量瓶中，加沸水20 ml溶解，加流动相稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0 m1分别置50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按“2.2.1”项下色谱条件测定，以盐酸小檗碱浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程：A=1.200×105C+1.167×106(r=0.999 5，n=7)，表明盐酸小檗碱在20～80 μg/ml的范围内具有良好线性关系。

2.2.5精密度试验 取“2.2.2.1”项下的对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，测得盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.52%，符合要求。

2.2.6稳定性试验 取同一批号样品，按照“2.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.2.1”项下色谱条件测定，分别在0、4、8、10、12和24 h进样，进样量20 μl，测得各自峰面积值的RSD为1.44%，符合要求。

2.2.7重复性试验 取同一批号样品适量，共6份，分别按照“2.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.2.1”项下色谱条件测定，进样量20 μl，样品中盐酸小檗碱平均含量为33.6 μg/ml，RSD为0.77%，符合要求。

2.2.8加样回收率试验 精密量取供试品1.0 ml 9份，分别精密加入相当于盐酸小檗碱含量80%、100%和120%的盐酸小檗碱对照品溶液各3份，按照“2.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.2.1”项下色谱条件测定，进样量20 μl，计算回收率。结果盐酸小檗碱的平均回收率为99.95%，RSD为1.34%。见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.2.9样品测定 取盐酸小檗碱喷膜剂样品3批(批号 20180701、20180702、20180703)，每批2份，按照“2.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.2.1”项下色谱条件测定，进样量20 μl，用外标法计算样品中盐酸小檗碱的含量，结果盐酸小檗碱含量的平均值为33.45 μg/ml,RSD为1.49%。见表2。

表2 3批盐酸小檗碱喷膜剂含量测定结果

2.3性状 按照处方工艺制备的小檗碱喷膜剂的外观为淡黄色澄明液体[6]。

2.4pH值 取小檗碱喷膜剂约 5 ml，加纯化水 15 ml稀释溶解，测定 pH，根据人体口腔正常pH值，溶液pH值应为6.5～7.2[7]。

2.5成膜时间 37 ℃条件下，将喷膜剂喷涂在载玻片上，成膜时间应在 5 min 之内。

2.6溶膜试验 将药液喷涂于患处，待药膜形成后再次喷涂，以用棉签能将第一次药膜擦掉即为溶膜，将此试验重复 30 次，结果应均为阳性，表明该药既能保持创面连续用药，又不会妨碍创面分泌物的排泄[8]。

3 讨论

鹅口疮(thrush)又名雪口病、白念菌病(moniliasis)，是由白色念珠菌感染引起的真菌病，在黏膜表面形成白色斑膜，多见于婴幼儿。白色念珠菌有时也可在正常人的口腔中找到。当婴儿营养不良或身体衰弱时可以发病[9]。目前，小儿鹅口疮多以局部治疗为主，严重病例及慢性念珠菌感染常辅以全身治疗。临床常用制霉菌素、氟康唑等抗真菌药，但随之而来的耐药现象越来越严重，寻找以生物膜为靶向的药物是近年的研究热点。

小檗碱是中药黄连中的主要有效成分，是一种广谱抗菌药物，且具有不易耐药的特点。在小檗碱影响下，生物膜内细胞的存活率降低，白色念珠菌生长活力下降。白色念珠菌生物膜活性减低，生物膜的生物量减少，说明小檗碱对体外白色念珠菌生物膜的形成有抑制作用，表明小檗碱有体外抑制白色念珠菌的活性[10]。另外研究发现小檗碱对白色念珠菌细胞生长周期造成不同程度的影响，药物浓度增高，处于S、G2、M期的细胞比率降低，细胞分裂被明显抑制。表明小檗碱可抑制白色念珠菌的细胞生长周期，最佳作用时间为12 h[11]。

本院研发的医院新制剂小檗碱喷膜剂选取小檗碱为主要药效成分；所选成膜材料聚维酮是一种常用的水溶性高分子成膜材料，易溶于极性溶剂，安全无毒，对皮肤黏着力强，无刺激性，常作为喷膜剂的成膜材料；促渗剂以龙脑、氮酮联合应用，以达到协同作用。质量控制方面喷膜剂的酸碱度应该在中性范围(pH 5～8)内，这样才能减小对皮肤的刺激性，更好地发挥皮肤的性能，增强药物的吸收，本试验制备的喷膜剂pH值在6.5～ 7.2，符合质量要求。