SFC法测定盐酸左布比卡因右旋异构体含量

陈香玲，何泰东，李 丽

(1. 广东省深圳市中医院，广东 518033； 2.天津药明康德新药开发有限公司，天津 300070)

盐酸左布比卡因，化学名为S-(-)-1-丁基-N-(2, 2-二甲苯基)-2-哌啶甲酰胺盐酸盐，是一种酰胺类局部麻醉药，具有神经阻滞作用，主要用于硬膜外麻醉、蛛网膜下腔阻滞麻醉、产科麻醉和术后镇痛等，与盐酸布比卡因相比，麻醉的作用相当，但是中枢神经系统和心脏毒性更小[1-5]。盐酸左布比卡因异构体的检查方法有高效液相色谱法[6，7]和毛细管电泳法[8]，未见超临界流体色谱法的文献报道。超临界流体色谱法(SFC)作为手性分析的手段也逐渐应用于药物的分析当中，相对于常规的分离手段，SFC具有绿色、快速的特点[9-13]。本试验通过建立SFC法测定盐酸左布比卡因注射液中的异构体，对盐酸左布比卡因注射液进行质量控制。

1 仪器与试药

Agilent 1260 HPLC系统，Thar SFC系统；XSE 205电子天平；Thermo Scientific Heraeus离心机，KQ2000D型超声波清洗器。盐酸左布比卡因对照品(批号171011，质量分数为 99.1%)、盐酸左布比卡因异构体对照品(批号170807，质量分数为 99.9%)均购自深圳菲斯生物科技有限公司。盐酸左布比卡因注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司，规格：375 mg/5 ml，批号20170105，20170106，20170107)；异丙醇为色谱纯，购自西格玛有限公司。盐酸、氢氧化钠、过氧化氢均为分析纯，购自天津光复科技发展有限公司。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱为Chiralomix SD 色谱柱(150 mm×4.6 mm，3.5 μm)，柱温为35 ℃，检测波长为215 nm，进样量为10 μl，流动相为CO2-异丙醇(73∶27)，流速为1.5 ml/min。

2.2溶液的制备

2.2.1系统适用性溶液 精密称取10 mg盐酸罗哌卡因对照品与10 mg 异构体对照品，置于100 ml量瓶中，加异丙醇溶解，稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液10 ml至100 ml量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2供试品溶液 精密量取盐酸左布比卡因注射液10 ml(约含盐酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入异丙醇，超声2 min，稀释至刻度，摇匀。离心，取上清液，即得。

2.3系统适用性试验 取系统适用性溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果表明盐酸左布比卡因色谱峰与异构体色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数均大于5 000，空白无干扰。色谱图见图1。

2.4专属性试验

2.4.1酸降解溶液 取盐酸左布比卡因注射液10 ml(约含盐酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入异丙醇20 ml，超声2 min，加入0.2 mol/L盐酸异丙醇溶液5 ml，放置2 h；用氢氧化钠异丙醇溶液调pH值，加异丙醇稀释至刻度，摇匀。离心，取上清液，即得。

2.4.2碱降解溶液 取盐酸左布比卡因注射液10 ml(约含盐酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入异丙醇20 ml，超声2 min，加入0.2 mol/L氢氧化钠异丙醇溶液5 ml，放置2 h；用盐酸异丙醇溶液调pH值，加异丙醇稀释至刻度，摇匀。离心，取上清液，即得。

2.4.3高温降解溶液 取盐酸左布比卡因注射液10 ml(约含盐酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，置于水浴锅上，90 ℃加热5 h，取出，加入异丙醇，超声2 min，并用异丙醇稀释至刻度，摇匀。离心，取上清液，即得。

1.异构体 2.盐酸左布比卡因图1 系统适用性(A) 供试品(B)酸降解(C) 碱降解(D)氧化降解(E) 光照降解(F)高温降解(G)HPLC色谱图

2.4.4光照降解溶液 取盐酸左布比卡因注射液10 ml(约含盐酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，放置于强光照射照箱[(4 500±500)lx]中放置24 h，取出，加入异丙醇，超声2 min，并用异丙醇稀释至刻度，摇匀。离心，取上清液，即得。

2.4.5氧化降解溶液 取盐酸左布比卡因注射液10 ml(约含盐酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入异丙醇20 ml，超声2 min，加入30%的过氧化氢溶液5 ml，放置2 h；加异丙醇稀释至刻度，摇匀。离心，取上清液，即得。

取各降解溶液按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果表明，供试品在酸、碱、光照、高温、氧化条件下降解的杂质对于异构体的检测未能造成干扰。色谱图见图1。

2.5线性关系、检测限与定量限试验 取系统适用性溶液，精密量取该溶液 1.5、3、9、12和15 ml分别置 100 ml 量瓶中，异丙醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程。盐酸左布比卡因色谱峰的线性方程为：A=24.54C-2.563(r=0.999 5)；盐酸左布比卡因异构体色谱峰的线性方程为：A=23.99C+2.124(r=0.999 3)。试验结果表明，盐酸左布比卡因与异构体的色谱峰在0.15～1.5 μg/ml浓度范围内浓度与峰面积的线性关系良好。盐酸左布比卡因与异构体的色谱峰检测限浓度为0.075 μg/ml；定量限浓度为0.15 μg/ml。

2.6精密度试验 精密吸取系统适用性溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。重复进样6次，记录峰面积。结果显示，盐酸左布比卡因与异构体的峰面积的RSD值分别为0.5%和0.3%，表明精密度良好。

2.7溶液稳定性试验 取20170105批样品 1份，照“2.2.2”项下供试品溶液制备方法配制，分别于0、8、12、24、36、60和72 h进样，按“2.1”项下色谱条件测定。结果均未检出异构体。表明供试品溶液放置 72 h 内异构体含量未发生变化。

2.8耐用性试验 通过对柱温、流动相比例、流速的微小变化，同一品牌同一型号不同批号色谱柱的考查，不同品牌的仪器对异构体检查的影响。结果显示，仪器、色谱柱、柱温、流速、流动相比例的微小变化对异构体的测定无明显影响，表明耐用性良好。

2.9加样回收率试验 取盐酸左布比卡因注射液10 ml(约含盐酸左布比卡因750 mg)置1 000 ml量瓶，分别加入相当于盐酸左布比卡因0.08%、0.1%和0.12%的异构体对照品，每个质量浓度制备 3 份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，外标法计算，盐酸左布比卡因异构体平均回收率为99.6%，RSD为0.89%。结果见表1。

2.10样品的测定 取20170105、20170106、20170107 批3个批号的供试品，按“2.2.2”项下供试品溶液的配制方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，供试品溶液中均未检出异构体峰。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

3 讨论

超临界流体色谱相比于常规的手性分离有自己的独特优势，本试验中盐酸左布比卡因与异构体的分离度就优于文献中液相色谱法的分离效果。试验中，通过对多个品牌、多个型号、多种填料手性色谱柱的筛选，最终优选赛分公司的Chiralomix SD色谱柱；同时对改性剂进行了筛选，异丙醇的分离效果最好；在此基础上，对柱温、流速、仪器的背压进行了优化，确定了盐酸左布比卡因与异构体分离的最优条件。