β-链接蛋白在原发性浸润性乳腺导管癌组织中的异常表达检测

周桃珍，智艳芳，赵 玲

(1.郑州大学第三附属医院检验科，河南 郑州450052；2.郑州大学第三附属医院病理科，河南 郑州450052)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤以及恶性肿瘤死亡的主要原因[1]。淋巴系统转移是乳腺癌常见的一种转移形式，淋巴结转移是肿瘤预后的关键预示因素，因为肿瘤可以通过淋巴结转移到全身其他部位[2]。细胞间的黏附分子在肿瘤的转移及侵袭过程中也起着至关重要的作用[3]。

β-链接蛋白是黏附分子的主要组成部分，在细胞Wnt信号通路中发挥转录共同因子的作用[4-6]，并且在其他信号通路中也发挥相关作用，例如磷酸肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路[7]。

β-链接蛋白作为癌基因，其失调或激活可导致恶性肿瘤的发生[8]。有多种线索表明β-链接蛋白在乳腺癌的发生、发展中有着至关重要的作用[9-10]。转录后修饰的β-链接蛋白通过磷酸化水平的改变及转换率可能会影响其表达量、功能及黏附功能[11]。

本研究的主要目的是评估原发性浸润性乳腺导管癌组织中β-链接蛋白的表达并且分析其与临床病理参数之间的关系，对于有淋巴结转移者还进行转移后的相关因素研究。

1 资料与方法

1.1 标本来源选取我院2014年1月至2019年6月收治的乳腺癌石蜡包埋切片标本，均来源于乳房改良切除的组织标本，包括39例原发性浸润性乳腺导管癌和29例淋巴结转移癌，并收集相关临床病理资料[12- 13]。原始组织切片采用HE染色来确认肿瘤的病理诊断及分级，随后采用免疫组化检测组织中β-链接蛋白、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Ki-67等。

1.2 预后指数计算预后指数是预测原发性乳腺癌术后生存期的一个较好指标。计算公式：预后指数= 0.2×肿瘤大小(cm)+肿瘤分级(1～3)+淋巴结转移个数(1～3)。根据计算结果可将病例分为好、中、差等3个等级，得分分别为3.40分、3.41 ～ 5.40分、>5.40[14]。

1.3 免疫组化检测采用链霉亲和素-生物素免疫过氧化物酶复合染色法。将4 μm的组织切片用二甲苯脱蜡处理，随后用梯度酒精水化处理，在甲醇中用体积分数0.3%过氧化氢封闭内源性过氧化氢酶的活性30 min；在柠檬酸钠溶液中浸泡10 min后通过微波修复抗原。将处理好的组织切片分别与β-链接蛋白的单克隆抗体、ER的单克隆抗体、PR的单克隆抗体、Ki-67的单克隆抗体共同孵育2 h，随后与生物素标记的二抗在室温下孵育30 min，用3,3′二氨基联苯胺为显色剂的亲和素-生物素复合免疫过氧化物酶系统进行显色，用苏木精进行复染，每批标本均设磷酸盐缓冲液(PBS)染色的阴性对照。

1.4 免疫组化结果评分系统关于β-链接蛋白、ER、PR的表达评分，目前有一个半定量评分系统Histoscore[15]，这个系统用来评价细胞核、细胞膜和(或)细胞质中染色的强度(+ ～ +++)及细胞染色比例阳性(0%～100%)。Ki-67增殖指数是目前较为肯定的核增殖标志物，与细胞的增殖有关，依据数值大小分为高、低等2种情况。

2 结果

2.1 入组65例原发性浸润性乳腺导管癌患者的临床病理资料见表1。

表1 65例原发性浸润性乳腺导管癌患者的临床病理资料

续表1

2.2 原发性浸润性乳腺导管癌淋巴结转移与ER、PR、Ki-67增殖指数以及β-链接蛋白表达的关系见表2。

表2 原发性浸润性乳腺导管癌淋巴结转移与ER、PR、Ki-67增殖指数以及β-链接蛋白表达的关系

2.3 原发性浸润性乳腺导管癌组织中β-链接蛋白表达与临床病理参数的单因素分析结果见表3。

表3 原发性浸润性乳腺导管癌组织中β-链接蛋白表达与临床病理参数的单因素分析结果

2.4 原发性浸润性乳腺导管癌组织中β-链接蛋白表达与临床病理参数的多因素分析结果见表4。

3 讨论

以往研究[16-17]报道，β-链接蛋白在胰腺癌、直肠癌、子宫内膜癌中，β-链接蛋白的表达部位异常。在乳腺癌中，仅报道过β-链接蛋白在细胞膜或细胞质中表达异常[18-21]，仅2篇报道过核β-链接蛋白的表达异常[22-23]。细胞核β-链接蛋白的缺乏可能与以下3个原因有关：乳腺癌的细胞核β-链接蛋白表达水平过低，免疫组化检测不到；β-链接蛋白可能不存在于细胞核内，其表达可能是通过非Wnt信号通路代替或被移除细胞核内[24-25]。本研究结果显示：原发性浸润性乳腺导管癌淋巴结转移与ER、Ki-67增殖指数、细胞质β-链接蛋白、细胞膜β-链接蛋白表达有关。单因素分析显示，细胞质β-链接蛋白表达与肿瘤大小、肿瘤分级、淋巴结转移个数、预后指数、临床分期、Ki-67增殖指数有关，细胞膜β-链接蛋白表达与淋巴结转移个数、预后指数、临床分期、ER有关，细胞质/细胞膜比值与肿瘤大小、淋巴结转移个数、预后指数、临床分期、Ki-67增殖指数有关(P均<0.05)。多因素分析显示，细胞质β-链接蛋白与Ki-67增殖指数有关，细胞膜β-链接蛋白与淋巴结转移、ER有关，细胞质/细胞膜比值与淋巴结转移有关。这与以往文献报道一致[21-22,26]。总之，β-链接蛋白在原发性浸润性乳腺导管癌组织中存在异常表达，为其发生、发展及转移机制研究提供了新的思路。