前梯度蛋白2在食管鳞癌组织中的表达及其与预后的相关性

杜永红，崔园园，李晟磊

(1.郑州大学基础医学院病理学系，河南 郑州 450001；2.郑州大学第一附属医院病理科，河南 郑州 450052)

食管癌是常见的恶性肿瘤，由于肿瘤侵袭的特性及缺乏有效的个体治疗方法，食管癌患者5 a生存率仅为36%～47%，寻找新的分子靶点对于改善食管癌患者的预后具有十分重要的价值[1]。前梯度蛋白2(anterior gradient-2,AGR2)属于蛋白质二硫键异构酶家族成员之一，有助于肿瘤的存活、促进肿瘤的进展和恶性转化，可能成为肿瘤新的预后因子及潜在的治疗靶点[2]。本研究采用免疫组织化学的方法，研究AGR2在食管鳞癌组织中的表达，并探讨其与食管鳞癌患者临床病理特征及预后的关系，为AGR2用于靶向治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料收集2015年4月至2018年9月郑州大学第一附属医院收治的经病理学确诊的97例食管鳞癌标本和对应的97例正常食管上皮组织，总结患者临床理学特征。

1.2 指标检测手术标本经质量分数4%中性甲醛固定、常规脱水、石蜡包埋、4 μm切片，HE染色光镜检查。免疫组织化学采用Envision二步法。AGR2抗体(小鼠单克隆抗体)购于美国Santa Cruz公司。

1.3 判读标准AGR2染色的阳性信号呈棕黄色，主要定位于细胞质，随机选取5个高倍视野，对每个视野计数不少于200个染色细胞，按如下标准计数：1)染色深浅的判定标准：无显色(0分)；呈浅黄色(1分)；呈现棕黄色(2分)；呈现棕褐色(3分)；2)阳性细胞数的判定标准如下：阳性细胞数的比率<5%(0分)；5%～<25%(1分)；25%～<50%(2分)；50%～<75%(3分)；≥75%(4分)；3)将染色深浅和阳性细胞数的百分比相乘，这一结果即是每张切片染色的最终分值，具体的判定标准为：分值为0～1分为阴性(-)，分值为2～3分为弱阳性(+)，分值≥4分为阳性(++)，其中后两者均记为阳性。

1.4 随访电话随访主要随访方式，随访终止为出现由食管癌导致的相关死亡。

1.5 统计学处理采用SPSS 17.0进行统计学处理，免疫组织化学结果比较用χ2检验，AGR2蛋白表达与食管鳞癌患者预后之间的关系用log rank检验进行分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 AGR2蛋白在食管鳞癌组织和正常食管上皮组织中的表达AGR2定位于肿瘤细胞的细胞质中(图1)，其在食管鳞癌组织中的阳性率(82/97，84.5%)显著高于对应的正常食管上皮组织(11/97，11.3%)，差异有统计学意义(χ2=104.115，P<0.05，表1)。

图1 AGR2在食管鳞癌(A)和正常食管上皮(B)组织中的阳性表达(IHC，×200)

表1 AGR2在食管鳞癌和正常食管上皮组织中的表达

2.2 AGR2蛋白的表达与食管鳞癌患者临床病理学特征之间的关系AGR2蛋白表达与食管鳞癌患者的性别和年龄无关(P均>0.05)，但与分化程度、临床分期以及淋巴结转移密切相关(P均<0.05，表2)。

2.3 AGR2与食管鳞癌患者预后之间的关系AGR2高表达的食管鳞癌患者的生存时间显著短于AGR2低表达者，差异有统计学意义(P<0.05，图2)。

3 讨论

食管癌是世界范围第8常见的恶性肿瘤，每年估计有450 000例新发病例和400 000例死亡病例,以鳞癌多见。目前有多种治疗手段，但由于肿瘤侵袭的特性及缺乏有效的个体治疗方法，患者的预后差[1]。

AGR首次在爪蟾中被鉴定，根据其在早期发育阶段特异的表达模式而命名[3]。人类的AGR2主要高表达于肺、胃、结肠、前列腺和小肠组织中，这些组织包含黏液分泌的细胞。AGR2定位于染色体7p21.3区域，由8个外显子和9个转录本构成[4]。Pohler等[5]证实了AGR2作为存活因子，可在DNA损伤后通过抑制p53的磷酸化减弱p53的活性，提示AGR2与肿瘤的发生发展密切相关。研究[6]表明，当细胞缺氧的环境中，促进生存、血管生成、迁移或侵袭的基因被激活。AGR2就属于这样一类基因。目前，AGR2的过表达已经在多种不同的肿瘤中被报道，其过表达能促进肿瘤的进展和恶性转化。最为重要的是，AGR2作为潜在的诊断标志也已经在一些肿瘤中被证实，并可能成为肿瘤新的预后因子[7-8]。这些研究充分表明，AGR2可能在多种肿瘤的发生、发展、进展和转移中发挥重要的作用，因而可能成为许多肿瘤潜在的分子治疗靶点和预后因子。

表2 AGR2蛋白的表达与食管鳞癌患者临床病理学之间的关系

图2 AGR2蛋白的表达与食管鳞癌患者预后之间的关系

大多数研究认为AGR2在肿瘤的发生、发展过程中发挥癌基因的功能。Chung等[9]研究表明，AGR2在肺腺癌组织中上调9.9倍，能选择作为潜在肺腺癌的生物学标记，最为显著的是，AGR2在肺腺癌患者中的阳性率高达94%，阴性的AGR2表达与患者低的生存率密切相关(P=0.007)。Pizzi等[10]研究发现，AGR2 mRNA在鳞癌组织中显著上调，并且其蛋白表达与mRNA表达趋势具有一致性。Tsuji等[11]研究表明胞外AGR2能激活基质成纤维细胞，促进胃印戒细胞癌成纤维细胞相关肿瘤的侵袭。通过cDNA微陈列、免疫组织化学和组织芯片技术检测胰腺癌组织中AGR2的表达，发现前列腺癌组织中具有高水平AGR2表达[12-13]。这些研究均表明AGR2在肿瘤发生、发展中有重要作用。本研究采用免疫组织化学方法研究了AGR2在食管鳞癌以及正常食管黏膜组织中的表达，我们发现AGR2在食管鳞癌组织中的表达显著高于正常食管上皮。这说明AGR2与食管鳞癌的发生密切相关。我们还发现，AGR2的表达与患者的分化程度、临床分期和淋巴结转移相关，并且高表达AGR2的食管鳞癌患者的生存时间显著低于低表达AGR2的食管鳞癌患者。这提示AGR2可以作为一个预测食管鳞癌患者预后的指标。

总之，AGR2在食管鳞癌组织中表达显著上调，并且患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移以及预后相关，这提示AGR2在食管鳞癌的发生、发展中发挥重要的作用。因此，抑制AGR2的表达可能成为未来食管鳞癌分子靶向治疗潜在的靶点。对于AGR2在食管鳞癌组织中高表达的机制，尚需要进一步的研究。