采供血机构HBSAg金标法检测后再次复查的必要性探讨

虞莉 黎金凤(通讯作者)

（扬州市中心血站 江苏 扬州 225012）

乙型肝炎病毒（HBV）是引起我国肝炎疾病的主要病毒，我国HBV的携带者高达6%左右，是一个“乙肝大国”[1]。其通过多种途径可以传播，血液传播也是其中一个方式，因此作为乙型肝炎病毒感染的最主要的检测指标之一的乙肝表面抗原（HBsAg），是采供血机构筛查血液的必须检测的指标[2]。其检测方法主要有金标试纸法、ELISA法以及实时荧光聚式酶联反应（PCR）等。采供血机构将金标试纸法作为HBsAg的初筛方法，一旦检测呈阳性反应，就不允许其进行献血。初筛合格的献血者献血后从血袋分别留取三管标本，用于两种不同厂家的ELISA试剂和一次核酸的检测。不合格初筛标本也带回检验科用两个厂家的ELISA试剂复检。现将我站2017年1月—10月收集的197份HBsAg金标法弱阳性标本和30351份金标阴性献血者的静脉血标本进行ELISA检测并对其结果分析。

1.资料和方法

1.1 一般资料

2017年1月—10月收集的HBsAg金标法阳性标本197份和检测阴性的30351份外周血标本。

1.2 仪器和试剂

1.2.1 仪器 STAR全自动加样系统(瑞士Hamilton)、FAME全自动酶免分析系统(瑞士Hamilton)、血清学离心机、加样枪、一次性加样吸头等。

1.2.2 试剂 乙肝金标快速试纸条（英科新创），乙肝病毒表面抗原诊断试剂盒（上海科华/珠海丽珠）。

1.3 方法

对30548份标本分别采用上海科华和珠海丽珠生产的乙肝病毒表面抗原诊断试剂盒进行检测。标本用STAR全自动加样系统进行加样，加样结束后采用FAME全自动酶免分析系统进行后处理并得出结果。

2.结果

2.1 对30548份献血者标本分别用金标法和ELISA法检测HBsAg，结果见表1。

从表1中可以看出ELISA法检测标本的HBsAg阳性检出率要高于金标试纸法。

表1 两种方法对30548个标本检测结果 [n（%）]

用两个厂家ELISA法试剂检测标本，任意一家试剂检测阳性，结果均判定为阳性。

2.2 应用两个厂家ELISA法试剂分别对HBsAg金标法阳性和阴性的标本进行检测对比见表2。

表2 金标与ELISA（两次不同厂家）法试剂检测结果对比表 [n（%）]

从表2中可以看出金标法检测出阳性的标本，经过ELISA检测后约25.4%最终判定为阴性，说明金标法假阳性率仍较高。

3.讨论

根据实验结果显示ELISA试剂的阳性率高于金标法。金标法检测的假阴性率为0.25%和假阳性率25.4%。这除了在方法学上，金标法在灵敏度和特异性方面都不如ELISA外，还有其他实际工作中的一系列影响。采供血机构对上述检测结果的处理办法如下：（1）对金标法阳性和ELISA法双阳性献血者进行永久性屏蔽，终身不能献血；（2）金标法阳性、ELISA法双阴性献血者，在其他献血检测项目都合格的情况下，可以通知其献血；（3）金标法阳性、ELISA法单阳的献血者进行暂时性屏蔽，并通知其三个月以后进行抽血复查，若ELISA检测结果为双阴性则允许其献血者归队；（4）金标法阴性、ELISA法双阳的则需保密性弃血，并永久性屏蔽，不得献血；（5）金标法阴性、ELISA法单阳的则需保密性弃血，并对其暂时性屏蔽，通知献血者三个月以后进行复查，若ELISA检测结果为双阴性，则允许其归队[3]；（6）金标法阴性、ELISA法双阴的，其血液标本再次进行核酸检测。核酸检测合格后方可以确认HBsAg项目合格。

为了进一步保证检测结果的准确性，防止检测结果的假阳性过高，采供血机构需要制定合理规范的检测流程，对检测结果应慎重分析。具体如下：（1）在采供血机构，金标法一般用于街头献血或者单位团体献血的初筛实验。站外采血现场情况复杂，导致检测人员未按规定的时间（10min～15 min）观察结果，这虽筛除了很多强阳性标本，却漏检了弱阳性标本[4]。（2）因采血现场实验条件的简陋，加样枪时有被摔，使得加样量不准，影响结果判断；而这在实验室是不可能发生的；（3）个别标本可能存在HBSAg的基因突变，抑或产生新的其它亚型，通过金标法无法检出[5]。（4）现场环境温湿度达不到要求，过分干燥或潮湿的环境以及过高或过低的温度会影响试纸条的灵敏度和特异性；（5）很多外采操作人员一般都是非检验专业，其本身的专业水平有限，时有操作不规范，以及对检测结果的判读因缺乏经验而不够准确。而检验科复做，除了ELISA方法学本身的优势外，一般实验室的温湿度都能达到实验要求，整个ELISA实验的全部过程都是自动化，避免了人员操作的干扰因素。

因此对金标法检测后的标本重新检测就显得尤为重要。在实际工作中，根据《血站实验室质量管理办法》要求采供血机构需要对献血者标本应用两个厂家ELISA法试剂和一次核酸检测。但有很多采供血机构不对金标法阳性的标本进行其他方法学的复查，笔者认为这是不可取的。通过ELISA法对金标法阳性标本的再次检测，挽回了部分假阳性的献血者，保护了他们继续行使无偿献血的权利，还可以扩充献血队伍；同时消除了这些假阳性献血者的精神负担，创造了一定的社会效益，维护了血站的形象；而金标法阴性经ELISA检测阳性的标本，我们会用两种不同的试剂，将标本和其相对应的血袋上的辫血双孔复做，只要有一孔有反应性，则将其血液作报废处理；所有孔都有反应性，则屏蔽该献血员。部分有反应的则血液报废，通知献血者定期复查，两种试剂检测都是阴性后，重新恢复献血者献血权利。目前，扬州市中心血站对HBSAg的检测推行了先采用不同厂家两种试剂盒的两次ELISA检测，结果双阴性的标本再进行一次核酸检测。一定程度上节约了核酸检测的成本，保障临床用血的安全[6]。

综上所述，为了保障临床用血安全，珍惜宝贵血液资源。采供血机构必须提高血液检测的有效性和可靠性；重视操作人员业务技能培训，使其严格遵守各项操作规程以保证检测结果的准确性。