老年肌少症患者外周血白细胞及淋巴细胞亚群的分析

王一栋，陈艳，王双双，杜文玲，郑永克

（1.温州市中心医院 老年医学科，浙江 温州 325000；2.温州医科大学附属第二医院 骨科，浙江 温州325027；3.温州市中心医院 妇产科，浙江 温州 325000）

肌少症是一种渐进性和全面的骨骼肌丢失及力量减退的综合征，并可能导致机体残疾、生活质量下降甚至死亡的不良后果[1-2]。与骨质疏松相比，肌少症近10年来才逐渐受到重视。2016年，中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会发表了肌少症共识，提高了我国医务工作者对肌少症的认识，规范了我国肌少症的临床诊疗工作[2]。肌少症是增龄相关疾病，是环境和遗传因素共同作用的复杂疾病，多种风险因素和机制参与其发生[2-5]。其机制包括运动减少、神经-肌肉功能减弱、增龄相关激素变化、促炎性反应细胞因子水平增高、肌细胞凋亡、遗传因素、营养因素等。本研究从外周血淋巴细胞亚群水平来初步探讨肌少症患者的发病机制。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2017年6月至2018年2月温州市中心医院老年医学科就诊的老年患者120例，年龄61～86岁，平均（70.2±6.8）岁。排除标准：近期有感染（感染时间＜1个月）、炎症性疾病、自身免疫疾病、恶性肿瘤、严重的营养不良及严重的器官功能不全（包括心力衰竭、呼吸衰竭、肝功能不全、肾功能不全等）的患者。本研究经本院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 肌少症诊断标准：根据2016年中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会发表的肌少症共识的标准[2]。采用双能X线吸收测量仪（dual energy X-ray absorptiometry，DXA）检测肌量，四肢肌量指数[四肢肌量（kg）/身高2（m2）]：男性＜7.26 kg/m2，女性＜5.45 kg/m2。肌少症诊断流程见图1。

1.2.2 分组：依据肌少症诊断标准，分为肌少症组和非肌少症组，其中肌少症患者48例，非肌少症患者72例。入组后行血常规、淋巴细胞亚群、血C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）等检查。

1.2.3 检测方法：采用免疫荧光双标记法和流式细胞仪检测入组患者外周血中T淋巴细胞及其亚群[包括总T淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、NK细胞（CD3-CD56+）、NK样细胞（CD3+CD56+）、记忆T细胞（CD4+CD45RO+）、初始T细胞（CD4+CD45RA+）、双阴T淋巴细胞（CD3+CD4-CD8-）]；采用血液细胞分析仪和全自动生化分析仪分别检测血常规及CRP。

图1 肌少症诊断流程图

1.3 统计学处理方法 采用SPSS24.0统计软件进行统计学分析。计量资料用 ±s表示，2组间比较采用两独立样本t检验，计数资料以率表示，2组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者临床基线资料比较 2组患者的年龄、性别、体质量指数、吸烟比例、高血压比例、糖尿病比例差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.2 2组患者血常规及淋巴细胞亚群检测结果比较 肌少症组患者外周血白细胞计数、NK细胞（CD3-CD56+）、CRP较非肌少症组高，差异有统计学意义（P＜0.05）。而2组间总淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、NK样细胞（CD3+CD56+）、记忆T细胞（CD4+CD45RO+）、初始T细胞（CD4+CD45RA+）、双阴T淋巴细胞（CD3+CD4-CD8-）水平的差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表1 2组患者临床基线资料比较

3 讨论

研究显示，免疫系统在肌少症的发生、发展中扮演重要的角色，全身炎性反应导致肌肉组织合成代谢失衡，蛋白分解代谢增加[6-8]。而免疫细胞是免疫系统的功能单元，承担免疫防御、免疫监视和免疫自稳的功能。包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、树突状细胞、NK细胞等，而临床上应用最多的指标是外周血白细胞。CRP是伴随组织损伤、局部缺血、急性感染与炎症反应而升高的一种血浆蛋白质，可以介导炎症和促进炎症反应的发生、抑制受损组织和聚集的吞噬细胞释放血管活性物质和多种蛋白质分解酶的活性、免疫调节、清除炎症物质和修复损伤的组织等功能[9-10]。本研究结果显示，肌少症患者外周血的白细胞计数和CRP均显著高于非肌少症组，提示机体存在微炎症状态。这与COLLERTON等[11]的研究结果相似，在肌少症患者中，白细胞计数和中性粒细胞计数较无肌少症患者高。随着年龄的增加，中性粒细胞的趋化功能下降，迁移效率减退，导致组织受损和继发的全身炎症反应[12-14]。中性粒细胞的趋化功能下降，联系着肌细胞持续的PI3-K信号的表达，通过PI3-K/Akt/mTOR信号途径使肌肉分解代谢增加，从而引起肌肉量减少[14-15]。FERNÁNDEZ-GARRIDO等[16]发现，中性粒细胞计数越高，患者的身体活动能力越差。在60岁以上的健康老年人中，白细胞计数的高低能预测10年后患者的衰弱程度[17]。

表2 2组患者血常规及淋巴细胞亚群检测结果比较（ ±s）

淋巴细胞是不均一的细胞群体，包括许多具有不同免疫功能的亚群，CD4+T细胞能促进B细胞、T细胞和其他免疫细胞的增殖与分化，协调免疫细胞间的相互作用；而CD8+T细胞的功能亚群主要包括杀伤性T细胞和抑制性T细胞[18-19]。对于淋巴细胞亚群在肌少症中的作用，目前鲜有研究报道。本研究中，肌少症患者的外周血总淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、NK样细胞、记忆T细胞、初始T细胞、双阴T淋巴细胞水平和非肌少症患者无显著差异，但NK细胞百分比显著高于非肌少症组。NK细胞是淋巴细胞的一个亚群，是固有免疫应答的重要细胞，被誉为固有免疫核心细胞，具有杀伤和免疫调节功能。本研究显示，NK细胞百分比高可能与肌少症患者的固有免疫应答过强有关。WILSON等[6]研究显示，固有免疫系统的细胞可能间接导致肌少症。

总之，本研究显示，肌少症患者的外周血白细胞、NK细胞、CRP较非肌少症患者显著升高，可能与机体微炎症状态和固有免疫功能过强有关，从而间接引起肌组织的丢失而导致肌少症。