2种血液分析仪检测1例嗜酸性粒细胞颗粒减少标本结果分析

张 驰

（华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科，湖北 武汉 430030）

现有的五分类血液分析仪大多采用射频/直流电检测方法，配合荧光染色技术，通过激光照射，在鞘流液的作用下，收集不同角度的吸收光和发散光，从而对细胞进行分类。然而，嗜酸性粒细胞（eosinophil，EO）颗粒减少会改变吸收光和发散光的强度，使细胞坐标落在非预期区域内，从而导致检测结果错误。本研究对1例EO颗粒减少患者2种血液分析仪的检测结果进行了分析、比较。

1 材料和方法

1.1 研究对象

患者，男，49岁，因皮肤瘙痒伴红疹至华中科技大学同济医学院附属同济医院门诊就诊，并诊断为特发性EO增多症，该患者EO胞质内嗜酸性颗粒减少，总免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）水平为1 345 IU/mL。

1.2 仪器与试剂

XE-5000全自动血液分析仪（简称XE-5000）（日本Sysmex公司）及配套试剂，该仪器通过核酸荧光染色及半导体激光流式细胞术对白细胞（white blood cell，WBC）进行检测和分类[1]；CELL-DYN Sapphire血液分析仪（简称Sapphire）（美国Abbott公司）及配套试剂，该仪器采用多角度偏振光散射法，通过0°/7°散射光来获得散点图，从而对WBC进行检测和分类[2]；DM1000显微镜（德国Leica公司）。

1.3 方法

采集研究对象血液标本，并采用乙二胺四乙酸二钾进行抗凝处理，所有检测在2 h内完成。XE-5000和Sapphire均采用普通闭合模式完成检测。按《全国临床检验操作规程》（第3版）[3]要求制作血涂片，并进行染色。采用人工镜检连续分类200个WBC，并计算中性粒细胞（neutrophil，NEUT）百分比（NEUT%）、淋巴细胞（lymphocyte，LYM）百分比（LYM%）、单核细胞（monocyte，MO）百分比（MO%）、EO百分比（EO%）、嗜碱性粒细胞（basophil，BA）百分比（BA%）。

2 结果

2.1 WBC分类结果

XE-5000和Sapphire均未检出EO，而人工镜检EO%检测结果为47.5%；XE-5000和Sapphire LYM%、MO%检测结果与人工镜检结果基本一致，而NEUT%与人工镜检NEUT%+EO%结果基本吻合。见表1。

2.2 WBC散点图

XE-5000 WBC散点图显示，有1个细胞群（天蓝色部分）与NEUT细胞群部分重合，而预期EO区域却无散点分布，说明仪器将EO颗粒减少的细胞群错认为NEUT细胞群，见图1。Sapphire WBC散点图显示，有1个细胞群（白色部分）与NEUT细胞群（黄色部分）大部分重合，而预期EO区域却无散点分布，见图2。人工镜检发现EO的嗜酸性颗粒明显减少，见图3。

表1 XE-5000和Sapphire检测结果与人工镜检结果的比较 （%）

图1 XE-5000研究对象与正常人群WBC散点图

图2 Sapphire研究对象与正常人群WBC散点图

图3 人工镜检研究对象与正常人群EO形态比较

3 讨论

EO增多常见于寄生虫病、过敏性疾病（支气管哮喘、坏死性血管炎及药物过敏反应）及某些血液病[4]。该患者人工镜检结果提示EO%明显增高（47.5%），总IgE水平也高达1 345 IU/mL，皮肤出现瘙痒伴红疹情况，提示机体可能出现严重过敏反应。虽然该患者EO胞质内嗜酸性颗粒减少明显（图1），看似NEUT颗粒相对增多，但是仍可通过人工镜检根据颗粒形态对二者进行仔细辨别（NEUT颗粒细小、均匀，EO颗粒粗大、折光性强）。这虽不影响人工辨识，但对仪器检测却有致命的干扰。程翔等[5]的研究结果表明，亚硝酸盐中毒可使检测对象NEUT呈弱碱性，NEUT颗粒呈嗜酸性，导致XN-3000全自动血液分析仪（日本Sysmex公司）将其误认为EO。当NEUT和EO胞质内颗粒发生改变时，仪器无法对二者进行辨别，须从检测原理上进行分析。

前向散射光可用来反映WBC体积大小；侧向散射光可反映胞质内颗粒数量；侧向荧光可反映DNA和RNA的含量。嗜酸性颗粒因其大而圆，比其他细胞内颗粒更有折光性，故在5类WBC中侧向散射光最大，而核酸物质却与NEUT相当，所以有着类似的侧向荧光。嗜酸性颗粒减少EO的侧向散射光小于正常EO，却与NEUT的侧向散射光较为接近，使得该类细胞散点坐标与NEUT散点坐标重合，故仪器无法清楚地区分这2群细胞（图1）。Sapphire通过多角度偏振光散射法对WBC进行分类，在鞘流液作用下单个血细胞通过激光束照射，在各个方向产生散射光，仪器对多个角度散射光信号进行收集，其中0度为前向散射光，可反映细胞大小，7度为狭角散射光，可反映细胞内结构和复杂性。EO因体积略小于NEUT，细胞内结构较LYM稍复杂，而位于LYM群与NEUT群中间。该患者EO胞质内嗜酸性颗粒减少，同时中性颗粒相对增多，细胞内复杂性增强（7度狭角散射光更强），且细胞体积比正常EO更大（0度前向散射光更强），故该细胞群在WBC散点图中的所在区域与NEUT细胞群区域基本重合，导致仪器无法对二者进行区分（图2）。

综上所述，为了避免EO颗粒减少或缺失而产生的血液分析仪EO假性减少的情况，需对NEUT%异常增高的标本结合WBC散点图进行分析。当NEUT散点群疑似与另一细胞群部分重叠而导致散点群形态不规则（非椭圆形）时，须手工推片复检，以得到准确、可靠的检测结果。