秋水仙碱长期干预高脂饮食大鼠的安全性研究

张帆 赵春辉 陈丽 黄明月

[摘要]目的 探讨秋水仙碱长期干预高脂饮食大鼠的安全性。方法 将30只SPF级健康雄性8周龄SD大鼠随机分为3组，各10只。对照组大鼠采用基础饲料喂养+生理盐水管饲喂养8周；高脂组大鼠采用按比例配方的高脂喂养+生理盐水管饲喂养8周，观察组大鼠采用按比例配方的高脂喂养并给予秋水仙碱[0.02 mg/（kg·d）]管饲喂养8周，比较三组大鼠的骨髓抑制情况和免疫功能。结果 观察组的白细胞、红细胞、血红蛋白的骨髓抑制发生率高于对照组、高脂组，差异均有统计学意义（P<0.05）。观察组的CD3、CD8、CD56、CD4/CD8高于对照组、高脂组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组斑块内浸润的巨噬细胞个数为（17.93±3.87）%，低于高脂组的（22.98±2.12）%，差异有统计学意义（P<0.05），与对照组的（16.78±2.98）%比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 长期应用秋水仙碱干预高脂饮食大鼠会引起大鼠的骨髓抑制和免疫功能紊乱，该研究结果也提示临床治疗应综合考虑，进行全面评估，以提高治疗效果。

[关键词]高脂饮食；骨髓抑制；大鼠；免疫功能

[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）11（c）-0037-03

[Abstract] Objective To explore the safety of Colchicine for long-term intervention in rats fed with high-fat diet. Methods Thirty healthy and male rats （SPF grade） were randomly divided into the 3 groups， and there were 10 rats in each group. Rats in the control group were fed with basal feed and saline for 8 weeks. Rats in the high-fat group were given proportionally formulated high-fat feeding + saline tube feeding for 8 weeks. The rats in the observation group were given proportionally formulated high-fat feeding + Colchicine （0.02 mg/[kg·d]） tube feeding for 8 weeks. Bone marrow suppression and immune function were compared in rats among the three groups. Results The incidence of myelosuppression of leukocytes， erythrocytes， and hemoglobin in the observation group was higher than that of the control group and high-fat group reapectively， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The CD3， CD8， CD56， and CD4/CD8 in the observation group was higher than that of the control group and high-fat group reapectively， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of infiltrating macrophages in plaque of the observation group was （17.93±3.87）%， which was significantly lower than that of the high-fat group （[22.98±2.12] %）， and the difference was statistically significant （P<0.05）， and there was no significant difference between the observation group and control group （[16.78±2.98]%） （P>0.05）. Conclusion Long-term use of Colchicine in rats with high-fat diet can cause myelosuppression and immune dysfunction. The results also suggest that clinical treatment should be considered comprehensively and evaluated comprehensively in order to improve the therapeutic effect.

[Key words] High fat diet； Myelosuppression； Rats； Immune function

動脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是血管内皮损伤导致的以脂质沉积和慢性炎症反应为特点的血管壁病变[1-2]。动脉硬化斑块的发生、发展乃至不稳定斑块的破裂已证实与炎症反应有关，其中炎症因子起重要作用。由于炎症反应是机体防御功能的一部分，抗AS药物长期应用产生的抗炎作用可降低机体的防御功能，因此长期应用秋水仙碱导致的骨髓抑制、糖皮质激素以及免疫抑制剂等会诱发感染等不良反应[3-5]。本研究通过探讨秋水仙碱对高脂饮食大鼠的骨髓功能和免疫功能的影响，明确秋水仙碱长期干预高脂饮食大鼠的安全性。

1材料与方法

1.1实验动物

试验所用健康雄性SD大鼠为SPF级的8周龄大鼠由广东省某实验提供，共30只，体重（205±20）g。

1.2分组与喂养

30只大鼠用随机分为三组，每组10只。对照组采用基础饲料喂养+生理盐水管饲喂养8周；高脂组采用按比例配方的高脂喂养+生理盐水管饲喂养8周，观察组采用按比例配方的高脂喂养并给予秋水仙碱（云南植物药业有限公司，0.02 mg/（kg·d）喂养8周，实验结束后收集大鼠血液，待测。

1.3血清指标的检测

在治疗前及治疗完成后采集外周血2 ml，Ficoll 密度梯度离心法分离淋巴细胞，流式细胞仪检测 CD3、CD4、CD8、CD56 T细胞水平变化，评价机体的免疫功能。

主动脉HE染色，测定斑块的面积，脂质核心面积、纤维帽的厚度，斑块内浸润的巨噬细胞个数。大鼠动脉粥样硬化模型成功的判断标准为：主动脉管腔变小，内膜明显增厚，内膜下大量平滑肌细胞（SMC）增生，脂质斑块弥漫，可见泡沫细胞积聚，斑块底部泡沫细胞发生变性坏死，内弹力层和中弹力板发生变性、断裂和崩解，在内膜和中膜均出现了大量的斑快和炎细胞浸润，其中易损斑块的评价标准：纤维帽（<65 μm），大面积坏死的脂质核心占斑块面积30%以上，其中还含有大量巨噬细胞等炎症细胞（>25个/高倍镜下）及少量的平滑肌细胞。

治疗后进行大鼠的血常规检查，骨髓的抑制程度根据WHO分为0～Ⅳ级：0级：白细胞≥4.0×109/L，血红蛋白≥110 g/L，血小板≥100×109/L；Ⅰ级：白细胞（3.0～3.9）×109/L，血红蛋白95～100 g/L，血小板（75～99）×109/L；Ⅱ级：白细胞（2.0～2.9）×109/L，血红蛋白80～94 g/L，血小板（50～74）×109/L；Ⅲ级：白细胞（1.0～1.9）×109/L ，血红蛋白65～79 g/L，血小板（25～49）×109/L；Ⅳ级：白细胞（0～1.0）×109/L ，血红蛋白<65g/L，血小板<25×109/L。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件分析数据，计量资料用x±s表示，组间比较采用两样本独立t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 三组大鼠骨髓抑制发生率的比较

观察组的白细胞、红细胞、血红蛋白的骨髓抑制发生率高于对照组、高脂组，差异均有统计学意义（P<0.05）；观察组和高脂组的白细胞、红细胞、血红蛋白的骨髓抑制发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2三组大鼠免疫功能相关指标的比较

高脂组与对照组大鼠的CD3、CD4、CD8、CD56、CD4/CD8比较，差异无统计学意义（P>0.05），高脂组与观察组的CD3、CD8、CD56、CD4/CD8比较，差异有统计学意义（P<0.05），但高脂组与觀察组的CD4比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表2）。

2.3 主动脉HE染色结果

对照组大鼠血管壁内膜、中膜、外膜及平滑肌细胞结构清晰、细胞排列整齐，高脂组和观察组大鼠的主动脉官腔可见典型的纤维斑块及粥样斑块，内膜明显增厚，但是高脂组大鼠的斑块体积较大，融合成片，官腔较狭窄，形成的斑块多为纤维帽薄，脂质核心大的斑块，符合易损斑块的特点，但是经过秋水仙碱干预的大鼠的动脉斑块病变程度浅，斑块的病变较为局限，官腔的狭窄程度较轻，形成的粥样斑块多为纤维帽厚，脂质核心小的稳定性的斑块（图1）。

高脂组斑块内浸润的巨噬细胞个数为（22.98±2.12）%，显著高于对照组的（16.78±2.98）%，观察组为（17.93±3.87）%，显著低于高脂组（P<0.05），观察组斑块内浸润的巨噬细胞个数与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

3讨论

秋水仙碱虽然能降低稳定性冠心病患者的血浆hs-CRP浓度，缩短患者的住院时间等，但是长期使用秋水仙碱则会发生骨髓抑制等不良反应[6-8]。本研究结果显示，高脂饮食并不能引起大鼠的骨髓抑制，但是长期使用秋水仙碱干预高脂饮食大鼠后，大鼠的白细胞、血红细胞和血小板的毒性程度发生了改变，因此，在秋水仙碱用药中，要密切关注骨髓抑制的症状[9]。

长期的秋水仙碱药物使用对大鼠的免疫功能也造成了很大的影响[10-12]，本研究结果显示，观察组大鼠外周血中的CD8、CD56、CD4/CD8在秋水仙碱药物干预后呈显著上升趋势，CD4细胞的含量虽然无明显变化，但是CD4/CD8显著降低，提示大鼠的免疫功能已经紊乱[13-15]，但是其对免疫功能的影响机制还有待进一步研究。

斑块内的巨噬细胞对粥样斑块的稳定性起很重要的作用。巨噬细胞能损伤内皮细胞[16-18]，分泌的活性金属蛋白酶会降解斑块中的胶原和细胞外物质，引起纤维帽变薄，血管的易损性增加。本研究结果显示，秋水仙碱可以显著降低巨噬细胞的数量，起稳定斑块的作用[19-20]，这与主动脉的HE染色结果是一致的。

综上所述，长期应用秋水仙碱干预高脂饮食大鼠会引起大鼠骨髓抑制，导致大鼠的免疫功能紊乱，该研究结果也提示临床治疗中应综合考虑，对患者进行全面评估，提高其治疗效果。

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