TCEAL 7、Wnt、β-catenin在结直肠癌组织中的表达情况及TCEAL 7表达与预后的关系

姜淼，马志斌，李小雪，牛思佳

哈尔滨医科大学附属第一医院消化内科，哈尔滨150001

结直肠癌是消化系统恶性肿瘤之一，其发病率较高，且全世界结直肠癌的发病率以每年2%的速度上升[1]。近年来，迅速发展的诊疗技术，极大地改善了结直肠癌患者的预后，但是其病死率仍然居高不下。部分结直肠癌患者被确诊时，已达疾病晚期，严重影响患者的治疗，而新的肿瘤标志物将有助于结直肠癌患者的早期诊断和治疗。作为转录延伸因子A样蛋白家族成员，转录延伸因子类（transcriptional elongation factor like 7，TCEAL7）全长2138 bp，编码100个氨基酸，依赖启动子调节细胞内转录[2-3]。研究显示，TCEAL7在胃癌、卵巢癌和子宫内膜癌等多种肿瘤组织中低表达[4-6]。以上研究提示，TCEAL7具有成为肿瘤标志物的价值，但其在结直肠癌中的研究报道较少。研究显示，TCEAL7在结直肠癌细胞中低表达，如过表达TCEAL7，可以抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭，促进细胞凋亡[7]。但此项研究仅关注肿瘤细胞的TCEAL7表达变化，并未在肿瘤组织中发现其表达变化。Wnt/β-catenin信号转导通路与细胞的转运和调亡有关。研究显示，该Wnt/β-catenin信号转导通路可以在多种肿瘤的发生中被激活并发挥关键的作用，如结直肠癌[7-8]，同时在结直肠癌的侵袭转移中起着重要的作用[9-10]。Wnt和β-catenin是Wnt/β-catenin信号通路的重要元件，通过对其检测可以反映Wnt/β-catenin信号通路的变化。因此，本研究重点检测结直肠癌组织与癌旁正常组织中TCEAL7、Wnt、β-catenin 的表达情况 ，分析TCEAL7、Wnt、β-catenin的表达情况与结直肠癌患者临床特征的关系，分析TCEAL7表达与Wnt、βcatenin表达的相关性，分析TCEAL7表达与结直肠癌患者预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2005年1月至2010年12月在哈尔滨医科大学附属第一医院接受手术治疗的结直肠癌患者的临床资料。纳入标准：①出现结直肠癌的临床症状，并符合结直肠癌诊断，术后病理证实为结直肠癌；②术前无辅助放化疗；③行一期手术切除；④病理组织均残留少部分正常组织（距肿瘤组织约2.0 cm），标本保存完好；⑤临床资料完整。排除标准：治疗中断的患者。根据纳入排除标准，共纳入50例结直肠癌患者，其中男性35例，女性15例；年龄为26～75岁，平均年龄为（56.2±8.6）岁。

1.2 评价指标

检测TCEAL7基因及Wnt、β-catenin蛋白的表达情况，分析三者的表达情况与结直肠癌患者临床特征的关系，分析三者表达情况的相关性，分析TCEAL7基因的表达情况与结直肠癌患者预后的关系。随访方式为电话随访和门诊复查的方式相结合，随访时间为63个月。

1.3 检测方法

1.3.1TCEAL 7基因的检测 采用逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测TCEAL7基因的相对表达量。采用TRIzol试剂盒（购于Promega公司）提取结直肠癌组织和癌旁正常组织中的mRNA，采用逆转录试剂盒（购于Promega公司）将提取的总RNA逆转录为cDNA。采用primer 5.0软件设计引物，TCEAL7基因长度为234 bp；以β-actin为内参，长度为315 bp（表1），经上海生工公司合成。采用荧光定量PCR试剂盒（购于全式金公司）进行检测[11]。TCEAL7＞0.32为高表达。

表1 TCEAL 7和 β-actin的引物序列

1.3.2 Wnt和 β-catenin蛋白的检测 取每例结直肠癌组织及癌旁正常组织的石蜡组织切片，采用鼠抗人Wnt、β-catenin单抗及免疫组化试剂盒（购于武汉博士德生物公司），参考Soini[12]改良法的标准，进行免疫组织化学检测。根据BX53显微镜（购于奥林巴斯）400倍视野下染色细胞所占比例和染色强度分析蛋白表达水平。参照王爱民等[13]的染色细胞所占比例评分标准：0分，阳性细胞所占比例＜10%；1分，10%≤阳性细胞所占比例＜40%；2分，40%≤阳性细胞所占比例＜70%；3分，阳性细胞所占比例≥70%。细胞染色评分标准[13]：0分，不着色；1分，染色呈黄色；2分，染色呈棕黄色；3分，染色呈黄褐色。蛋白水平的评分=阳性细胞所占比例评分+细胞染色评分，0～3分为低表达，4～6分为高表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件分析数据。计数资料以例数和率（%）表示，采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验；采用Kaplan-Meier法绘制TCEAL7高、低表达患者的生存曲线，采用Log-rank法比较TCEAL7高、低表达患者的生存情况。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TCEAL 7基因的相对表达量

TCEAL7基因在50例结直肠癌组织中的相对表达量为（0.36±0.02），明显低于50例癌旁正常组织的（1.20±0.13），差异有统计学意义（t=20.659，P＜0.01）。

2.2 不同临床特征的结直肠癌患者TCEAL 7、Wnt、β-catenin的表达情况

不同临床分期、淋巴结转移情况、远处转移情况的结直肠癌患者的TCEAL7的表达情况比较，差异均有统计学意义（χ2=5.433、6.566、3.979，P=0.020、0.010、0.046），但不同性别、年龄结直肠癌患者的TCEAL7的表达情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同临床分期、淋巴结转移情况、远处转移情况的结直肠癌患者的Wnt的表达情况比较，差异均有统计学意义（χ2=4.160、7.219、6.349，P=0.041、0.007、0.012），但不同性别、年龄结直肠癌患者的Wnt的表达情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同临床分期、淋巴结转移情况、远处转移情况的结直肠癌患者的β-catenin的表达情况比较，差异均有统计学意义（χ2=8.631、10.141、7.028，P=0.003、0.001、0.008），但不同性别、年龄结直肠癌患者的β-catenin的表达情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

表2 不同临床特征的结直肠癌患者TCEAL 7、Wnt、β-catenin的表达情况

2.3 TCEAL 7表达情况与Wnt、β-catenin表达情况的相关性

结直肠癌组织中TCEAL7的表达情况与Wnt、βcatenin的表达情况均呈负相关（r=-0.583、-0.392，P＜0.01）。（表3）

表3 结直肠癌组织中TCEAL 7表达情况与Wnt、β-catenin表达情况的对照

2.4 TCEAL 7表达情况与预后的关系

TCEAL7高表达患者的生存情况优于TCEAL7低表达患者，差异有统计学意义（χ2=4.559，P=0.032）。（图1）

3 讨论

图1 TCEAL 7低表达（ n=32）与高表达（ n=18）结直肠癌患者的生存曲线

本研究显示，结直肠癌组织中TCEAL7的相对表达量明显低于癌旁正常组织（P＜0.01），同时不同临床分期、淋巴结转移情况、远处转移情况的结直肠癌患者的TCEAL7、Wnt、β-catenin的表达情况比较，差异均有统计学意义（P＞0.05），但不同性别、年龄结直肠癌患者的TCEAL7、Wnt、β-catenin的表达情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；结直肠癌组织中TCEAL7的表达情况与Wnt、βcatenin的表达情况呈负相关（P＜0.01）。进一步分析TCEAL7表达情况与结直肠癌患者预后的关系，发现TCEAL7高表达患者的生存情况优于TCEAL7低表达患者（P＜0.05），说明TCEAL7具备作为结直肠癌肿瘤标志物的潜在价值。TCEAL7位于22.1-22.2区域的X染色体长臂，含有转录因子A（transcription factor A，TFA）结构域，可以通过依赖启动子调节转录。Chien等[4]发现，TCEAL7在卵巢癌组织和细胞中低表达甚至无表达；过表达TCEAL7，可以抑制卵巢癌细胞的增殖，促进细胞凋亡，并可以在转录水平抑制NF-κB，c-myc和cyclin D1的表达。Huang等[6]报道，在胃癌组织和胃癌细胞中TCEAL7低表达，且TCEAL7的表达量与病灶的大小、临床分期、有无淋巴结转移有关，提示TCEAL7可能有评估胃癌患者预后的价值。

TCEAL7通过Wnt/β-catenin信号通路发挥其对肿瘤细胞的调节作用。TCEAL7在多种肿瘤中发挥抑癌基因的作用。Wnt和β-catenin是Wnt/βcatenin信号通路中的关键分子，在Wnt作用下βcatenin的磷酸化受到抑制，细胞质中β-catenin水平高，β-catenin进入细胞核内，调节靶基因的表达；当Wnt信号被异常激活时，引起细胞增殖、分化的异常[7,9,14-15]。结直肠癌肿瘤细胞核β-catenin的表达情况与肝转移有关[8,16]。结直肠癌浸润前沿细胞βcatenin表达水平明显升高，同时，细胞核和细胞质中β-catenin的表达水平亦随之升高[17]。这与本研究结果一致。本研究同时显示，结直肠癌组织中TCEAL7的表达情况与Wnt、β-catenin的表达情况呈负相关（P＜0.01）。综上所述，TCEAL7、Wnt、β-catenin 表达可能与结直肠癌患者临床分期、淋巴结转移情况、远处转移情况有关，TCEAL7与Wnt、β-catenin呈负相关。TCEAL7表达的高低可以提示结直肠癌患者的预后，具有作为肿瘤标志物的价值。