酒久保甘饮植物饮料的解酒护肝作用研究

云南省药物研究所/云南白药集团创新研发中心/云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南 昆明 650111

我国是饮酒和酿酒的大国，已有几千年历史，形成了独具特色的酒文化。适量饮酒可活血通络、强心提神、消除疲劳和促进睡眠等。然而，长期过量的饮酒可造成全身多器官的损伤，尤其是对胃肠道和肝脏损伤更为明显，导致精神障碍、胃溃疡、脂肪肝、酒精性肝炎以及肝硬化等疾病，严重者可因酒精过度抑制中枢系统而死亡。酒精依赖已然成为了当今社会的焦点问题之一[1]。因此，尝试和开发具有解酒功能的药品或保健品，用来改善过量饮酒所带来的众多不适具有重要意义。酒久保甘饮植物饮料的前期研究提示，该饮料可能具有解酒护肝作用。本文在前期工作的基础上，对酒久保甘饮植物饮料的解酒护肝作用进行系统地研究，并初步探索其解酒护肝的作用机制，为该款功能饮料的后续开发研究提供一定的实验依据。

1 实验材料

1.1 材料 酒久保甘饮植物饮料(棕色液体，批号：20130801，云南白药天颐茶品有限公司)；海王牌金樽片(批号：20121112，杭州海王生物工程有限公司)；护肝片(批号：20130601，上海皇象铁力蓝天制药有限公司)；56度红星二锅头酒(批号：20130118、20130312，北京红星股份有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(批号：20131021)、丙二醛(MDA)试剂盒(批号：20131021)、考马斯亮兰试剂盒(批号：20131017)、谷胱甘肽(GSH)试剂盒(批号：20130914)、乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒(批号：20131024)、谷丙转氨酶(ALT)试剂盒(批号：20130911)、谷草转氨酶(AST)试剂盒(批号：20130911)均由南京建成生物工程研究所生产；甘油三酯(TG)试剂盒(批号：2013080010，浙江东瓯诊断产品有限公司)。

1.2 仪器 AG285 METTLER TOLEDO电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；1500全波长酶标仪(芬兰Labsystems公司)。ZIL-2程控自主活动箱(医科院药研所研制)。

1.3 实验动物 SPF级KM小鼠，体质量18～22 g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0002。

2 方法

2.1 小鼠防醉实验[2-3]KM种小鼠，雌雄各半，按体重随机分为5组，分别为模型对照组、海王金樽片组(3.0 g/kg)、酒久保甘饮植物饮料低剂量组(0.5倍原液)、酒久保甘饮植物饮料中剂量组(原液)和酒久保甘饮植物饮料高剂量组(2倍原液)，每组12只。各给药组按照相应剂量灌胃给药，每天1次，连续8 d，模型对照组灌胃等量的饮用水。末次给药前要禁食不禁水12 h，末次给药后30 min，各组小鼠均灌胃给予二锅头(16 mL/kg，由预试验得出)，以小鼠翻正反射消失作为醉酒指标，记录给酒时间，翻正反射消失时间及恢复时间，计算醉酒潜伏期(翻正反射消失时间-给酒时间)和醉酒时间(翻正反射恢复时间-翻正反射消失时间)。

2.2 对乙醇致小鼠平衡失调的影响 KM种小鼠，雄性，按体重随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、供试品组剂量及分组同上所述，每组12只。各给药组按照相应剂量灌胃给药，每天1次，连续5 d，正常对照组和模型对照组灌胃等量的饮用水。末次给药后30 min，除空白对照组外，其余各组小鼠均灌胃给予二锅头(14 mL/kg，由预试验得出)。然后将小鼠放在转棒式疲劳仪的转棒上，以一定速度迫使小鼠在棒上运动，记录每只小鼠5 min内的坠落次数和 1 h内在转棒上停留的时间。

2.3 对乙醇致小鼠自主活动减少的影响[4]KM种小鼠，雄性，实验分组同“对乙醇致小鼠平衡失调的影响”。各给药组按照相应剂量灌胃给药，每天1次，连续10 d，正常对照组和模型对照组灌胃等量的饮用水。末次给药后30 min，除空白对照组外，其余各组小鼠均灌胃给予二锅头(20 mL/kg，由预试验得出)，30 min后分别测定小鼠5 min内自主活动次数。

2.4 酒久保甘饮植物饮料的保肝作用研究[5-7]KM种小鼠，雄性，按体重随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、护肝片组(2.88 g/kg)、供试品组剂量及分组同上所述，每组15只。各给药组按剂量每天上午灌胃1次，下午给予二锅头，连续46 d，正常对照组仅每天上午灌胃等量饮用水，模型对照组每天上午灌胃等量饮用水，下午给予二锅头。末次给药后1 h，各组小鼠摘眼球采血并分离血清，测定血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活力。采血后脱颈椎处死小鼠，取出肝脏，按1∶10的重量体积比加入生理盐水制备10%肝匀浆，离心取上清液，使用肝匀浆上清液按试剂盒说明书检测乙醇脱氢酶(ADH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)和甘油三酯(TG)含量。

3 结果

3.1 小鼠防醉实验 由表1可知，与正常对照组比较，酒久保甘饮植物饮料高剂量组可以显著缩短小鼠睡眠时间(P<0.05)。

表1 酒久保甘饮植物饮料对乙醇致小鼠醉酒的预防作用 ±s，n=12)

注：与正常对照组相比，*P<0.05。

3.2 对乙醇致小鼠平衡失调的影响 由表2可知，与空白对照组比较，模型对照组小鼠5 min内坠落次数显著增多(P<0.01)，1 h内平衡时间显著减少(P<0.01)；与模型对照组比较，酒久保甘饮植物饮料高剂量组小鼠5 min内坠落次数显著减少(P<0.05)，1 h内平衡时间明显延长(P<0.05)。

表2 酒久保甘饮植物饮料对乙醇致小鼠平衡失调试验的影响 ±s，n=12)

注：与空白对照组比较，P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05。

3.3 对乙醇致小鼠自主活动减少的影响 由表3可知，与空白对照组比较，模型对照组小鼠5 min内活动次数显著减少(P<0.05)；与模型对照组比较，酒久保甘饮植物饮料高剂量组小鼠5 min内活动次数显著增加(P<0.05)。

表3 酒久保甘饮植物饮料对乙醇致小鼠自主活动减少的影响 ±s，n=12)

注：与空白对照组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05。

3.4 酒久保甘饮植物饮料的保肝作用研究

3.4.1 对小鼠血清ALT和AST的影响 由表4可知，与空白对照组比较，模型对照组小鼠血清中的AST活性显著升高(P<0.05)；与模型对照组比较，酒久保甘饮植物饮料中剂量组和高剂量组小鼠血清中AST活性显著降低(P<0.05或P<0.01)。

表4 酒久保甘饮植物饮料对酒精肝损伤小鼠血清ALT和AST活性的影响 ±s，n=15)

注：与空白对照组比较，#P<0.05；与模型组对照比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.4.2 对小鼠肝匀浆ADH和TG的影响 由表5可知，与模型对照组比较，酒久保甘饮植物饮料各剂量组小鼠肝匀浆中的TG含量显著降低(P<0.05或P<0.01)，酒久保甘饮植物饮料高剂量组可以显著提高乙醇脱氢酶的活性(P<0.01)。

表5 酒久保甘饮植物饮料对酒精肝损伤小鼠肝匀浆ADH和TG的影响 ±s，n=15)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.4.3 对小鼠肝匀浆SOD、MDA和GSH含量的影响 由表6可知，与模型对照组比较，酒久保甘饮植物饮料各剂量组小鼠肝匀浆中MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01)，酒久保甘饮植物饮料低剂量和高剂量组小鼠肝匀浆中GSH显著升高(P<0.05或P<0.01)。

表6 酒久保甘饮植物饮料对小鼠肝匀浆SOD、MDA和GSH的影响 ±s，n=15)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4 讨论

酒精中毒俗称醉酒，是指人饮用大量酒精后发生的机体功能异常情况，并能在短时间内给患者带来较大伤害，甚至可以间接或直接导致死亡。醉酒是酒精在体内的吸收程度大于氧化代谢程度，过多的乙醇经血液循环进入大脑并作用于中枢神经系统，同时，酒精代谢生成的大量乙醛在体内蓄积，从而产生明显的醉酒反应。长期酗酒可以引发酒精性肝病[8]，初期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。严重酗酒时可引发广泛肝细胞坏死甚至诱发肝功能衰竭。

基于酒精在体内吸收和代谢的特点，解酒[9]一方面应降低酒精在消化道内的吸收速度，增加在肝内的代谢，增强肝脏内ADH的活性，进而加快乙醇在肝脏内的代谢，快速缓解醉酒状态；其次增强肝脏内的乙醛脱氢酶(ALDH)的活性，减少乙醛在肝脏内的蓄积，减轻乙醛对肝脏的细胞毒作用。另一方面应提高肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活性，消除肝组织和血浆中的自由基和脂质过氧化物，对肝脏起到保护作用，减轻酒精代谢产物对机体的损害。解酒制品的药理作用核心就是降低血液中酒精的浓度及其代谢产物乙醛的浓度，减轻其对机体组织的损伤[10]。

在本研究中，通过小鼠防醉实验，乙醇致小鼠平衡失调实验和自主活动减少实验，对酒久保甘饮植物饮料的解酒作用进行了考察。研究结果发现，酒久保甘饮植物饮料可以显著缩短小鼠醉酒后的睡眠时间，改善醉酒后的共济失调和自主活动减少等症状。提示酒久保甘饮植物饮料可能具有良好的解酒作用。随后，建立了小鼠酒精性肝损伤模型，检测了小鼠血清中的ALT和AST活性及小鼠肝匀浆中ADH、TG、SOD、MDA和GSH含量[11-12]。其中ALT和AST是临床上用来判断肝脏是否受损的检测指标，而TG是判断酒精性脂肪肝的敏感指标。研究结果发现，酒久保甘饮植物饮料小鼠血清中的AST和肝匀浆中的TG水平均显著降低，提示该饮料可能具有较好的保护肝脏作用。最后，我们在小鼠酒精性肝损伤模型的基础上，对酒久保甘饮植物饮料的解酒护肝机制进行了探索性研究。研究结果发现，酒久保甘饮植物饮料小鼠肝匀浆中的MDA含量显著降低，ADH的活性和GSH含量显著升高，提示该饮料可能通过提高ADH活性和抗氧化作用从而达到解酒护肝作用。