枳椇子水提取液对急性酒精中毒家兔离体小肠运动的影响及其解酒机制探讨

右江民族医学院，广西 百色 533000

枳椇子为鼠李科(Rhamnaceae)枳椇子属枳椇(HoveniaacerbaLindl.)的干燥成熟种子，又名鸡距子，含有黄酮、皂苷和糖苷、生物碱、脂肪酸、粗脂肪、粗蛋白、微量元素等化学成分，具有醒酒安神、止渴除烦、止呕、利大小便、抗衰老、抗疲劳、抑制癌细胞生长等作用，能清除酒后体内产生的过量自由基，阻碍过氧化脂质的形成[1-2]。元代《本草衍义补遗》中记“一男子年三十余，因饮酒发热，乃服补气血之药，加葛根以解酒毒。微汗出，人反懈怠，热如故。必须鸡距子解其毒，遂煎药中加而服之，乃愈”。《本草纲目》、《食疗本草》、《本草拾遗》等医学著作中都有对枳椇子的解酒作用有相关记载[3-4]。一次性过量饮酒时，由于酒精的亲脂性，可迅速给神经系统造成损害，严重者会造成机体功能异常甚至永久性伤害[5]。而酒精经口摄入后首先通过胃肠道进行吸收。目前枳椇子水提取液对酒精中毒的离体小肠运动的实验未见报道，故本实验采用在体灌胃法和离体小肠灌流法复制两种家兔急性酒精中毒模型，观察枳椇子水提液对急性酒精中毒家兔离体小肠平滑肌收缩活动的影响以及在小肠的解酒机制，以期枳椇子的解酒作用在临床上以及生活保健中可以更广泛的应用。

1 实验材料

1.1 实验动物 健康清洁级家兔30只(广西田东隆祥兔业有限公司生产，许可证号：SCXK桂2014-0003)，雌雄各半，体重1.5～2 kg。

1.2 器材 BL-420F生物机能实验系统、HW-400E恒温平滑肌槽、张力换能器等均为成都泰盟科技有限公司产品。

1.3 试剂 无水乙醇(天批号：20170918，津市大茂化学试剂厂)。台氏液(Nacl 8 g、Kcl 0.2 g、NaHCO□1 g、MgCl□0.1 g、NaH2PO□0.05 g、CaCl□0.2 g，加蒸馏水至1000 mL)

1.4 药品 解酒灵口服液(批号：20170101，江西光达可信医药生物公司)、枳椇子(广西省百色市市售，经广西右江民族医学院民族医学教研室覃道光教授鉴定为枳椇子)提取液：取枳椇子干品100 g加蒸馏水500 mL浸泡8 h，小火煎煮2次，第1次煮开后再煎煮1.5 h，第2次加300 mL蒸馏水，煮开后再煎煮1 h，两次煎液合并，滤过，浓缩至2000 g/L，置于5℃冰箱冷藏密闭备用。

2 方法

2.1 家兔小肠在体灌胃酒精中毒离体实验 取20只家兔，随机挑10只家兔按8 mL/kg，40%酒精灌胃至兔耳一只或两只下垂，咀嚼动作迟缓或消失，心跳及呼吸频率分别较酒精中毒前增加10%至20%，鼾声大作[7]。剩余10家兔作为正常对照组按等量蒸馏水灌胃。家兔实验前禁食 24 h，自由饮水，实验时猛击其头枕部致昏，迅速剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，以此处为起点，取十二指肠20 cm，冲净肠内容物，先将该肠管相连的肠系膜分离，再将拟取的肠管两端剪断，将游离的肠管取出体外，置于盛有保持 38℃的台氏溶液的烧怀中，用注射器抽取常温台氏溶液洗净肠内容物。将其剪成2 cm的肠段作为实验标本，每只家兔制备10断离体小肠平滑肌标本，放于恒温的台氏溶液中备用。将在体酒精灌胃的10只家兔小肠标本随机等分为枳椇子水提取液低、中、高浓度组，解酒灵低、中、高剂量组，模型组，蒸馏水灌胃的家兔小肠标本即为正常对照组。小肠平滑肌标本一端系于通气管钩上，另一端垂直连接张力换能器，然后通过升降换能器的高度，以牵张结线，使标本垂直悬挂于38℃的 50 mL恒温浴管的台氏溶液中，给予2.5 g负荷平衡组织 30 min，并向其中缓慢通氧 (95%O2和 5%CO2)，速度控制在30个 /分气泡。每组分别用微量移液器滴加枳椇子水提取液、解酒灵和蒸馏水。枳椇子水提取液和解酒灵的低中高剂量组的终浓度分别为16 g/L、32 g/L、48 g/L，模型组和蒸馏水组滴加等量的蒸馏水，记录给药前后2 min小肠运动曲线，实验结束后用生物机能实验系统测量小肠收缩的频率、张力及面积[8]。每给一次药液实验记录结束后，用台氏液冲洗3次，待小肠管恢复后再进行下一项实验，每个剂量分别进行10次实验。

2.2 家兔小肠离体灌流酒精中毒离体实验[9]取10只家兔制备离体小肠平滑肌标本，肠段制备方法及操作记录方法同2.1项，将小肠平滑肌标本随机等分为枳椇子水提取液低、中、高浓度组，解酒灵低、中、高剂量组、模型组和正常对照组。除正常对照组外，滴加相应药液前先向小肠平滑肌标本中滴加1 ml/L的40%酒精，待小肠收缩稳定后，再滴加相应药液，药液滴加、记录方法及换洗操作方法同上2.1项。

3 结果

3.1 对在体急性灌胃酒精中毒家兔离体小肠的影响 由表1可知，与实验前相比，枳椇子水提取液及解酒灵组中、高剂量组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)；其余各组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较，模型组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)；与模型组相比，中、高剂量组的枳椇子水提取液及高剂量组解酒灵对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.01，P<0.05)；其余各组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均无显著性差异(P>0.05)。

表1 枳椇子水提取液对在体急性灌胃酒精中毒家兔离体小肠的影响

注：与实验前比较，aP<0.05；与正常组比较，bP<0.05；与模型组比较，cP<0.05，dP<0.01。

3.2 对急性离体酒精中毒家兔离体小肠的影响 由表2可知，实验前相比，枳椇子水提取液、解酒灵各剂量组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)；其余组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较，模型组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)；与模型组相比，枳椇子水提取液、解酒灵各剂量组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.01、P<0.05)；其余组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力差异均无统计学意义(P>0.05)。

表2 枳椇子水提取液对急性离体酒精中毒家兔离体小肠的影响

注：与实验前相比，aP<0.05；与正常组比较，bP<0.05；与模型组比较，cP<0.05，dP<0.01。

4 讨论

文献报道，我国急性酒精中毒患者占同期急诊患者的0.5%，占急性中毒患者的49%[10-11]。在美国，急性酒精中毒是位居前五的公共卫生事件，且近几年趋于年轻化[12-13]。目前，人们一直都在寻找高效、快速解除酒精中毒的方法。由于人体经口摄入乙醇后大约25%通过胃粘膜吸收，75%通过小肠吸收[13-14]。因此，从消化系统着手酒精中毒的研究是个值得探讨的课题。

在体急性灌胃酒精中毒家兔离体小肠实验结果显示，与实验前比较，枳椇子水提取液及解酒灵组中、高剂量组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)。与正常对照组比较，模型组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)；与模型组相比，中、高剂量组的枳椇子水提取液及高剂量组解酒灵对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.01，P<0.05)。制作离体小肠标本前小肠收缩活动主要依靠壁内神经丛、迷走神经、交感神经调节和胃泌素、胆囊收缩素等激素的调节作用[15]，并且胃黏膜上含有乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶等主要氧化分解乙醇的酶类，通过首过代谢作用可将乙醇在入血液和肝脏前优先将其代谢分解，其代谢产物乙醛与胃黏膜上的蛋白结合形成蛋白化合物，从而引发刺激性反应，对脑组织神经递质含量进行调节[16]。制作离体小肠标本后小肠只能通过壁内神经丛的局部反射来调节小肠平滑肌的运动。由此推测，低剂量枳椇子水提取液不能抑制急性灌胃酒精中毒小肠离体后乙醇的再吸收作用，可能与神经系统、消化系统的一系列调节相关。

离体急性灌胃酒精中毒家兔离体小肠实验结果显示，与实验前相比，枳椇子水提取液、解酒灵各剂量组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)。与正常对照组比较，模型组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作用(P<0.05)；与模型组相比，枳椇子水提取液、解酒灵各剂量组对离体小肠收缩面积、收缩频率、收缩张力均有抑制作(P<0.01、P<0.05)，此结果与在体急性灌胃酒精中毒家兔离体小肠实验结果一致。随着药物浓度的增加，其对两种急性酒精中毒模型的离体小肠抑制作用增强，呈剂量依赖关系。小肠平滑肌离体后不再受中枢神经系统的调节，但壁内神经丛和受体依然可调节其运动，对小肠的抑制作用是否与Ca2+及受体作用有关，有待进一步探究。

黄酮类是枳椇子主要的药用价值成分之一，且其中的二氢杨梅素含量较为丰富，具有显著的生物活性，有良好的防醉解酒效果[17-19]。解酒灵主要是一定程度上减少消化道对乙醇的吸收,加速其分解代谢,从而防止或减轻乙醇对人体神经系统、消化系统等损害[20]。综上所述，枳椇子水提取液对两种模型的急性酒精中毒家兔离体小肠运动均有抑制作用，其在小肠处的解酒机制可能是通过抑制小肠对乙醇的吸收，减缓乙醇氧化为乙醛的速度，使产生乙醛的量减少，是否与黄酮类化合物的二氢杨梅素有关，有待进一步研究。此实验为枳椇子中黄酮类成分开发提供实验依据。