高效液相色谱法测定盐酸可乐定片的有关物质

尚如霞 何寅

（镇江市食品药品监督检验中心 江苏 镇江 212000）

盐酸可乐定片在临床上主要用于治疗高血压（但不作为第一线用药）和高血压急症，在临床上还可以治疗偏头痛、绝经期潮热、痛经，以及戒绝阿片瘾毒症状。心血管疾病作为危害人类健康的主要杀手之一，严重地损害人类的健康。该药作为心血管类用药，已收录于江苏省基本药物目录中，临床应用范围较广。因此，其质量情况应受到重点关注。

盐酸可乐定片已收载在《中国药典》（2015年版）二部[1]中，美国药典亦有收载。但国内标准和国外标准均未收载其有关物质检查项。有关物质是药品中除主成分以外的杂质，它可能是原料药合成过程中带入的原料、中间体、试剂、分解物、副产物、聚合体、异构体，以及不同晶体、旋光异构的物质，也可能是制剂生产过程或在贮藏、运输、使用过程中产生的降解产物等。为了客观地评价盐酸可乐定片有关物质，控制其杂质含量，因此建立了盐酸可乐定片的有关物质测定方法，并考察了环境对药品的影响[2]。

1.实验材料

仪器：SPD-20A岛津液相色谱仪、电热恒温培养箱、AG245天平

色谱柱：C8柱，依利特 150mm×4.6mm

液相色谱条件：以0.22%辛烷磺酸钠－甲醇－磷酸（500：500：1）为流动相（调节PH值3.0）；柱温30℃；检测波长为220nm。

盐酸可乐定片：江苏A药业有限公司24批、常州B药业有限公司6批，共计两个厂家30批样品。

2.实验方法

2.1 流动相选择

首先，进行流动相的选择。由于《中国药典》和《美国药典》收载的含量测定方法，其流动相均相同，因此考虑就选择与含量测定项下相同的色谱条件，以0.22%辛烷磺酸钠－甲醇－磷酸（500：500：1）为流动相（调节pH值3.0），检测波长为220nm。同时，在相同的色谱条件下，对空白溶剂和空白片分别进样，在同一波长处均无吸收干扰（附图1、2）。

2.2 专属性实验

取本品细粉适量（约含盐酸可乐定150g），分别经热破坏、酸破坏、碱破坏、UV365nm(6h)破坏处理，中和后，分别用流动相溶解稀释成每1ml中约含3g的供试液，取50l进行HPLC分离分析。结果表明：在上述选定的色谱系统之下，盐酸可乐定与分、降解产物的分离良好，分、降解产物不干扰盐酸可乐定及其有关物质的测定。酸破坏后产生了较多的杂质，UV365nm(6h)破坏处理后，供试品中有关物质多为光降解产物。

（1）光照破坏：取上述供试液在紫外光灯（UV365nm）下照射6小时后，进样。

（2）酸破坏实验：取上述供试液1ml，加1ml稀盐酸，至10ml容量瓶，放置8小时后，加1mol/L氢氧化钠试液中和，加流动相至刻度，进样。

（3）碱破坏实验：取上述供试液1ml，加1ml1mol/L氢氧化钠试液，至10ml容量瓶，放置8小时后，加稀盐酸中和，加流动相至刻度，进样。

2.3 温湿度存储条件模拟实验

选用同一厂家、同一批号的样品，一份在35℃电热恒温培养箱放置48小时，另一份在80℃水浴放置8h，同法测定，在4.1分钟处出现新杂质峰。表明温湿度存储条件对药品杂质有一定影响。（见附图3、4）

2.4 方法耐用性

选取不同的色谱柱Kromasil柱及伊利特C8柱，其他条件不变，取专属性试验项下破坏溶液进样测定。盐酸可乐定与分降解产物的分离良好。方法耐用性好。

2.5 线性范围

称取盐酸可乐定对照品10.50mg，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含盐酸可乐定浓度分别为0.1、1、10、50和100g的供试品溶液，分别精密量取50l，注入液相色谱仪，记录色谱图，以盐酸可乐定的峰面积(A)对其浓度(C)进行线性回归，回归方程为y=158128x+76850, R2=0.9998 结果表明：在0.1～100g/ml范围内，盐酸可乐定色谱峰面积与其浓度成良好线性关系。（见图5）

附图1 江苏A药业公司样品有关物质色谱图

附图2 常州B药业公司样品有关物质色谱图

图5 有关物质标准曲线图

2.6 定量限

将上述0.1g/ml的对照品溶液再稀释后进样，根据峰高以信噪比S/N=10确定盐酸可乐定片的定量限为30ng。(见附图6)

2.7 检测限

同定量限测定方法，根据峰高以信噪比S/N=3确定盐酸可乐定片的检测限为10 ng。（见附图7）

3.实验结果与讨论

3.1 实验结果

附图3 35℃～48h热破坏色谱图

附图4 80℃～8h热破坏色谱图

取本品适量，精密称定，加流动相稀释制成每1ml中约含30g的盐酸可乐定溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。按照上述色谱条件和配制方法进行有关物质检查，供试液浓度为30g,对照溶液的浓度为0.3g。取对照溶液50l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的10%，再精密量取对照溶液和供试品溶液各50l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。测定两个厂家共30批不同批号样品，有关物质检查结果如下：（见表1）从表1中可以得知，30批样品中总杂质为0.6%～3.1%，其中单个最大杂质为保留时间2.54处的杂质峰（限度为0.5%～2.9%）。30批盐酸可乐定片均检出有关物质，其检出率为100%，由此可见建立有关物质的检查方法重要且很有必要。

表1 盐酸可乐定片有关统计表

3.2 结果与讨论

（1）本次测定的盐酸可乐定片两个厂家共30批，均检出了有关物质，其中28批有关物质的含量大于1%，有的批次甚至达到2%～3%,有关物质的含量比较高的，因此建立有关物质的检查方法还是很有必要性的。通过控制有关物质的含量，可以控制盐酸可乐定片的杂质总量。

附图6 定量限（S/N=10）

附图7 检测限（S/N=3）

（2）通过上述数据，分析不同厂家的生产工艺可能对杂质有一定影响，江苏A药业公司生产过程中加入的辅料比较的少，因此杂质含量比较低；而常州B制药厂生产中加入的辅料比较多，所以平均杂质含量要高。从杂质的出峰时间上，有关物质主要是保留时间2.54分钟左右的杂质峰，有10批次在其它时间内也有杂质峰，可通过进一步分析，确认其杂质成分。