九蒸九晒黄精5-HMF含量的变化

韩笑，匡宇，赵永艳，党凯茹，彭腾，邹和平

黄精为百合科植物滇黄精、黄精或多花黄精的干燥根茎。具有补气、养 阴、健 脾、润 肺、益肾的功效[1～2]。生黄精有麻舌感，且刺激咽喉。在唐代《食疗本草》 就有记载“蒸之，若生则刺人咽喉，曝使干，不尔朽坏”[3]，生黄精炮制后，可以去除麻舌感，并增强了其补脾润肺益肾的功能。黄精的炮制方法以蒸煮法为主[4]，历史沿袭至清代黄精以“九蒸九曝”炮制为主流，《本草从新》中记载“黄精去须，九蒸九晒用，每蒸一次，必半日方透”[5]。

5-羟甲基糠醛（5-HMF）在含糖的中药炮制过程中都有可能生成，与炮制时间和温度密切相关，可用于指示炮制程度，现已成为中药炮制原理研究的活性成分。目前关于黄精九蒸九晒炮制过程中5-HMF含量变化尚未见报道。

1 材料

1.1 仪器

岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪（日本岛津公司）；BUG25-13型超声波清洗器（美国BRANSON公司）；BP211D 型电子天平、BP121S 型电子天平（德国 Sartorius 公司）；FW135型中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；优普系列超纯水器UPTII-10T（成都超纯科技有限公司）；依利特ODS-B色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2 试药与试剂

乙腈为色谱纯（美国Fisher公司）；甲醇、磷酸为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）；水为超纯水。对照品5-HMF（批号 H-005-150307）成都瑞芬思生物科技有限公司，HPLC测定质量分数均＞98%。黄精为多花黄精。

2 方法与结果

2.1 黄精的炮制

将新鲜的黄精去除杂质及须根，洗净晾干，切厚片，采用实验室前期实验研究所得的炮制方法，依法炮制得一蒸一晒、二蒸二晒、三蒸三晒……九蒸九晒黄精。

2.2 5-HMF的含量测定

2.2.1 对照品溶液的配制 取5-HMF对照品适量，精密称定，用甲醇溶解制备成的对照品20.96μg/ml溶液。避光低温保存。

2.2.2 供试品溶液的制备 取黄精不同炮制品约0.2 g，精密称定，置150 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，超声提取20 min，滤过。滤渣加甲醇10 mL，超声提取10 min，滤过，滤液定容至25 mL量瓶中，即得。

2.2.3 色谱条件 依利特ODS-B色谱柱(250 mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-1%磷酸水(5∶95)；检测波长∶284 nm;柱温：30℃；流速：1.0 ml/min;进样量为10μl。HPLC图见图1。

2.2.4 线性关系考察 将对照品溶液采用自动进样法分别进样2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12 μl ，测得色谱峰面积，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程为:Y=187675X-9603.1（R2=0.9999）,结果表明，5-HMF在0.04-0.25 μg范围内与峰面积线性关系良好。

图1 5-HMF对照品(A)、黄精样品(B)HPLC图

2.2.5 精密度、重复性、稳定性和加样回收率实验 精密吸取对照品溶液20 μL，按照“2.2.1”项条件连续进样6次，测得5-羟甲基糠醛峰面积的RSD分别为1.12%，表明仪器精密度良好；精密称取六份三蒸三晒黄精，按照“2.2.3”项中制备供试品的方法平行操作，按照“2.2.1”项条件进样10 μL，测得5-羟甲基糠醛含量的RSD分别为2.12%，表明该方法重复性良好；精密吸取三蒸三晒黄精供试品溶液，分别于0 h，2 h，4 h，8 h，2 h，按照“2.2.1”项条件进样分析，测得5-羟甲基糠醛峰面积RSD分别为1.11%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好；加样回收率实验的平均加样回收率分别为92.62%，RSD%分别为1.90%，表明方法准确度好。

2.2.6 九蒸九晒黄精中5-HMF含量的测定结果

表1 九蒸九晒黄精中5-HMF含量的测定结果

3讨论

3.1 5-HMF的提取方法

经查阅文献，5-HMF的提取方法主要有水浴回流提取和超声提取两种方法。考虑到回流提取的加热过程中，可能会使黄精中的多糖自身可发生水解、脱水反应生成5-HMF，导致5-HMF含量偏高，实验数据不准确。本实验对黄精中的5-HMF的提取，采用超声提取的方法，超声提取是在常温下进行，避免了黄精中的多糖发生水解、脱水反应。

3.2 实验结果分析

未经炮制的黄精，以及一蒸一晒的黄精中未检测到5-HMF的含量。随着对黄精蒸晒次数的增加，5-HMF含量会逐渐升高。目前，5-羟甲基糠醛对人类健康是否具有潜在危害存在争议，一些研究认为，5-HMF对眼黏膜、上呼吸道黏膜等产生刺激作用，对人体横纹肌和内脏有损伤；但近年来的5-HMF的生物活性逐渐被发掘，具有抗心肌缺血、抗氧化、降血糖、改变血液流变性和神经保护性。2005年，欧洲食品安全局评估的人群5-HMF日摄入量为1.6 mg[10]。笔者认为事物的发展都具有两面性，做好质量的控制，是保证安全有效的关键之处。