MIG-7及MMP-2在结肠癌中的表达及意义

李明玉，贾喜花，周炳娟，张丙信

（1.承德医学院，河北承德 067000；2.保定市第一中心医院）

近年来，随着人们生活水平的提高，结肠癌的发病率逐渐上升，目前结肠癌已成为我国重点防治的肿瘤之一。有研究显示，影响结肠癌患者治疗效果和导致不良预后的关键因素之一就是癌转移[1]。因此，深入研究结肠癌浸润转移的分子机制对改善患者的总生存期具有重要意义。迁移诱导蛋白7（MIG-7）是血管生成拟态（VM）形成过程中重要的调控因子，它可使肿瘤细胞发生可塑性变化，并使肿瘤细胞具有内皮细胞的功能，而具有内皮细胞功能的肿瘤细胞可参与构成VM管腔的内衬结构[2]。基质金属蛋白酶2（MMP-2）作为基质金属蛋白酶家族（MMPs）的成员之一，是VM形成通路（EphA2/PI3K/AKT/MMPs）中重要的末端信号因子[3]。VM的形成除了可满足肿瘤自身的血供促进肿瘤细胞生长外，还使肿瘤细胞直接与血液接触，从而增加肿瘤细胞发生血道转移的机会[4]。本研究拟通过观察与VM形成有关的MIG-7和MMP-2在结肠癌中的表达情况，探讨二者在结肠癌生长与转移中的作用及意义。

1 资料与方法

1.1 标本来源收集保定市第一中心医院2015年1月-2017年12月存档经手术切除，且经病理检查明确诊断的结肠癌组织蜡块70例，均明确诊断为腺癌，术前均未行放疗、化疗及生物靶向治疗等，所有患者均有完整的临床资料。70例结肠癌患者中，男性37例、女性33例，高分化35例、中低分化35例，＜50岁17例、≥50岁53例，肿瘤直径＜5cm 26例、≥5cm 44例，有淋巴结转移者22例、无淋巴结转移者48例。以同期切除的70例癌旁组织（距肿瘤边缘＞5cm，病理证实为正常组织）作为对照组。

1.2 试剂MIG-7兔抗人多克隆抗体，购自上海安研生物科技有限公司；MMP-2兔抗人多克隆抗体、鼠/兔通用型二抗、DAB试剂盒，均购自北京博奥森生物科技有限公司。

1.3 实验方法及结果判定MIG-7及MMP-2的表达采用免疫组织化学染色法进行检测，按照EnVision二步法的操作步骤进行实验。结果判定：MIG-7及MMP-2（1：100）阳性染色呈棕黄色颗粒，均定位于细胞膜及细胞质。结果判定[5]：选择5个高倍视野（400×）进行观察，计数阳性细胞数及着色深度。阳性细胞数：无阳性细胞或阳性细胞数＜10%为0分，阳性细胞数10%～40%为1分，阳性细胞数41%～70%为2分，阳性细胞数＞70%为3分。着色深度：细胞不着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两项评分相乘，0～1分为阴性、2～3分为弱阳性、4～6分为中等阳性、6分以上为强阳性，其中2分及以上均计为阳性。免疫组化结果由两位经验丰富的病理科医师采用独立双盲法判定。

1.4 统计分析应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计数资料采用卡方检验，结肠癌组织MIG-7与MMP-2表达的相关性应用Spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MIG-7与MMP-2在结肠癌和癌旁组织中的表达70例结肠癌组织中MIG-7、MMP-2的阳性表达率分别为61.4%（43/70）、70.0%(49/70)，均明显高于癌旁组织，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1：

表1 MIG-7与MMP-2在结肠癌与癌旁组织中的表达情况

2.2 MIG-7、MMP-2表达与结肠癌临床病理特征的关系结肠癌组织MIG-7、MMP-2的表达与性别、年龄和肿瘤直径无关（P＞0.05）；与分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05)：有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者，中低分化明显高于高分化。见表2：

表2 MIG-7、MMP-2表达与结肠癌临床病理特征的关系

2.3 结肠癌组织MIG-7与MMP-2表达的相关性结肠癌组织中，MIG-7与MMP-2的表达呈正相关关系（r=0.506，P＜0.05)。见表3：

表3 结肠癌组织MIG-7与MMP-2表达的相关性

3 讨论

VM是近年来发现的一种全新的肿瘤微循环模式。不同于经典的内皮细胞依赖的肿瘤微血管结构，VM是高侵袭性肿瘤细胞为了满足自身的血供，通过自身变形和细胞外基质重塑而形成的一种类似血管样的通道[6]。VM周围的肿瘤细胞在缺少内皮细胞作为屏障时， 会有更多与宿主血液循环直接接触的机会，从而增加了转移发生的可能性[4]。有研究显示，肿瘤组织中VM的形成可同时增加血道和淋巴转移的几率[7]。MIG-7是VM形成过程中的一个重要调控因子，它通过增加肿瘤细胞的可塑性变化，促进VM的形成，从而加快肿瘤的转移[8]；此外，Phillips等[9]的研究也显示，MIG-7在多种恶性肿瘤组织中表达，而在正常对照组织中则未发现表达。本研究发现，结肠癌组织MIG-7的阳性表达率明显高于癌旁组织，而在癌旁组织中则未检测到MIG-7的表达，与Phillips等[9]的研究结果一致，提示MIG-7可能参与了结肠癌的发生发展过程。另外，本研究还发现MIG-7与结肠癌分化程度及淋巴结转移有关，提示MIG-7阳性表达与结肠癌的恶性程度和疾病进展密切相关。

MMP-2即明胶酶A，是降解Ⅳ型胶原的一种蛋白水解酶。溶解、穿越基底膜是肿瘤细胞侵袭和转移过程中的重要环节，而基底膜的主要成分是Ⅳ型胶原蛋白[10]。因此提示，MMP-2可能在肿瘤细胞的转移过程中扮演重要角色。另外，MMP-2还可参与VM的细胞外基质重塑。MMP-2可裂解层粘连蛋白5（LN-5v2），LN-5v2的裂解片段沉积于细胞外基质并参与基质重塑，从而促进了VM的形成[11]。近年来研究发现，MMP-2在喉癌[10]、胃癌[12]、前列腺[13]等多种恶性肿瘤中均存在过表达现象，并且过表达的MMP-2与肿瘤的浸润转移相关。本研究结果亦显示，结肠癌组织MMP-2的阳性率明显高于癌旁组织，且MMP-2表达与结肠癌的分化程度和淋巴结转移有关，说明MMP-2表达与结肠癌的发生发展、恶性程度和转移关系密切。

同时，本研究通过Spearman相关分析发现，结肠癌组织中MIG-7的表达与MMP-2呈正相关关系，提示二者可能在结肠癌的发生发展和转移过程中具有协同作用。

综上所述，MIG-7和MMP-2可分别通过调控肿瘤细胞的自身变形和参与细胞外基质重塑促进VM的形成，从而间接参与了结肠癌的生长及转移过程，检测结肠癌组织中MIG-7和MMP-2的表达情况可能对判定结肠癌的生长和转移具有一定的提示意义。