不同栽培种配方对羊肚菌菌丝、菌核和分生孢子的影响*

刘福阳，王爱仙，王怡暄，邓文明，颜振兰，巫仁高**

（1．南平市农业科学研究所，福建 建阳 354200；2．南平市农业局食用菌站，福建 延平 353000）

羊肚菌（Morchella spp．）隶属于子囊菌门（Ascomycota） 盘菌纲 （Discomycetes） 盘菌目 （Pezizales） 羊肚菌科（Morchellaceae） 羊肚菌属 （Morchella），又名羊肚菜、羊肚蘑、编笠菌、阳雀菌等，因其菌盖部分长得很像羊肚而得名[1]。羊肚菌是一类大型珍稀野生食药兼用真菌，既是宴席上的珍品，又有很高的营养价值和药用价值，在欧美一些发达国家，其被认为是仅次于块菌的高级补品，最早收录于李时珍的《本草纲目》，民间有“年年吃羊肚、八十照样满山走”的说法[2]。国内外研究羊肚菌迄今已有100多年的历史，但羊肚菌的具体出菇机制尚不明了，与气候、菌核、分生孢子、外源营养袋等存在何种直接关系研究的也不够透彻，使得羊肚菌在全国各地的大田栽培生产中，经常出现产量不稳定，出菇不均匀，子实体易变畸形等关键性问题[3－5]。本文研究不同栽培种基质配方对羊肚菌菌丝、菌核、分生孢子和保存时间的影响，为羊肚菌人工栽培提供科学基础[6]。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1．1．1 菌种

菌种：野生羊肚菌（Morchella spp．）经组织分离并保存。

1．1．2 培养基

母种培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂条 20 g、KH2PO40．5 g、MgSO40．5 g、蛋白胨 2 g，自来水1 000 mL，121℃灭菌30 min；原种培养基：木屑65%、小麦20%、土壤10%、KH2PO41%、Mg SO41%、生石灰1．5%、石膏1．5%，121℃灭菌120 min，其中小麦需提前用石灰水浸泡或水煮至无白芯再拌料灭菌。

1.2 试验方法

1．2．1 试验设计

设计8种羊肚菌栽培种培养基配方，配方1：木屑57%、小麦30%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方2：木屑57%、小麦30%、草木灰10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方3：木屑55%、小麦30%、土壤10%、KH2PO41%、MgSO41%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方4：木屑37%、小麦30%、谷壳20%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方5：木屑37%、玉米粒30%、玉米芯20%、土壤 10%、生石灰1．5%、石膏 1．5%；配方 6：木屑27%、小麦60%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方7：木屑47%、棉籽壳20%、麦麸20%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方8：木屑47%、谷壳20%、麦麸20%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%。每个配方3个重复，每个重复10瓶[7－8]。

1．2．2 栽培种的制备

8种配方中的小麦和玉米需提前用石灰水浸泡或水煮至无白芯，再按不同配方比例拌料混合均匀。为方便测量菌丝生长速度和观察菌核，采用原种玻璃瓶进行装料，装料时边装料边抖动，装至瓶肩高（约13 cm）后在料面上轻轻压平，以倒放时料不会倒出为准。121℃灭菌120 min，待其冷切后无菌条件下接种，然后再摆放在21℃、黑暗条件下培养。

1．2．3 长时间保存

待等菌丝走满瓶后放在常温（8℃～22℃）、弱光条件下保存5个月。

1．2．4 播种

保存5个月后的栽培种，用耙种钩将羊肚菌菌种从玻璃瓶中掏出捣碎，加水拌菌种直至菌种湿润，但不滴水。在34 cm×47 cm×10 cm规格的周转框上铺上厚8 cm～10 cm的经石灰消过毒、含水量在15%～25%的土壤，然后按每框半瓶的用种量直接播种到土壤面上，随即将表层3 cm处的土壤和菌种拌均，覆盖黑地膜保湿[9－11]。

1．2．5 记录与观察

当栽培种的菌丝生长至原种玻璃瓶肩下3 cm时，给各配方统一划起始线，5 d后再划终止线，测算出菌丝生长速度并观察菌丝生长长势；在栽培种培养过程中观察记录各配方的菌核开始出现时间、菌核分布区域、菌核颜色变化和菌核数量；播种后每隔6 h观察记录各配方的菌种萌发时间、菌丝长势以及分生孢子出现时间和数量。

1．2．6 数据分析

利用DPS分析软件的多重比较LSD法分析菌丝生长速度数据。

2 结果与分析

2.1 不同栽培种培养基对羊肚菌菌丝生长情况影响

不同栽培种培养基对羊肚菌菌丝生长情况的影响结果见表1。

表1 羊肚菌在不同栽培种培养基中生长情况Tab．1 Growth situation of Morchella spp．in different culture media

接种1 d后，在不同栽培种培养基上用肉眼均能看到羊肚菌菌丝的萌发定植，并快速生长，但各个配方的生长速度不一致。从表1可以看出，配方6和配方5菌丝生长速度最快，分别为1．40 cm·d－1和1.39 cm·d-1，并与其他6个配方相比达到极显著性差异。在菌丝性状方面，不同配方的菌丝颜色差异不大，在生长前期均为白色，菌丝后期转为黄色；配方4菌丝生长稠密，配方5菌丝生长稀疏，其他配方间菌丝生长差异不大，均为较密。

2.2 不同栽培种培养基对羊肚菌菌核培养特征影响

羊肚菌菌核是由初生菌丝或次生菌丝形成致密交织扭结的菌丝团。由于没有明显的结构层次差异，不是起源于造孢组织，因此羊肚菌菌核属于假菌核，但菌核发育过程与其他真菌菌核相似[2]。不同栽培种培养基质对羊肚菌菌核的培养特征的影响，结果见表2。

表2 不同栽培种培养基质上羊肚菌菌核的培养特征Tab.2 Culture characters of sclerotia of Morchella spp.in different culture media

由表2可以看出，从菌核开始形成的快慢来看，配方4和配方6最快，菌丝还未走到瓶底，菌核就开始形成，从接种到菌核开始形成只需9 d；其次是配方3，为10 d；最慢的是配方8，为16 d。从菌核的主要分布区域来看，都是从接种口瓶壁上端开始往下形成，配方5分布比较均匀，在瓶壁的不同位置都有出现，可能是原料中有玉米芯，比较蓬松且有空隙；大部分配方中瓶底都有发现菌核，而且密集、均匀，但是配方8和配方6未在瓶底发现菌核。从菌核的数量来看，配方6形成的菌核最多，具体排序为：配方6＞配方3、配方4＞配方1、配方2、配方5＞配方7、配方8。菌核的颜色在不同培养基配方上没有明显差别，在菌核形成的前期为白色小点，以后逐渐聚集变硬，并转为淡黄色，最后变深呈黄褐色。

2.3 不同栽培种培养基在长时间保存后菌丝萌发情况

菌丝走满瓶后保存5个月，然后播种到34 cm×47 cm×10 cm规格的周转框土壤上，不同栽培种培养基在长时间保存后菌丝萌发情况见表3。

从表3中可以看出，配方3和配方6菌丝萌发最快，播种后18 h就肉眼可看到菌丝萌发，而配方5菌丝萌发最慢，30 h后才能看到菌丝萌发；配方2、配方3和配方7菌丝浓密，配方6菌丝较浓密，其他配方菌丝稀疏；菌丝颜色在不同培养基上无明显差异，前期都为白色，后期逐渐转为黄色。

表3 不同栽培种培养基长时间保存后菌丝萌发情况Tab.3 Germination condition of hypha after long-term preservation in different culture media

2.4 不同栽培种培养基对羊肚菌分生孢子的影响

播种12 d以后，菌丝长透土层，土壤表面开始产生分生孢子，俗称“菌霜”。15 d后土壤表面都被厚厚的“菌霜”覆盖（图1），不同栽培基质的栽培种的分生孢子产生能力都很强，无明显差异，说明羊肚菌产生分生孢子能力跟栽培种基质无关，可能跟羊肚菌品种、气候有比较大的关系。

图1 羊肚菌分生孢子Fig.1 Conidia of Morchella spp.

3 结论与讨论

虽然羊肚菌的出菇机制尚不明了，但与其菌核、分生孢子间存在千丝万缕的关系。综合从菌丝生长、菌核培养特征、长时间保存后菌丝萌发情况和产生分生孢子能力来看，配方6是优良的栽培种配方，其菌丝生长速度最快达1.40 cm·d-1，菌丝较浓密；能较早形成菌核，且菌核数量最多；长时间保存后再播种，在18 h后能快速萌发，菌丝较浓密；分生孢子产生能力强[10]。

从配方2和配方1的对比情况来看，用草木灰代替土壤，菌丝生长会变慢，菌核数量差异不大，但长时间保存后菌种萌发的菌丝更浓密。对比配方3和配方2，添加无机离子，菌丝生长加快，菌核的开始形成时间提早，菌核数量增多，长时间保存后菌种能更早萌发。从配方4和配方1的对比情况来看，用谷壳代替部分木屑，菌丝生长加快，菌丝浓密，菌核开始形成时间提早，菌核数量增多。从配方5和配方4的对比情况来看，用玉米粒和玉米芯代替小麦和谷壳，菌丝生长更快，但菌丝稀疏；菌核的开始形成时间推迟，菌核数量减少，但菌核在瓶壁的分布较均匀，但长时间保存后菌种萌发推迟。从配方6和配方1的对比情况来看，提高小麦的用量，菌丝生长更快，菌核的开始形成时间提早，菌核数量增多，长时间保存后菌种萌发提前且菌丝浓密。对比配方7与配方1，用棉籽壳和麸皮代替小麦，菌丝生长变慢，菌核开始形成时间推迟，菌核数量减少，但长时间保存后菌种萌发的菌丝更浓密。对比配方8与配方4，用麸皮代替小麦，菌丝生长变慢，菌丝更稀疏；菌核开始形成时间推迟，菌核数量减少。因此添加无机离子、提高小麦用量、使用谷壳填充增加孔隙度有利于菌核的形成，而添加棉籽壳和麸皮却不利于菌核形成。