鱼腥草芩蓝口服液抗炎镇痛作用研究

喻 琴，王东升，张世栋，董书伟，吕凤霞，刘 升，那立冬，闫宝琪，严作廷*

(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省中兽药工程技术研究中心，甘肃兰州 730050；2.河南牧翔动物药业有限公司,河南新郑 451100)

畜禽外感发热是兽医临床常见病症之一，多见于急、慢性疾病过程，主要在机体本身正气不足的前提下，受六淫之邪或温热疫毒之气侵扰，导致营卫失和，脏腑阴阳失调，出现病理性体温升高，伴有恶寒、流涕、咽喉部充血红肿、粪干等主要临床症状的一类外感病证[1-2]。兽医临床上治疗外感发热常用化学药品有安乃近、氨基比林、乙酰水杨酸等，中药制剂有荆防败毒散、银翘散等，但随着这些药物的长期使用，化学药品的耐药性越来越严重，广泛应用临床的中药制剂也较少，中草药具有毒副作用低，不易产生耐药性，无或低残留，低成本等特点，在畜禽疾病防治中越来越受到养殖户的青睐[3-4]。鱼腥草芩蓝口服液由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花炮制后制成，具有清热解毒等作用，主要用于外感风热引起的咽喉肿痛，急性咽炎、扁桃体炎及风热等症候。目前，已开展了鱼腥草芩蓝口服液的毒理学研究，而对其药理学研究尚未进行。为此，本试验采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加、醋酸致小鼠扭体反应建立炎症、疼痛模型，进行了鱼腥草芩蓝口服液的抗炎、镇痛作用研究，以期为临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠150只，雌雄各半，体重18 g～22 g，购自兰州大学医学院实验动物中心，合格证号SCXK(甘)2009-0004。小鼠饲养在22℃±2℃，相对湿度为50%±5%的实验室内，每次试验前先适应性饲养5 d。

1.1.2 仪器与设备 JM5102电子天平,余姚纪铭称重校验设备有限公司产品；CP223C电子天平,上海奥豪斯仪器有限公司产品；6 mm打孔器；UV-BlueStar Plus紫外-可见光分光光度计，北京莱伯泰科仪器有限公司产品。

1.1.3 药物与试剂 鱼腥草芩蓝口服液，河南牧翔动物药业有限公司的中试产品，规格为每100 mL相当于原生药量为170 g；双黄连口服液，河南牧翔动物药业有限公司产品，规格无100 mL/瓶；二甲苯天津市化学试剂二厂产品；伊文思蓝，Fluka进口分装，上海化学试剂采购供应站产品；冰醋酸，天津市巴斯夫化工有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验 参照文献[5-7]，选取健康昆明小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即阴性对照组(生理盐水20 mL/kg)、阳性对照组(双黄连口服液20 mL/kg体重)、鱼腥草芩蓝口服液高、中、低剂量组(34、17、8.5 g/kg体重)，灌胃给药，灌胃容积为20 mL/kg，每天1次，连续5 d，末次给药30 min后，在小鼠右耳的前后两面均匀涂抹30 μL的二甲苯致炎，左耳作对照。30 min后颈椎脱臼处死，立即沿耳廓基线剪下双耳，用直径6 mm的打孔器分别在两耳片同一部位打孔，精密称重，并计算耳肿胀度和肿胀度抑制率。

1.2.2 醋酸致小鼠毛细血管通透性增加试验 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加试验的分组及给药方案同1.2.1。参照文献[8-9]，末次给药1 h后，尾静脉注射5 mg/mL伊文思蓝生理盐水溶液(10 mL/kg)，随即腹腔注射新鲜配置的7 mg/mL的醋酸溶液(10 mL/kg)，20 min后，颈椎脱臼处死，剖开腹腔，用生理盐水溶液冲洗腹腔，冲洗3次，每次3 mL，收集腹腔洗液,并3 000 r/min离心10 min，吸取上清液，用紫外可见分光光度计在620 nm波长处测定吸光度(OD)，并计算各组抑制率。

1.2.3 醋酸扭体试验 醋酸扭体试验的分组及给药方案同1.2.1。参照文献[10-11]，末次给药1 h后，腹腔注射新鲜配制的7 mg/mL醋酸溶液(10 mL/kg)，注射5 min后，观察并记录20 min内各组小鼠的扭体次数，并计算疼痛抑制率。

2 结果

2.1 鱼腥草芩蓝口服液对小鼠耳廓肿胀的影响

鱼腥草芩蓝口服液对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀的影响见表1。从表1可知，与阴性对照组相比，鱼腥草芩蓝口服液高、中、低剂量组和药物对照组均可极显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀(P<0.01)。与药物对照组相比，鱼腥草芩蓝口服液中、低剂量组抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀无显著差异(P>0.05)，高剂量组可显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀(P<0.05)，且高剂量组的效果优于中、低剂量组(P<0.05)，这表明不同剂量的鱼腥草芩蓝口服液均能极显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，以高剂量效果最好。

2.2 鱼腥草芩蓝口服液对小鼠毛细血管通透性增加的影响

鱼腥草芩蓝口服液对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响见表2。由表2可知，与阴性对照组相比，鱼腥草芩蓝口服液高、中剂量组可显著抑制醋酸引起的毛细血管通透性增加(P<0.05)，且高剂量组效果优于中剂量组，抑制率分别为38.10%和29.10%；鱼腥草芩蓝口服液低剂量组对醋酸引起的毛细血管通透性的增加也有抑制作用，抑制率为20.11%，但差异不显著(P>0.05)；药物对照组能极显著抑制醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加(P<0.01)，抑制率为46.03%。与药物对照组相比，鱼腥草芩蓝口服液高、中、低剂量组抑制醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加差异不显著(P>0.05)。这表明高、中、低剂量的鱼腥草芩蓝口服液能不同程度的抑制醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加。

表1 鱼腥草芩蓝口服液对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀的影响

注：同列肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

Note: Different small letters in the same column mean significant difference (P<0.05),and different capital letters indicate extremely significant difference (P<0.01).

表2 鱼腥草芩蓝口服液对醋酸致毛细血管透性增加的影响

注：同列肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

Note: Different small letters in the same column mean significant difference (P<0.05),and different capital letters indicate extremely significant difference (P<0.01).

2.3 鱼腥草芩蓝口服液对小鼠的镇痛作用

鱼腥草芩蓝口服液对醋酸致小鼠扭体影响见表3。由表3可知，与阴性对照组相比，鱼腥草芩蓝口服液高剂量组和双黄连口服液能极显著抑制醋酸引起的小鼠疼痛反应(P<0.01)；鱼腥草芩蓝口服液中剂量组能显著抑制醋酸引起的小鼠疼痛反应(P<0.05)；而鱼腥草芩蓝口服液低剂量组虽能减少小鼠的扭体次数，但与阴性对照组无显著差异(P>0.05)。随着剂量的增加，鱼腥草芩蓝口服液对醋酸引起的小鼠疼痛反应的抑制作用依次增强，然而与阳性对照组相比，鱼腥草芩蓝口服液高、中剂量组对醋酸引起的小鼠疼痛反应抑制作用不明显(P>0.05)，低剂量组的效果较差(P<0.05)。这表明鱼腥草芩蓝口服液高、中、低剂量组能剂量依赖性的减少扭体次数，抑制醋酸引起的小鼠疼痛反应，以高剂量效果最好。

表3 鱼腥草芩蓝口服液对醋酸致小鼠扭体影响

注：同列肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

Note: Different small letters in the same column mean significant difference (P<0.05),and different capital letters indicate extremely significant difference (P<0.01).

3 讨论

炎症是动物机体局部损伤所产生的具有防御意义的应答性反应。二甲苯引起的血管舒张、皮肤水肿[5]以及醋酸致毛细血管扩张、通透性增加是急性炎症的标示性变化[12-13]，为经典的急性炎症模型。为此，本试验选用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和醋酸致毛细血管通透性增加模型，研究鱼腥草芩蓝口服液对急性炎症的抗炎作用。结果表明，在急性炎症动物动物模型中，鱼腥草芩蓝口服液可显著抑制小鼠耳廓肿胀及毛细血管通透性增加且呈剂量依赖效应。

前期相关研究证实，鱼腥草水提物能抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌[14]；黄芩素和黄芩苷可通过干扰花生四烯酸代谢发挥抗炎作用，且黄芩素能抑制炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌[15-16]；板蓝根500、700 mL/L乙醇提取物在细胞中能够抑制脂多糖(LPS)所诱导产生的TNF-α[17]；连翘的乙酸乙酯、正丁醇、乙醇提取物能抑制TNF-α、IL-1β、 IL-6的分泌[18]；金银花中的酚酸类物质在细胞中能抑制LPS诱导产生的NO、TNF-α和 IL-6[19]。鱼腥草芩蓝口服液由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花炮制后制成，而组成制剂的每一味中药是其发挥作用的重要组成部分，推测鱼腥草芩蓝口服液可能是通过抑制致炎因子的释放，减少炎性物质的渗出，从而发挥其抗炎作用。

镇痛研究常采用动物模型对试验动物施加伤害性刺激引起疼痛反应，通过监测动物对疼痛反应的程度来评价药效。醋酸扭体试验常用来研究外周镇痛药物的镇痛效果[20]，试验结果表明，鱼腥草芩蓝口服液高、中剂量均能显著减少小鼠的扭体次数，抑制醋酸引起的小鼠疼痛反应。醋酸腹腔注射能够间接诱导五羟色胺、组胺、前列腺素和缓释肽的释放，刺激伤害感受器[21]，从而产生疼痛反应，这种急性发作的疼痛被认为是非选择性镇痛模型。醋酸诱导机体产生的这些内源性物质与疼痛的产生存在紧密联系，通过对这些物质的抑制可产生镇痛效果。研究表明，黄芩素和黄芩苷能抑制前列腺素的分泌[15]；板蓝根700 mL/L乙醇提取物能够抑制LPS所诱导细胞产生的前列腺素[17]。因此，鱼腥草芩蓝口服液的镇痛作用可能是通过抑制前列腺素产生，使致痛因子的释放减少，从而阻断了伤害性刺激。

综上所述，鱼腥草芩蓝口服液具有良好的抗炎、镇痛作用，且与剂量成正相关，这为鱼腥草芩蓝口服液的临床应用提供了药效依据，而该制剂的抗炎、镇痛作用的分子机制有待进一步研究。