超高效液相色谱串联质谱测定水果蔬菜中多抗霉素B的残留

2018-08-20祝伟霞李继利赵国兴

现代食品 2018年12期

◎ 张丽，祝伟霞，李继利，赵国兴

（1.河南检验检疫鉴定咨询中心，河南郑州 450003；2.洛阳理工学院材料科学与工程学院，河南洛阳 471023）

多抗霉素B又称多氧霉素，是光谱抗生素类生物源农药，它是可可链霉素阿苏变种产生的代谢物，具有较好的内吸传导作用。该药主要对小麦白粉病、烟草赤星病、黄瓜霜霉病、瓜类枯萎病、人参黑斑病、甜菜褐斑病、水稻纹枯病、苹果早期落叶病、林木枯梢病和梨黑斑病等多种真菌性病害具有良好的防治效果。

随着多抗霉素在水果蔬菜病虫害防治上的广泛应用，由其引起的环境和食品安全问题日益突显，因此研究多抗霉素在水果蔬菜中的残留检测方法具有十分重要的意义。目前我国暂未制定多抗霉素在水果蔬菜中残留限量；日本制定了大米（糙米）中多氧霉素的最高残留限量（MRL）为0.06 mg/kg。目前，国内外对多抗霉素的研究多集中在病虫害防治方面，已有文献报道的关于多抗霉素的分析有生物效价[1-2]、毛细管电泳法[3]，这些方法均操作繁琐，耗时长，准确度低，精密度差，不适合用于食品检测及市场监督检测。陶宁等[4]建立了稻田土壤及水中多抗霉素残留量的高效液相色谱分析，检出限为0.05 mg/L。吕静建立了其在烟草中的分析方法[5]，但目前并未见其在水果蔬菜等农产品中的残留检测报道。本文建立了水果蔬菜中多抗霉素B的高效液相色谱串联质谱法。与生物测定法、高效液相色谱法等相比，超高效液相色谱串联质谱法具有灵敏度高、干扰小、分析速度快等显著优点，可为多抗霉素B在水果蔬菜中的残留分析研究提供技术支持。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

LC-MS/MS 8050高效液相色谱串联质谱仪(电喷雾离子源）；Millipore型纯水系统。

多抗霉素储备液的制备：称取10.0 mg多抗霉素B（CAS：19396-06-6）于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，于-18 ℃下保存待用。甲醇、乙腈为色谱纯。其他试剂为分析纯。

1.2 工作条件

1.2.1 色谱条件

TYPE1:4色谱柱，（5μm，2.0×150 mm）；柱温40 ℃；流动相B为乙腈，A为20 mmol/L乙酸铵溶液；流量0.3 mL/min；进样量10 μL。梯度洗脱程序：0～1 min时，B为90%；1～2 min时，B由90%降至40%；2～4 min时，B保持40%，4～5 min时，B由40%升至90%，保持2 min。

1.2.2 质谱条件

电喷雾离子源正离子（ESI＋）扫描模式；喷雾电压4.0 kV；加热模块温度400 ℃；离子源温度300 ℃；DL温度250 ℃；喷雾流量2.5 L/min；加热气流量10 L/min；干燥器流量10 L/min；每个离子对驻留时间200 ms。定量离子366.0，定性离子490.2，碰撞能量分别为29、30。

1.3 实验方法

称取5.0 g样品置于50 mL具塞离心管中，加入15 mL甲醇-水（3∶7）涡旋混匀10 min，超声提取5 min，以4000 r/min离心5 min，取上清液过WCX柱，取上清过0.22 μm滤膜供LC-MS/MS测定。

2 结果与讨论

2.1 色谱行为

多抗霉素TIC图如图1所示。

图1 多抗霉素TlC图

2.2 提取剂的选择

多抗霉素易溶于水，微溶于甲醇、丙酮等有机溶剂，在酸性和中性溶液中稳定，在碱性溶液中不稳定，常温下贮存稳定，实验分别考察了甲醇、乙腈、甲醇-水、0.1%甲酸水对多抗霉素的提取效率，0.1%甲酸水会提取出来较多的糖类和色素，干扰较大；甲醇、乙腈提取时回收率没有甲醇-水高，因此试验选用甲醇水作为提取剂。

2.3 色谱柱的选择

由于多抗霉素极性很强，在普通的C18柱上没有保留，很快就出峰，故选择资生堂的Hilic柱和CAPCELL PAK CR 1:4柱进行考察，使用Hilic柱发现，其灵敏度和峰性均不如CAPCELL PAK CR 1:4柱，故选择CAPCELL PAK CR 1:4柱。

2.4 流动相的选择

根据多抗霉素在酸性和中性条件下稳定的性质，由于选择的CAPCELL PAK CR 1:4柱的特殊性，需避免使用甲醇作为流动相，故考察了乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-20 mmoL乙酸铵体系下目标物的峰形和分离度。直接采用乙腈-水作为流动相，样品不稳定，容易发生分解；对比之下，乙腈-20 mmoL乙酸铵峰形最好，灵敏度最高，故选择乙腈-20 mmoL乙酸铵为流动相。

2.5 线性关系及检出限

准确吸取多抗霉素B标准溶液适量，用空白基质溶液稀释为 0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2 mg/L和0.5 mg/L系列标准溶液。在上述分析条件下进样测定，以定量离子峰面积对多抗霉素B质量浓度进行线性回归。在0.01～0.5 mg/L浓度范围内，回归方程为y=121.114x-531.79，相关系数为0.995。按10倍信噪比得出多抗霉素B在果蔬样品中定量限为0.01 mg/kg，按3倍信噪比得出检出限为0.005 mg/kg。