血清ICAM-1、IL-6检测联合免疫荧光染色检查对PPROM合并羊膜腔感染的预测意义

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(1.西安交通大学第一附属医院，陕西 西安 710061；2.陕西省榆林市第一医院，陕西 榆林 719000)

未足月胎膜早破(preterm premature rupture of membrane，PPROM)是指孕妇在孕28～36+6周胎膜在产前出现自发性破裂[1]。早产是PPROM最为常见的并发症[2-3]。在早期阶段，患者临床症状较轻，可能会出现肺炎、败血症，严重时新生儿将会出现神经发育迟缓、脑性瘫痪等症状。有研究表明，15%～25%的PPROM患者将会出现羊膜腔感染，孕周越小时，患者出现羊膜腔感染的可能性更高[4-5]。因此，有必要寻找一些可有效预测PPROM合并羊膜腔感染患者病情的指标，有助于改善孕妇的妊娠结局。细胞间黏附分子-1(inter-cellular adhesion molecule-1，ICAM-1)可介导细胞与外基质互相黏附的糖蛋白，与免疫调节、炎症反应紧密相关[6]。白介素-6(interleukin-6，IL-6)是一种炎症因子，可有效监测孕妇的感染情况[7]。为此，本次研究探讨血清ICAM-1、IL-6检测联合阴道分泌物免疫荧光染色对PPROM合并羊膜腔感染的预测意义，为临床治疗提供理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选择陕西省榆林市第一医院2016年2月到2017年2月期间收治的60例PPROM患者，作为为观察组，年龄22～34岁，平均年龄为(26.1±2.8)岁，孕周为28～36+6周，均为单胎孕妇。选择同期入院的正常孕妇60例，为对照组，年龄为23～35岁，平均年龄为(25.4±2.9)岁，孕周为29～36+6周，均为单胎孕妇。两组患者的年龄、孕周等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本次研究均获得患者及家属知情同意后进行。

1.2纳入标准与排除标准

1.2.1纳入标准

PPROM标准：①患者自觉有阴道流液；②窥器查看阴道后穹窿处存在液池或羊水从宫颈口流出；③流出液偏碱性；④阴道液干燥片经检查后出现羊齿状结晶。以上症状具备第1项或者②～④项中的任一项确诊。

羊膜腔感染标准：①产前或者产时的体温连续两次均超过37.5℃，并排除其他感染；②脉搏连续两次超过100次/分，排除心脏病等其他病史；③胎心率基线较快，超过每分160次；④阴道分泌物出现脓性并存在异味；⑤子宫出现压痛；⑥白细胞计数超过1.5×109/L，中性不低于0.9；⑦血沉超过65mm/h。以上1～3项和4～7项中各有一项出现阳性确诊。患者均符合PPROM合并羊膜腔感染诊断标准。

1.2.2排除标准

排除标准如下：①患者具有妊娠并发症、原发性高血压、冠心病及糖尿病等病史；②近两周内患者具有发热病史，体温>37.5℃；③孕期尿液检查后出现细菌性尿路感染，即清洁中段尿培养杆菌定量不低于105/mL或者球菌不低于104/mL，尿路出现刺激征、发热、菌血症等，患者出现脓尿。

1.3方法

观察组患者在入院后破膜6h以内、分娩时各抽取5mL的静脉血。对照组患者在入院后、分娩时各抽取5mL静脉血。两组待检血液经3 000r/min离心，时间为15min，取其血清进行检测。观察组患者在分娩后对胎盘胎膜进行病理检查，确定孕妇是否出现羊膜腔感染，之后取距离破口5cm处2cm×2cm全层胎膜组织，同时取胎盘周边、中央胎盘各3cm×3cm组织，再通过10%福尔马林进行固定、病检。应用ELISA法对血液标本中ICAM-1(EK0370，武汉博士德生物工程有限公司)、IL-6(ARB14012，北京百奥莱博科技有限公司)进行检测。以无菌棉拭子采集阴道4cm处内侧壁或者穹隆处分泌物，慢慢转动数秒，将其放入采样管后进行检验。

1.4观察指标

①IL-6>7.9ng/L时，判断为阳性；②ICAM-1≥112.6ng/mL判断为阳性，<112.6ng/mL为阴性；③阴道分泌物采用免疫荧光染色检测，加德纳菌、沙眼衣原体、白色念菌珠、淋病奈瑟球菌及滴虫的检测方法及阳性标准参考试剂盒(深圳市迈科龙生物技术有限公司)说明。联合检测时，三项中有一项的诊断结果为阳性即判断为阳性。

1.5统计学方法

2结果

2.1血清ICAM-1、IL-6水平及阴道分泌物免疫荧光染色阳性率结果对比

与对照组相比，观察组患者的ICAM-1、IL-6水平明显更高，差异显著(t值分别为10.346、10.595，均P<0.05)，观察组阴道分泌物免疫荧光染色阳性率较对照组高，差异显著(χ2=43.621，P<0.05)，见表1。

组别例数(n)ICAM-1(ng/mL)IL-6(ng/L)免疫荧光染色阳性率对照组60673.32±267.436.48±2.184(6.7)观察组601 223.34±313.1214.23±5.2341(68.3)t/χ210.34610.59543.621P0.0000.0000.000

2.2两组患者的阴道分泌物免疫荧光染色结果

观察组患者的免疫荧光染色阴道感染情况较对照组更加严重，差异有统计学意义(u=7.864，P<0.05)，见表2。

2.3观察组羊膜腔感染与非感染者ICAM-1、IL-6水平和阴道分泌物免疫荧光染色阳性率比较

在观察组中，羊膜腔感染者的ICAM-1、IL-6水平显著高于非感染者(t值分别为8.888、7.759，均P<0.05)，羊膜腔感染者的阴道分泌物免疫荧光染色阳性率明显高于非感染者，差异显著(χ2=21.430，P<0.05)，见表3。

表2 两组患者的免疫荧光染色结果[n(%)]

Table 3 Comparison of ICAM-1 and IL-6 levels and positive rates of immunofluorescence staining between amniotic cavity infection and non-infected

2.4血清ICAM-1、IL-6检测联合阴道分泌物免疫荧光染色预测PPROM合并羊膜腔感染的各项指标

血清ICAM-1、IL-6检测及阴道分泌物免疫荧光染色单独预测PPROM合并羊膜腔感染的特异性、阳性、阳性预测率及阴性预测率对比后差异无统计学意义(χ2值分别为0.480、0.760、0.571、0.492，0.892、0.882、0.902、0.802，0.782、0.802、0.693，均P>0.05)。联合检测预测PPROM合并羊膜腔感染的特异性、阳性及阴性预测值高于单一指标，差异显著(χ2值分别为6.340、8.290、4.480，均P<0.05)，而敏感性与单一指标相比差异不显著(均P>0.05)，见表4。

表4血清ICAM-1、IL-6检测联合阴道分泌物免疫荧光染色预测PPROM合并羊膜腔感染的各项指标[n(%)]

Table 4 Indexes of serum ICAM-1 and IL-6 test combined with immunofluorescence staining for predicting PPROM with amniotic cavity infection[n(%)]

3讨论

3.1 PPROM及羊膜腔感染

羊膜腔感染是PPROM的常见并发症，严重影响母婴的生命健康[8-9]。因此，有必要及时诊断PPROM合并羊膜腔感染患者，改善孕妇的妊娠结局。目前，关于羊膜腔感染的诊断标准主要有母体心率≥100次/min，胎儿心率≥160次/min，母体发热≥38℃、羊水恶臭等[10-11]，但是多数患者的临床特征并不明显，难以早期及时诊断。羊水穿刺抽取羊水进行细菌培养可准确诊断，但是羊水穿刺是一种侵入性操作，且结果等待时间过长，一般不易于被患者接受。胎盘胎膜病理检查需要在孕妇分娩后方可进行，难以有效预测。因此，需要寻找一种快速、准确、非侵入性的指标来预测PPROM合并羊膜腔感染。

3.2血清ICAM-1、IL-6及阴道分泌物免疫荧光染色与感染预测

IL-6是一种常见的免疫调节因子。在孕妇正常妊娠时，羊水中的IL-6水平较低。当孕妇出现子宫内感染时，IL-6水平会明显升高[12]。ICAM-1含有505个氨基酸，广泛分布在造血、非造血细胞中。ICAM-1可通过结合配体，促进T细胞活化，并将白细胞从血管内向炎症部位进行浸润，在炎症及免疫反应中具有重要的作用。目前，胎膜早破会造成产妇阴道内环境发生变化，使得大量致病菌逆行而上，造成PPROM合并羊膜腔感染的发生[13]，因此对产妇阴道的病原体检测有利于感染的监测。

3.3血清ICAM-1、IL-6联合阴道分泌物免疫荧光染色与PPROM合并羊膜腔感染预测

在本次研究中，对照组ICAM-1、IL-6水平及免疫荧光染色阳性率均显著低于观察组，羊膜腔感染者ICAM-1、IL-6水平和免疫荧光染色阳性率均显著高于非羊膜腔感染患者，差异有统计学意义(P<0.05)。当出现羊膜腔感染时，IL-6将大量进入孕妇的羊水及母体血液中，造成羊水、血液中的IL-6水平升高。同时受炎性因子刺激之后，孕妇羊水中的ICAM-1明显升高，且炎症会提高组织、血管及胎盘绒毛血管屏障的通透性，造成ICAM-1进入母体血流中。研究发现，血清ICAM-1浓度高低只与孕妇是否感染相关，而孕龄、分娩发动均不会对血清ICAM-1浓度产生影响[14]，表明血清ICAM-1浓度是诊断PPROM合并羊膜腔感染的较好指标。

在本次研究中，三项指标单独检测预测PPROM合并羊膜腔感染的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值差异无统计学意义(均P>0.05)。联合检测预测PPROM合并羊膜腔感染的特异性、阳性预测值和阴性预测值高于单一指标，差异显著(均P<0.05)，而敏感性与单一指标相比差异不显著(P>0.05)。当机体感染病原菌后，炎症反应会促进羊膜上的溶酶体释放磷脂酶A2，诱导宫缩，增加早产的风险。同时，当病原体入侵造成羊膜腔感染时，将会激活单核巨噬细胞，释放生物活性物质，如IL-6、IL-8、干扰素等[15]，大量表达ICAM-1，使得羊水中的ICAM-1浓度升高，同时炎症因子会提高组织、胎盘绒毛血管的通透性，导致ICAM-1进入母体血液。由此可知，本文检测结果提示三者联合检测可有效诊断PPROM合并羊膜腔感染。

总之，血清ICAM-1、IL-6检测联合阴道分泌物免疫荧光染色对PPROM合并羊膜腔感染预测的敏感性、特异性均较高，且可用于诊断PPRPOM合并羊膜腔感染，指导临床治疗。