HBsAg阳性母亲新生儿乙肝疫苗应答的影响因素研究

2018-08-14王玉平

中国妇幼健康研究 2018年8期

陈霞，王玉平

(连云港市东方医院妇产科，江苏连云港 222002)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是世界公共卫生问题。目前阻断HBV母婴传播最有效的方法是新生儿接种乙肝疫苗，但国内HBsAg阳性孕产妇的12月龄小儿乙肝疫苗无应答或弱应答率仍达到27.4%[1]。王静等[2]研究认为，乙肝疫苗接种后弱/无应答的原因是多方面的，其中母体HBsAg的阳性率有重要影响。本次研究通过了解HBsAg阳性孕产妇的新生儿HBV血清学模式，探讨其与乙肝疫苗无/弱应答的关系，为临床提供理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取于2015年1月至2016年12月到连云港市东方医院就诊的HBsAg阳性孕产妇及其足月新生儿100对，入选标准：①年龄18～35周岁，民族不限；②单胎妊娠，母体HBsAg(+)，同时HBsAb、HBcAg、HBcAb、HBeAg均为(-)；③了解研究内容并自愿签署知情同意书。排除标准：①合并肝硬化、急慢性肝炎、胆道疾病的孕妇；②人类免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、梅毒等其他传染病检查阳性；③合并胎位异常、胎儿宫内窘迫等妊娠并发症。根据我国疫苗接种程序，要求新生儿接种乙肝疫苗并随访至12月龄，同时采集新生儿出生后24h内主动免疫、被动免疫前股静脉非抗凝血3mL和抗凝血3mL，采集孕产妇孕期肘静脉血3mL，所有血液样本均置于-80℃冰箱保存。本次研究经本院医学伦理学委员会批准，所有患儿家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1一般资料

采用问卷调查的方式收集孕妇和胎儿的人口学资料，包括年龄、体质量指数(BMI)、孕次、产次、孕周、新生儿性别、体重等，从入院即开始采用预先设计的信息采集表收集资料，有重要信息缺失的孕妇予以剔除。

1.2.2 HBV血清标志物检测

新生儿出生后24h采集新生儿外周血，采集孕妇的外周血，随访至12月龄采集婴儿外周血，使用化学发光免疫试验(CLIA)法检测所有采集血液的HBV血清标志物，包括HBsAg、抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe、HBeAg水平。使用德国罗氏诊断有限公司的HBV血清标志物(HBVM)试剂盒，具体操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.3 Toll样受体3蛋白表达量和免疫细胞水平检测

采用流式细胞术检测新生儿及12月龄小儿的外周血单个核细胞Toll样受体3(TLR3)蛋白表达量，使用美国Santa Cruz公司的TLR3鼠抗人抗体和羊抗鼠IgG-IFTC。使用流式细胞术检测新生儿及12月龄小儿外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、树突状细胞(DCs)、CD19+B淋巴细胞等。使用美国eBioxcience公司的单克隆抗体。所得细胞数量为相对数量，使用百分数(%)表示。

1.2.4判定标准

新生儿乙肝疫苗免疫应答判定标准：抗-HBs≥100mIU/mL为强应答，<100mIU/mL为弱应答，0mIU/mL为无应答。

1.3统计学方法

2结果

2.1一般情况

入组孕妇和新生儿年龄、孕周、身长、体重等方面资料见表1。

指标数值孕妇(n=100) 年龄(岁)28.59±4.43 BMI(kg/m2)21.84±2.51 孕次*1.50(1～3) 产次*1(1～2)新生儿(n=100) 孕龄(w)38.18±1.24 性别(男/女)64(64.00)/36(36.00) 体重(kg)5.83±1.27

注：*均值(最小值～最大值)。

2.2 HBV血清学模式

100对HBsAg阳性孕产妇及新生儿HBV血清学模式共有15种，100例孕产妇中HBV血清学模式以模式1(单纯HBsAg+)多见(47.00%)；100例新生儿的血清学模式以模式13(病毒标记物全阴)多见(50.00%)，见表2。

表2 孕妇及新生儿血清学模式[n(%)]

(转下表)

(续上表)

模式HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc孕产妇(n=100)新生儿(n=100)6+-+-+3(3.00)-7+++--1(1.00)-8+-+++1(1.00)1(1.00)9--++--26(26.00)10--+---3(3.00)11---+--2(2.00)12-+----2(2.00)13------50(50.00)

2.3新生儿乙肝疫苗免疫应答与HBV血清学模式的关系

新生儿1、2、9、13四种模式下，抗-HBs水平比较差异有统计学意义(F=8.807，P=0.003)，模式9新生儿抗-HBs水平明显高于其他三种(t值分别为5.012、7.848、8.226，均P<0.05)；四种模式下，新生儿乙肝疫苗无应答率为20.22%(18/89)，弱应答率为6.74%(6/89)，强应答率为73.03%(65/89)，各应答率比较差异有统计学意义(H=6.782，P<0.05)，其中强应答率高于无应答率和弱应答率(H值分别为4.467、8.591，均P<0.05)，而无应答率和弱应答率组间比较差异无统计学意义(H=2.854，P>0.05)。四种血清学模式外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)TLR3蛋白平均荧光强度(%)组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 新生儿乙肝疫苗免疫应答与HBV血清学模式的关系

注：*M(QR)。

2.4新生儿免疫细胞数量比较

新生儿外周血免疫细胞数量在不同血清学模式之间比较差异无统计学意义(P>0.05)；1、2、9、13模式新生儿外周血CD4+T淋巴细胞百分比高于CD8+T淋巴细胞百分比，差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表4。

模式例数(n)CD4+T淋巴细胞(%)CD8+T淋巴细胞(%)tP1441.21±10.5116.02±5.206.6920.0032938.27±15.2016.87±7.155.0470.01492644.96±9.1716.32±6.018.937<0.001135040.12±11.6319.41±6.5710.563<0.001F3.1782.093P0.2850.496

3讨论

3.1 HBV血清学模式

HBV血清学模式多式多样，能够反应机体HBV的感染状况。本次研究结果表明，HBsAg阳性孕产妇的HBV血清学模式主要为模式1，即单纯“HBsAg+”模式，占47.00%。这可能与HBsAg阳性孕产妇接受抗病毒治疗有关。传染性较强的“大三阳”、“小三阳”模式较为少见。这一结果可能与近年来疾病知识普及和宣传力度加大，HBsAg阳性孕产妇对自身疾病意识有效增强，阻断母婴传播的意识提高有关[3-4]。本次研究结果显示，HBV血清学模式为“HBeAg+、抗-HBe+”的新生儿比例较高，可能由于抗-HBe多在HBeAg转阴后检出，而且孕产妇HBeAg和抗-HBe可通过胎盘传递给新生儿，诱导新生儿HBV感染向康复的方向发展，这一研究结果与张芳等[5]的研究结果一致。

3.2乙肝疫苗免疫应答

本次研究结果表明，新生儿乙肝疫苗无应答率为20.22%，弱应答率为6.74%，明显高于我国一般人群。这一结果可能与新生儿长期处于孕产妇HBV感染的微生态环境导致自身免疫功能不同于一般人群有关，而研究结果与国内彭忠秀等[6]的研究结果较为接近。HBV的血清学模式一方面能够反应机体HBV感染状况；另一方面，能够有效反应机体对HBV产生免疫应答的能力[7-8]。本次研究结果表明，不同HBV血清学模式的新生儿乙肝疫苗无/弱应答率不同，其中血清学模式为“HBeAg+、抗-HBe+”的新生儿乙肝疫苗无/弱应答率较低，提示新生儿不同血清学模式可能影响机体免疫功能，临床上对高危新生儿应注意鉴别，以提高乙肝疫苗免疫应答能力。

3.3 TLR3

TLR3是一种能够特异性识别HBV复制中间产物的蛋白质，能够促进T淋巴细胞和细胞因子的表达，发挥免疫调节作用[9]。本次研究结果表明新生儿四种主要血清学模式下PBMC TLR3蛋白表达量比较差异无统计学意义，但均高于正常新生儿，提示新生儿体内由于受到HBV 病毒感染后可能启动相应的免疫反应。同时，各模式新生儿外周血CD4+T淋巴细胞高于CD8+T淋巴细胞，差异均有统计学意义，而CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞与机体TLR3信号通路相关。由于CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞是机体主要免疫细胞，提示新生儿不同HBV血清学模式下，清除病毒能力不同。