清肝祛湿活血方对非酒精性脂肪肝大鼠 胰岛素抵抗的影响*

王一强，张玉香，姜德民，王凤丽，史晓伟，陈有源，王俊喹

( 1. 甘肃卫生职业学院，甘肃 兰州 730000；2. 甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050; 3. 兰州市安宁区医院，甘肃兰州 730060；4.西和县中医院，甘肃 西和 742100)

非酒精性脂肪肝(non alcohol fatty liver disease，NAFLD)是一种除酒精和肝特异性病因，由其他致病因素所致的肝细胞内脂肪堆积过多的病理改变[1],是临床最常见的慢性肝病之一，也是肝脏相关恶性疾病发生的重要诱因。目前尚无确切疗效的药物用于NAFLD的治疗。随着临床实践和科学研究的深入，中医药在防治NAFLD方面突显出了优势。清肝祛湿活血方在临床应用多年，前期研究[2]表明其能够改善非酒精性脂肪肝患者临床症状，降低体重指数、腰围，改善肝功能，调节血脂代谢；动物实验[3]认为其改善血脂代谢与下调大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c表达相关。胰岛素抵抗是多种代谢性疾病共同的发病基础，而很多代谢性疾病的发生与NAFLD相关，NAFLD被认为是代谢综合征的肝脏表现[4-6]。本研究采用高脂饮食诱发大鼠建立NAFLD大鼠模型，观察该方对空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗的影响，从而探讨该中药组方改善非酒精性脂肪肝的机制，为防治NAFLD提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动 物

清洁级SD大鼠，雄性，90只，体质量130～170 g，由甘肃中医药大学动物实验中心提供，动物生产许可证号: SYXK(甘)2011-0001。为使动物适应环境，提前将其放置在18～20 ℃的实验室内，饮用水自来水，自由进食，标准饲养1周。

1.2 药品、试剂与仪器

清肝祛湿活血方药物组成：茵陈10 g，郁金10 g，青葙子10 g，丹参15 g，夏枯草10 g，密蒙花10 g，垂盆草10 g。煎剂由甘肃中医药大学药学实验室制备。罗格列酮片，商品名为太罗，太极集团重庆涪陵制药厂有限公司提供，批号31288；四环素，四川显华动物药业有限公司提供，批号20160112。Rat Insulin ELISA试剂盒，购自上海蓝基生物科技有限公司，批号E02I0004。TBA-120FR全自动生化分析仪，日本东芝(TOSHIBA)公司产品；OHAUS1/1000型电子天平，美国BECKANCOULTER公司产品；HH-S型数显水浴箱，金坛医疗仪器厂产品；5417R型低温离心机，德国艾本德公司产品；TC-120型生物组织自动脱水机，孝感泰维电子设备有限公司产品。

1.3 动物分组与模型的建立

将动物随机分为正常对照组，模型对照组，罗格列酮片组，清肝祛湿活血方高、中、低剂量组6组，每组15只。大鼠适应性饲养7 d，常规饮食，自由饮水。第8天开始造模：正常对照组给予普通饲料喂养，连续60 d。其余各组按照聂文山等[7]的造模方法，给予高脂饲料(84%基础饲料+10%猪油+5%蛋黄粉+1%胆固醇)喂养，连续60 d；并于造模第1天腹腔注射四环素150 μg/g，之后于第6，12，18，24，30天分别腹腔注射1次氧四环素100 μg/g，每次注射四环素前称量SD大鼠的体质量，依据造模大鼠的体质量的变化来改变给药量，造模时间30 d。

1.4 给药方法

造模结束，各组按相应药品、剂量灌胃给药。参考《药理实验方法学》[8]，按照人与大鼠的体质量换算法，大鼠的等效剂量为11.25g生药/kg，清肝祛湿活血方低、中、高剂量组用药剂量依次为5.63，11.25，22.50 g生药/kg。根据文献[9]报道，罗格列酮组的用药剂量为5 μg/(g·d)。按照大鼠灌药容积20 μL/g计算，清肝祛湿活血方低、中、高剂量组的药液分别以蒸馏水配制为0.28，0.56，1.13 g/mL。低、中、高剂量组分别给予清肝祛湿活血方生药5.63，11.25，22.5 g/(kg·d)灌胃；罗格列酮组给予罗格列酮片5μg/(g·d)灌胃；模型对照组和正常对照组予生理盐水10 μL/(g·d)灌胃。各组大鼠连续灌胃30 d。

1.5 检测指标

末次灌胃后将大鼠空腹8 h，鼠尾采血测定FPG；经眶后静脉丛以采血管采血300 μL，离心后冻存上清，采用ELISA法检测FINS，操作严格按照试剂盒说明进行；根据胰岛素水平和血糖值计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)[10]，HOMA-IR=胰岛素水平(μIU/L)×空腹血糖(mmol/L)/22.5 。

1.6 统计学方法

2 结 果

与正常对照组对比，模型对照组大鼠FPG、FINS及 HOMA-IR均明显升高，差别有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组对比，罗格列酮组、清肝祛湿活血方各剂量组大鼠HOMA-IR、FPG及FINS均显著较低，有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与罗格列酮组对比，清肝祛湿活血方中、高剂量组大鼠HOMA-IR、FPG及FINS明显降低，差别有统计学意义(P<0.01或P<0.05)，而清肝祛湿活血方低剂量组无统计学意义(P>0.05)。说明清肝祛湿活血方能够显著改善非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗。见表1。

分组FPG/ (mmol·L-1)FINS/(μIU·L-1)HOMA-IR正常对照组4.62±1.537.97±0.441.75±0.33模型对照组12.05±1.48***43.05±12.72***21.98±6.19***罗格列酮组8.21±1.74###28.65±10.55###13.92±3.75###清肝祛湿活血方低剂量组9.33±1.62##△29.06±11.37##△14.86±3.51##△清肝祛湿活血方中剂量组7.23±1.55###△△24.76±8.23###△△10.34±2.26###△△清肝祛湿活血方高剂量组6.45±1.02###△△△20.49±7.61###△△△6.97±1.47###△△△

注：与正常对照组对比，***P<0.01；与模型对照组对比，##P<0.05，###P<0.01；与罗格列酮组对比，△P>0.05，△△P<0.05，△△△P<0.01

3 讨 论

非酒精性脂肪肝属中医学“脂满”“肝著”“积聚”“痰证”等范畴。针对其病因病机，谭远忠等[11]认为本病多由饮食不节所致，过食辛辣刺激、肥甘厚腻之品导致邪气阻滞中焦而肝失疏泄，脾失健运，痰湿蕴结体内，瘀血阻滞，形成脂肪肝；迟蕾等[12]认为本病是本虚标实之证，多由脾肾亏虚、肝郁气滞导致痰湿瘀互结体内而使肝脉受损；赵文霞等[13]认为该病因饮食不节、体虚久病、情志失调而发，病位在肝，与脾、肾、胃关系密切，致病因素主要是气机阻滞，痰湿瘀互结；刘平等[14]认为本病的主要病因是湿浊内生，属本虚标实之证；吕娇娇等[15]认为本病因湿浊内蕴而致气虚毒蕴，属本虚标实之证。本课题组根据NAFLD的临床表现和病理特点，认为肝火旺盛、湿热瘀结为其主要病机，遂立清肝祛湿、活血化瘀之法，并依法拟清肝祛湿活血方。方中夏枯草清肝散郁；密蒙花清热泻火、养肝明目，青葙子清肝、凉血、祛风热，两药配伍可增清肝经实热之功；茵陈苦、辛，微寒，归脾、胃、肝、胆经，清热利湿、退黄，药理学研究发现[16]其有利胆、降血脂等显著功效；垂盆草清热解毒、利胆，临床上常被用于治疗湿热黄疸、小便不利、痈肿疮疡等疾病；丹参、郁金相配，可散结化瘀、行气通络。

本研究结果表明，清肝祛湿活血方能改善NAFLD大鼠胰岛素抵抗，这可能是中医药治疗NAFLD的机制之一，但具体的分子机制还有待进一步研究。