高效液相色谱法测定复方鱼腥草胶囊中黄芩苷和黄芩素

李永东

(盘锦华成制药有限公司，辽宁 盘锦 124205)

复方鱼腥草胶囊是临床常用的经典中成药，其主要成分为鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，具有良好的清热解毒效果，在呼吸道感染等疾病治疗中应用较多，临床疗效可靠[1-3]。

复方鱼腥草胶囊是本单位复方鱼腥草片改型的重要成果，其清热解毒效果良好，主要用于外感风热引起的咽喉疼痛、急性咽炎、扁桃体炎等有风热证候者[4-5]。复方鱼腥草胶囊为纯植物药所制作，其中化学成分复杂，含有多种有效成分，而目前已知黄芩中的黄芩苷和黄芩素为主要活性成分，发挥了抗菌、抗病毒、抗变态反应等重要作用[6-7]。为保证复方鱼腥草胶囊的良好效果，需有效控制其中黄芩苷和黄芩素含量。目前常用中成药黄芩苷和黄芩素含量检测方法主要为薄层扫描法和高效液相色谱法，后者检测准确性较高，成为当前主要的方法[8-10]。

根据黄芩苷及黄芩素的理化性质，选择274 nm为测定波长，并以乙腈-0.1%甲酸为流动相，梯度洗脱。该方法避免了复方鱼腥草胶囊的含量测定时分别测定黄芩苷及黄芩素，大大缩短了检测时间，提高了检测效率，可作为复方鱼腥草胶囊产品和生产工艺质量的控制手段。

1　仪器与试药

1.1　仪器

本次研究采用安捷伦科技(中国)有限公司生产的SUMMIT 高效液相色谱仪及CHROMELEONTM 色谱工作站；G1329B自动进样器；G1314B紫外检测器; FC204 电子天平;KH-400KDB高功率数控超声波清洗器;KQ- 50B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2　试药

采用中国食品药品检定研究院提供的黄芩苷(批号140213-140515，含量91.70%)和黄芩素(批号140598-14897，含量98.5%)对照品；所用试剂为色谱纯或分析纯，国药集团化学试剂有限公司提供，其中甲酸(分析纯)、甲醇(分析醇)、乙醇(分析醇)、乙腈(色谱纯)。本厂自制复方鱼腥草胶囊，成份为鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花。规格为0.35 g×20粒，批号分别为150425、150623；纯化水由本厂提供。

2　方法与结果

2.1　色谱条件

样品中黄芩苷和黄芩素有效分离的色谱条件为：色谱柱为4.6×250 mm的Thermo-C18色谱柱(5 μm)；柱温为25 ℃；紫外检测波长为274 nm；进样量10 μL；流动相为乙腈-0.1%甲酸，梯度洗脱(0～15 min，28%乙腈，72%甲酸；16～40 min，45% 乙腈，55%甲酸；41～45 min，28% 乙腈，72%甲酸)；流速为1.0 mL/min。

2.2　溶液制备

2.2.1对照品储备液取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品110.0 mg，精密称定，置于200 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶液约150 mL，超声溶解，再用70%甲醇溶液定容，充分摇匀即得0.550 0 mg/mL黄芩苷储备液。取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩素对照品11.0 mg，精密称定，置于100 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶液约70 mL，超声溶解，再用70%甲醇溶液定容，充分摇匀即得0.110 0 mg/mL黄芩素储备液。

2.2.2制备混合对照品溶液分别精密吸取黄芩苷对照品储备溶液9 mL，黄芩素对照品储备溶液3 mL，于同一25 mL棕色容量瓶中，用70%甲醇溶液定容，混匀，制成0.198 0 mg/mL黄芩苷、0.013 2 mg/mL黄芩素混合对照品溶液。

2.2.3制备供试品溶液取150425批次的3粒复方鱼腥草胶囊(0.35 克/粒)去胶囊，仅留粉末，充分研细后，采用分析天平精密称取6 g药粉，置入100 mL锥形瓶(有塞)中，精密加入50 mL甲醇溶液(70%)，称定质量，超声提取20 min,使用上述甲醇溶液补足质量，摇匀。取0.45 μm微孔滤膜，将溶液过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.4阴性样品溶液制备按照复方鱼腥草胶囊处方中各味药材配比，除黄芩外，分别秤取适量的鱼腥草、板蓝根、连翘、金银花4味药材，按常规工艺流程制备成药品，再按照供试品溶液制备方法制成不含黄芩的阴性样品溶液。

2.3　系统适应性试验

对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液制备完成后，分别精密量取各溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，按本研究色谱条件测定，保留时间为10.239、17.254 min，观察各溶液的色谱图；在对照品色谱和复方鱼腥草胶囊供试品色谱图的相应位置，确认黄芩苷和黄芩素的吸收峰，两者与其相邻色谱峰分离度>1.5，且阴性样品溶液的色谱图中未见黄芩苷和黄芩素的吸收峰，可知处方中鱼腥草、板蓝根、连翘、金银花等药材成分对于测定结果无影响。混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液的色谱图分别见图1。

a：混合对照品;b:供试品;c:阴性样品

图1混合对照品、供试品和阴性样品溶液的高效液相色谱图

2.4　精密度试验

制备好的混合对照品溶液，按照本次试验色谱条件，连续进样6次，每次10 μL，测算黄芩苷和黄芩素峰面积(RSD)，分别为0.426 9%和0.843 9%，仪器精密度良好。

2.5　重复性试验

取150425批次的18粒复方鱼腥草胶囊(0.35 克/粒)去胶囊，仅留粉末，按上述的供试品溶液制备方法，平行制备6份供试品溶液。按照方法2.1样品中黄芩苷和黄芩素有效分离的色谱条件进样，分别测算6组黄芩苷和黄芩素的峰面积，测定平均RSD分别为0.428 1%和0.810 6%；黄芩苷和黄芩素平均含量分别为8.852 1、0.467 9 mg/g，该测量条件下的测量重复性良好。

2.6　稳定性试验

取150425批次的5粒复方鱼腥草胶囊(0.35 克/粒)去胶囊，仅留粉末，取1 g粉末，按上述的供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，按照方法2.1样品中黄芩苷和黄芩素有效分离的色谱条件进样，进样时刻为分别在0、3、6、9、12、24 h，测算所得黄芩苷峰面积RSD为0.124 1%，黄芩素为0.585 0%，可知样品中待测成分可在24 h内保持稳定，稳定性良好。

2.7　样品含量测定

取批号为150425和150623的2批复方鱼腥草胶囊各25粒，去胶囊，仅留粉末，各取6 g粉末，每批取2份，每份精密称定1 g，按照供试品溶液制备方法制备成供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液，各10 μL，按照方法2.1样品中黄芩苷和黄芩素有效分离的色谱条件进样，测算各供试品溶液色谱峰面积，采用按照外标点法计算待测成分的含量。本次研究中，两个批次的复方鱼腥草胶囊：黄芩苷平均含量分别为 8.486 1、8.443 2 mg/g,黄芩苷色谱峰面积RSD为0.639 8%,0.715 4%；黄芩素平均含量为0.486 8、0.481 3 mg/g,RSD分别为0.847 1%和0.687 2%。150425和150623两批次复方鱼腥草胶囊黄芩苷和黄芩素的含量基本一致，差别较小，且待测成分的色谱峰面积RSD均<3.5%，可知两批次药品质量差异较小。

3　讨　　论

本次研究对高效液相色谱法测定复方鱼腥草胶囊中黄芩苷和黄芩素含量研究发现，结果显示两个批次的复方鱼腥草胶囊：黄芩苷平均含量分别为 8.486 1、8.443 2 mg/g,黄芩素平均含量为0.486 8、0.481 3 mg/g，可知两批次复方鱼腥草胶囊黄芩苷和黄芩素的含量基本一致，差别较小，质量水平较高；同时，两批次产品的黄芩苷色谱峰面积RSD为0.639 8%,0.715 4%；而黄芩素的RSD分别为0.847 1%和0.687 2%，两种待测成分的色谱峰面积RSD均<3.5%，可知两批次药品质量差异较小，复方鱼腥草胶囊质量控制效果良好，可有效保证药物疗效。

综上所述，复方鱼腥草胶囊质量控制良好，高效液相色谱法测定复方鱼腥草胶囊中黄芩苷和黄芩素含量简单、准确，且重复性、稳定性良好，为该药品质量控制提供一条可靠的途径。