多发性肌炎/皮肌炎患者外周血T细胞检测临床价值

解小红 刘辉

重庆三峡中心医院检验科，重庆 404000

多发性肌炎/皮肌炎是一种主要累及骨骼肌组织的自身免疫性疾病，患者以四肢近端骨骼肌受累、肌无力、肌肉耐力降低、血清肌酸激酶升高、肌肉组织中炎性细胞浸润为主要临床表现[1]。多发性肌炎/皮肌炎发病与免疫失调有关，临床尚未明确其发病机制，目前，该病的治疗药物仍以糖皮质激素、免疫抑制剂为主[2]。最新研究发现，自身抗原驱动T细胞介导的细胞毒作用引发的骨骼肌细胞损伤在多发性肌炎/皮肌炎的发生发展中扮演了重要角色[3]，因此，了解患者外周血T细胞表达特点，有望为该病发病机制的探索及治疗思路的拓展提供一定参考。为此，本研究选取93例患者及60名健康体检者进行了对照分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2013年5月—2016年10月收治的93例多发性肌炎/皮肌炎患者，均符合Bohan诊断及分类标准[4]、Ishida疾病活动性判断标准[5]，且入组前3个月内无免疫抑制剂、糖皮质激素等药物使用史，纳入观察组；同时，选取60名健康体检者，纳入对照组。观察组男37例，女56例，年龄19～55岁，平均（35.60±11.24）岁；对照组男24例，女36例，年龄18～58岁，平均（33.95±10.81）岁。两组受试者性别比例、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已征得我院医学伦理委员会批准，受试者均自愿参与并签署知情同意书。

1.2 检测方法

于受试者入组次日抽取其空腹肘静脉血5 mL，常规分离单个核细胞，以台盼蓝染色明确细胞活力＞95%。将细胞分装至3支离心管内，各管内细胞体积约30 μL，数量为3×105～5×105个，对照管加入10 μL鼠抗人IgG1-PE和10 μL鼠抗人IgG1-FITC，其余2管分别加入10 μL鼠抗人CD3-PE、10 μL鼠抗人CD4-FITC和10 μL鼠抗人CD3-PE、10 μL鼠抗人CD8-FITC（均购自法国ImmunoTech公司），混匀，避光，于37℃环境下孵育30 min，使用PBS溶液洗涤3次，而后加入0.5 mL PBS。使用FC500流式细胞仪及配套软件（美国Beckman Coulter公司），启用Macintosh系统，使用Cellquest多功能获取、分析软件，以对照管为阴性对照，计算各管内5000～10000个细胞内阳性细胞百分率，并据此分析CD+、CD+及 CD+348表达水平[6-7]。

1.3 分析方法

对比观察组、对照组入组次日外周血CD3+、CD4+及CD8+表达水平差别，并对接受糖皮质激素类药物治疗的34例患者，于治疗后再次检测其外周血T细胞表达水平，观察其治疗前后外周血T细胞表达水平变化。

1.4 统计学分析

对本临床研究的所有数据采用SPSS18.0进行分析，性别以（n）表示，并采用χ2检验，年龄、外周血T细胞表达水平以（x±s）表示，并采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组外周血T细胞表达水平

观察组外周血CD8+百分比低于对照组，其CD4+/CD8+比例高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组受试者外周血CD3+百分比、CD4+百分比比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 观察组与对照组外周血T细胞表达水平比较（x±s）

2.2 多发性肌炎/皮肌炎患者治疗前后外周血T细胞表达水平变化

与治疗前相比，34例接受糖皮质激素类药物治疗的多发性肌炎/皮肌炎患者治疗后外周血CD8+百分比显著升高，CD4+/CD8+比例显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 多发性肌炎/皮肌炎患者治疗前后外周血T细胞表达水平变化比较（x±s）

3 讨论

作为一组累及多系统、多器官的自身免疫性疾病，多发性肌炎/皮肌炎不仅可导致四肢近端肌萎缩和破坏，还可引发肺间质改变，并对患者预后质量造成严重影响[8]。因此，近年来临床愈发注重多发性肌炎/皮肌炎发病机制的探索，以期控制病情进展，尽可能避免间质性肺疾病的发生，从而保证患者生存质量[9]。

多项研究表明，外周血T细胞在多发性肌炎/皮肌炎的发生发展过程中可能扮演了重要角色，且与患者死亡风险具有密切关联[10-11]，而本研究结果表明，多发性肌炎/皮肌炎患者外周血CD8+百分比偏低而CD4+/CD8+比例偏高，说明患者外周血T细胞处于明显比例失衡状态，其中，CD4+T细胞主要发挥辅助/诱导功能，而CD8+T细胞具有抑制/细胞毒功能，CD4+/CD8

+比例升高意味着外周血T细胞平衡向CD4+偏移，可能是造成患者肌肉组织内大量炎性细胞浸润的主要原因[12]，与此同时，CD8+T细胞的减少还可造成白细胞介素-17（IL-17）等细胞效应因子大量分泌，而IL-17与受体结合后，可通过刺激靶细胞释放前炎症细胞因子、动员中性粒细胞，诱导IL-6、一氧化氮、前列腺素E2的产生，进一步促进炎性细胞在炎症部位的聚集，并导致局部肌肉纤维周围炎症的扩散与进展[13-14]。此外，亦有学者发现，CD8+百分比的下降可导致机体抑制肉芽肿发展的功能明显受损，这一病理生理变化可大幅削弱机体对致病性效应T细胞的抑制能力，也是导致病情进一步发展的主要原因[15]。因此，CD8+百分比下降所致CD4+/CD8+平衡偏移可能是多发性肌炎/皮肌炎的重要发病机制之一。需要注意的是，部分学者认为，多发性肌炎/皮肌炎患者外周血CD4+百分比存在显著升高变化[16]，但本研究并未观察到这一结论，考虑与检测时采用的双标记技术能够有效避免自然杀伤细胞、单核-巨噬细胞对CD4+百分比测定值的干扰有关。

经糖皮质激素类药物治疗后，观察组内34例患者外周血CD8+百分比显著升高，CD4+/CD8+比例显著下降，说明糖皮质激素类药物能够针对多发性肌炎/皮肌炎的发病机制，发挥一定治疗效果。然而，大量研究发现，糖皮质激素的免疫调节作用主要体现在改变CD4+百分比，而非调整CD8+百分比[17-18]，但本研究结果与之相反，考虑与患者用药时间较短、CD4+百分比变化有限有关。总体而言，短期应用糖皮质激素在提升抑制性T细胞比例方面具有一定作用，但仍需大样本、长期随访研究予以验证。

综上所述，多发性肌炎/皮肌炎患者外周血CD+/CD+48平衡明显偏移，可能参与了疾病的发生与发展过程，探索CD4+/CD8+平衡偏移的纠正策略，有望为患者预后质量的改善提供新的治疗思路。

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