RECK在盆腔脏器脱垂患者子宫主韧带和阴道前壁中表达意义的研究

赵 欣 刘岩松

（沈阳市妇婴医院，辽宁 沈阳 110011）

盆底功能障碍性疾病（PFD）是各种病因导致盆底支持薄弱，进而盆腔脏器移位引发盆腔器官的位置和功能异常[1]。PFD的发病机制尚不十分清楚，目前研究认为，PFD的发生与盆底支持组织结构功能完整性的破坏密切相关，细胞外基质（ECM）是盆底结缔组织的主要成分，RECK[2]是近年来发现的新型基质金属蛋白酶（MMP）抑制剂，可保护ECM免于被降解，从而保证ECM的完整性。本实验通过测定人类盆腔脏器脱垂患者主韧带、阴道壁中RECK的表达情况，旨在探讨盆腔脏器脱垂发生发展的分子生物学机制，对POP发病机制的基础研究具有一定意义。

1 资料与方法

1.1 资料来源：收集沈阳市妇婴医院妇科2014年1月至2016年6月诊断为盆腔脏器脱垂并行阴式子宫切除术+全盆底重建术患者的主韧带及阴道前壁组织。术中切取主韧带0.5 cm及阴道前壁1 cm，实验组及对照组所有患者均已婚，有阴道分娩史，无其他结缔组织疾病，术后病理回报无雌激素相关性疾病。诊断标准依据1996年国际尿控协会公布的POP-Q分度标准，分为Ⅰ度～Ⅳ度，共40例，患者年龄为52～74岁，其中绝经前6例，绝经后34例。另取非脱垂组10例（同期相应年龄因宫颈癌行广泛子宫切除术患者的主韧带及阴道前壁组织）做对照，其中绝经前4例，绝经后6例。POP组与对照组在年龄、产次、体质量指数等方面差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法：采集两组患者主韧带及阴道前壁组织，甲醛固定，石蜡包埋。用SP免疫组化染色法进行染色，将切片进行脱蜡处理，采用胃酶抗原修复法进行抗原修复，进行DAB显色及苏木素复染，并采用PBS代替一抗作为阴性对照品进行相关检测。

1.3 免疫组化染色结果判定：RECK主要位于细胞质，出现淡黄色至棕黄色细胞为阳性细胞。以PBS代替一抗作为阴性对照。两名病理医师对切片染色情况分析，随机选取5个具有代表意义的高倍视野（400倍），应用计算机图像分析仪分析各组RECK阳性区平均灰度值。染色的强弱与灰度值成正比，阳性物质越高，染色越深，灰度值越大。

1.4 统计学方法：运用SPSS13.0统计软件进行处理。计数资料以（%）表示，进行χ2检验，计量资料以（±s）表示，进行t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

RECK在主韧带及阴道壁组织中的表达情况：RECK在盆底组织表达阳性呈黄色或棕黄色，主要位于细胞外基质。POP组和对照组盆底组织中均见RECK阳性表达，RECK在对照组的灰度值明显高于Ⅱ度、Ⅲ度和Ⅳ度POP患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；III度和Ⅳ度患者中的灰度值明显低于Ⅰ度和Ⅱ度者的灰度值，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组RECK蛋白表达的比较（±s）

表1 各组RECK蛋白表达的比较（±s）

注：与对照组相比，aP＜0.05；与I度相比，bP＜0.05；与II度相比，cP＜0.05

组别 主韧带RECK平均灰度值阴道壁RECK平均灰度值对照组(n=10) 90.7±2.90 90.3±3.84 POP组(n=40)Ⅰ度 90.2±3.66 89.9±3.75Ⅱ度 86.4±3.44a 86.1±4.35aⅢ度 82.2±3.20abc 81.3±4.04abcⅣ度 81.9±3.06abc 80.2±2.66abc

3 讨 论

盆腔器官脱垂是中老年妇女的常见病，从解剖结构上来说，女性盆腔是由肌肉、韧带及骨盆所支撑，完整的结缔组织是支撑和固定盆腔脏器于其解剖位置的重要因素，任何组织结构改变都可能导致POP的发生。

1998年Takahashi等[2]在v2Ki2ras转染的NIH3T3细胞中发现RECK基因，其通过RAS信号通路，作用于细胞外基质，促进ECM降解，RAS同时释放抑制剂，抑制RECK基因表达。MMP通过对细胞外基质的降解作用，可分解胶原使其含量减少，影响盆底结构的稳定性，促进PFD的发生和发展。RECK是近年来发现的新型基质金属蛋白酶抑制剂[3-4]，细胞外基质是结缔组织的主要成分，此成分的含量或结构发生改变都可引起组织弹性降低，导致盆底脏器脱垂。

本研究结果显示，RECK在对照组及试验组患者的主韧带及阴道壁中均有表达，但对照组表达高于实验组，而实验组根据盆腔脏器脱垂程度不同，其RECK表达量也不同。RECK在盆腔脏器脱垂中的低表达说明其在此疾病的发生发展中起一定的作用，RECK表达的缺失可能是盆腔脏器脱垂发生机制之一。综上所述，本实验结果提示盆腔脏器脱垂患者主韧带及阴道前壁中RECK表达下降，并与脱垂严重程度相关，盆底组织中RECK减少可能引起盆底结缔组织支持能力减弱，最终导致POP发生发展的重要环节。但RECK在POP发生发展中的具体作用机制还不清楚，尚待进一步深入研究。

[1] Lin SY,Tee YT,Ng SC,et al.Changes in the extracellular matrix in the anterior vaginal of women with or without prolapse[J].Int Urogynecol J Pelvic Floor Dysfunct,2007,18(1):43-48.

[2] Takahashi C,Sheng Z,Horan TP,et al.Regulation of matrix metallop roteinase-9 and inhibition of tumor invasion by the membraneanchored glycoprotein RECK[J].Proc Natl Acad Sci USA,1998,95(22):13221-13226.

[3] Chen Y,Tseng SH.The potential of RECK inducers as antitumour agents for glioma[J].Anticancer Res,2012,32(20):2991-2998.

[4] Sakurai F,Nanjo Y,Okamoto S,et al.Up-regulation of RECK gene expression by small double stranded RNA targeting the promoter region[J].Cancer Gene Ther,2014,21(2):164-170.