FID-HPLC法测定黑参中的苯并[a]芘的含量

◎ 郭航宏，王雪丹，张念洁，陶晓杰

（延边朝鲜族自治州产品质量检验所，吉林 延吉 133000）

黑参是指将鲜人参通过蒸汽或其他方法蒸熟后晾干，呈淡黑褐色或黑茶褐色的人参。黑参以其有稀有皂甙含量高而闻名，然而黑参特殊的制作工艺[1]使得苯并芘的检测成为检测人参中非常必要的一个指标。苯并芘[2]（Benzopyrene）是苯与芘稠合而成的一类多环芳烃。最常见的苯并芘是苯并[a]芘。它是一种致癌物质和突变原。目前，国内外对苯并[a]芘含量测定方法报道荧光分析法、气质联用、高效液相法[3]、液质联用仪、酶联免疫吸附法等。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

日本岛津LC-10AT型高效液相色谱仪；SPD-10AD紫外可见检测器；SIL-10AD自动进样器；SCL-10A系统监控器；乙腈（色谱纯）；水（一级去离子水）；标准溶液：乙腈配制的标准溶液储备液（1 mg/mL）；乙腈稀释相应的标准工作溶液。对照品：苯并[a]芘（＞99%），天津一方科技有限公司提供；苯并[a]芘专用净化柱（维泰克科技公司）。

1.2 色谱分析条件

液相色谱条件及系统适应性实验色谱柱为Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈∶水（80∶20），流速为1.0 mL/min，荧光检测激发波长为384 nm，发射波长为406 nm。色谱图如图1所示。

图1 色谱图

1.3 对照品的制备

精密移取苯并[a]芘对照品，置于10 mL量瓶中，用乙腈溶解稀释至刻度，摇匀，得苯并[a]芘对照品溶液作为储备液。

1.4 样品的前处理

精密称取黑参1 g，加入5 mL正己烷，超声提取离心5 min，转移出上清液。正己烷重复提取一次。合并上清液，过柱子净化，浓缩至近干，加入乙腈定容。过0.45 μL滤膜，进样。供液相色谱测定用。

2 结果与讨论

2.1 线性方程、方法检测限和精密度

标准曲线的绘制：精密吸取苯并[a]芘对照品2.0、4.0、6.0、8.0 mL。分别置10 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，分别吸取20 μL，注入液相色谱仪，按照1.2项下的方法测定，取其中一个标准溶液重复测定6次，以峰面积与质量浓度进行一元线性回归分析，计算峰面积的相对标准偏差，进行线性关系、线性范围、检测限和精密度的测定。苯并[a]芘在较宽的浓度范围内均具有良好地线性、相关系数都大于0.999，精密度较好，Y=150 2.5X，最低检测限0.01 μg/kg，最低检出限以信噪比为3：1计算峰面积RSD为1.10%。

2.2 稳定性实验

样品溶液，按照1.2项下的方法在0、2、4、8、16和24 h分别进样20 μL，测定峰面积，结果表明样品溶液在24 h内保持稳定。RSD为1.85%。

2.3 重复性实验

取同一批样品6份，按1.2项方法测定峰面积，RSD为1.12%。

2.4 加样回收率实验

精密称取人参样品1 g，分别加入一定量的（3个梯度浓度）苯并[a]芘混合对照品溶液，按1.4的制备方法及1.2项条件方法进行测定，进样分析，每个平行6次平行测定，平均回收率94.59%。

2.5 样品的含量测定

取样品按照1.2项下的方法测定6种样品，每个平行3次平行测定，样品含量分别为0.240、0.238、0.236、0.232、0.244μg/kg和0.242 μg/kg，RSD为1.87%。

3 结论

苯并[a]芘是在黑参蒸制和干燥的过程中的产物，所以检测苯并[a]芘是衡量黑参品质的一个至关重要的检查指标。此方法前处理简单，易提取，为以后的黑参及黑参相关产品制定标准具有一定的参考价值。

[1]赵天琦，赵 岩，郜玉钢，等.黑参的研究进展[J].中国现代中药，2016，18（1）：123-125.

[2]冯亚净.食品中苯并芘的来源及减控方法的研究[J].粮食与油脂，2017，30（2）：72-75.

[3]曾露露.高效液相色谱法同时测定黑参中4种稀有人参皂苷的含量[J].中国药学杂志，2017，52（12）：1069-1072.