通阳刮痧疗法对腰椎间盘突出大鼠炎性细胞因子及机体免疫功能的影响

杨 红 王光义 陈晓霞

(贵州医科大学附属医院针灸科，贵州 贵阳 550004)

腰椎间盘突出(LDH)是指腰椎间盘因外力作用或退行性病变，导致椎间盘组织向外部突出，从而压迫(或刺激)马尾神经、神经根所表现出的一种综合征，其临床表现通常为腰腿麻木、疼痛、腰部活动受限等〔1〕。LDH具有病程长、反复发作的特点，对患者的生活质量有较大的影响，若得不到有效的治疗，甚至可能造成患者残疾〔2〕。手术治疗LDH有较大的风险，西医药物治疗也常常伴有一定的毒副反应，而我国传统医学治疗LDH有着较大的优势。LDH属于中医学“腰脚痛”、“腰痛”、“痹症”等范畴，有报道表明，中医药物、针刺、正骨手法等治疗方式治疗LDH均有较为明显的效果，同时中医治疗还具有痛苦小、并发症少等优点，易被患者接受〔3〕。通阳刮痧疗法是一种以调整机体功能、防治疾病为目的外治法，已有研究证实其对于痹证疗效确切〔4〕，但关于通阳刮痧疗法治疗LDH尚无相关报道。本研究采用通阳刮痧疗法对建模成功的LDH模型大鼠进行治疗，观察其对大鼠炎性细胞因子及机体免疫功能的影响，并探讨其可能的机制，以期为临床提供理论依据。

1 材料与方法

1.1试验动物 10～12周龄的清洁级雄性SD大鼠48只，体质量200～220 g，平均(207.68±3.47)g，由贵州医科大学实验动物中心提供。

1.2主要仪器及试剂 流式细胞仪(FACSCalibur，美国BD公司)，肿瘤坏死因子(TNF)-α试剂盒(北京永辉生物技术有限公司)，兔抗大鼠前列腺素(PG)E2多克隆抗体(北京华英生物技术研究所)，兔抗大鼠磷脂酶(PL)A2多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)。

1.3建模及分组方法 适应性喂养5 d后，采用随机数字表法将大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组，每组16只。模型组和实验组大鼠建立LDH模型〔5〕：两组大鼠均按剂量35 g/kg腹腔注射10%的水合氯醛，注射成功后剃除背部体毛，进行外科常规消毒并固定。在无菌条件下，在距离鼠尾根部1 cm处切断鼠尾，取出约4 mg髓核后缝合伤口。在鼠背部以L5棘突为中心，沿背部正中纵行切口，剥离、分开棘突两侧的骶棘肌，使得双侧L4、L5椎板均显露。行L4下关节突、L4半椎板以及L5上关节突切除术，充分暴露L5右侧背根神经节。取出的髓核在不造成机械压迫的情况下，放置于L5右侧背根神经结，逐层缝合。术后3 d内均单笼喂养，对每只大鼠均给予40万U/d的青霉素腹腔注射以预防感染。假手术组造模及预防感染的措施同模型组，但造模过程不放置髓核即缝合伤口。造模后模型组大鼠出现跛行步态、烦躁、啃咬肢体、术侧后爪屈曲、足下垂或握紧、术侧后肢突然自发抬起、站立期明显缩短、反复舔后爪、食量降低等表现，而假手术组未表现出上述症状，则判断为造模成功。

1.4治疗方法 假手术组及模型组大鼠均不给予治疗。实验组大鼠于造模后第5天采用通阳刮痧疗法：将大鼠以俯卧位固定，并将其背部毛发剪除。在大鼠背后均匀涂抹凡士林后，沿督脉的大椎到长强，采用自制推刮工具推刮12～15次，以出痧为度。随后于背部脊椎两侧足太阳膀胱经第一侧线上行12～15次推刮，重点推刮五脏背俞穴(肾俞、肝俞、脾俞)，以出痧为度。均匀缓慢推刮任脉的膻中、中脘、气海一线，12～15次。通阳刮痧疗法隔日1次，每个疗程6次，共进行3个疗程。

1.5取材和标本处理 最后一次治疗结束后1 d，大鼠均腹腔注射10%的水合氯醛进行麻醉，剂量为35 g/kg。采取腹主动脉采血法取4 ml全血，其中2 ml全血置于EDTAK2抗凝试管，而另外2 ml全血不抗凝于试管中静置。采血完毕后迅速收集各组大鼠L5右侧背根神经节样本：取卧位对大鼠进行开胸，经左心室、主动脉升部置管固定后将右心耳剪开，行心脏灌注。400 ml生理盐水灌洗后，采用400 ml 4%多聚甲醛液灌注固定。随后迅速取L5右侧背根神经节组织，并将其置于4%多聚甲醛液中固定，并在4℃下保存。

1.6观察指标及检测方法

1.6.1免疫功能指标检测 将EDTAK2抗凝试管中保存的全血应用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群水平，包括CD4+、CD8+水平，并计算CD4+/CD8+。

1.6.2TNF-α检测 不抗凝的2 ml全血于试管中静置12～20 min后，以3 500 r/min离心15 min，分离血清置于-20℃待测。采用酶联免疫法测定TNF-α水平，严格按试剂盒说明书进行操作。

1.6.3PGE2和PLA2检测 采用免疫组化法对背根神经节组织中的PGE2和PLA2的阳性表达情况进行检测：常规脱蜡、封闭、抗原修复，将内源性过氧化物酶阻断，血清或牛血清白蛋白(BSA)封闭，加入一抗、二抗，二氨基联苯胺(DAB)显色，复染细胞核后脱水封片。每只大鼠随机选取5张切片，应用Imge-Pro Plus成像系统进行摄片和观察，随机在每张切片中选取5个视野(400×)，取阳性细胞总数的均值。

2 结 果

2.1T淋巴细胞亚群检测结果 最后一次治疗结束后1 d，模型组CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值均明显低于假手术组(P<0.05)；实验组CD4+及CD8+水平均明显高于假手术组，但CD4+/CD8+比值明显低于假手术组(P<0.05)；实验组CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值均明显高于模型组(P<0.05)。见表1。

表1 三组T淋巴细胞亚群检测结果比较

与假手术组比较：1)P<0.05；与模型组比较：2)P<0.05,下表同

2.2血清TNF-α检测结果 假手术组、模型组、实验组血清TNF-α水平分别为(21.35±4.63)ng/L、(51.62±7.34)ng/L、(33.82±5.17)ng/L。实验组大鼠血清TNF-α水平明显高于假手术组大鼠，而低于模型组大鼠，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

2.3PGE2和PLA2检测结果 实验组大鼠背根神经节组织中的PGE2和PLA2的阳性表达明显高于假手术组大鼠，而低于模型组大鼠，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 PGE2和PLA2检测结果(个，

3 讨 论

中医认为，LDH的病机核心是瘀和虚，而刮痧作为中医自古流传的技法之一，具有器械简单、操作方便、费用低廉的优点，已被证实具有活血化瘀、解表祛邪、调畅气血、疏通经络等作用〔6，7〕。通阳刮痧疗法是全国名老中医吕明庄教授自创的一种刮痧方法，此方法基于中医针灸经络理论，具有防治疾病、调整身体机能的功效。督脉为“阳脉之海”，主人体一身之阳气，而与其在同一平面的背俞穴处在督脉两侧膀胱经之上，与五脏六腑紧密相连，两者经气相互贯通，且与脏腑之气相通。通阳刮痧疗法以推刮背部督脉和膀胱经为主，通过调节脏腑阴阳血气，达到治本的目的。膻中疏利上焦气机，为宗气汇聚之所，中脘可疏通中焦、调节脾胃升降，而气海总调下焦，为元气发生之处。通阳刮痧疗法在腹部以推刮任脉为主，通过膻中、中脘、气海三穴调节三焦各部脏腑气机。经皮部-孙络-络脉-经脉-脏腑的途径，通阳刮痧疗法发挥通阳导气的优势，起到平衡阴阳、调和气血、通经活络的作用。

正常的椎间盘由中心的髓核、上下软骨板以及四周纤维环构成，其中髓核由髓核细胞、蛋白多糖、Ⅱ型胶原等组成〔8〕。研究表明〔9〕，蛋白多糖和Ⅱ型胶原是自身抗原成分。LDH发生后，上述抗原的释放对自身免疫反应起到激活的作用。田鹏等〔10〕研究发现，LDH患者CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+水平均明显下降。本研究中模型组大鼠CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+水平均明显低于假手术组和实验组大鼠，与上述研究结果相符，表明细胞免疫异常可能是LDH的发病机制之一。而本研究中实验组大鼠CD4+/CD8+水平虽然低于假手术组大鼠，但明显高于模型组大鼠，提示通阳刮痧疗法可有效调节LDH大鼠的免疫功能。推测其原因，通阳刮痧疗法可使血液及淋巴液流动加快、血管扩张、局部组织高度充血，在血液搬运力量及吞噬作用增强的情况下，LDH大鼠体内的废物和毒素排出速度加快，从而全身抵抗力增强。同时组织胺类物质在痧退的过程中释放增加，对各个器官有刺激作用，各器官的功能活力得到增强，从而使免疫功能也得到提高。

TNF-α是一种与LDH患者神经性疼痛密切相关的致炎因子，由吞噬细胞释放，其在LDH患者体内含量的异常升高可促进神经根浸润，引发组织损伤并加剧炎症反应〔11〕。此外TNF-α还有诱导神经痛觉过敏的作用，这也是LDH腰腿痛可能的机制之一〔12〕。本研究中实验组大鼠血清TNF-α水平高于假手术组大鼠，但明显低于模型组大鼠，说明通阳刮痧疗法具有控制机体炎症反应的作用。除了TNF-α水平以外，本研究还观察了PGE2和PLA2这两种炎性细胞因子在背根神经节组织中的表达，结果显示实验组大鼠背根神经节组织中的PGE2和PLA2的阳性表达明显高于假手术组大鼠，而低于模型组大鼠。背根神经节作为脊髓中枢系统与机体内外环境相连接的纽带，在神经病理性疼痛的产生中有着重要作用。LDH患者退变或突出的髓核可产生多种导致背根神经节敏感性增加的炎性介质，而PGE2和PLA2就是其中重要的两种。PGE2是一种脂质炎性介质，主要由花生四烯酸代谢产生，与疼痛的产生密切相关。郭刚等〔13〕在LDH患者髓核附近的组织中检测到PGE2活性异常升高，推测PGE2可能与LDH及坐骨神经痛的发生存在密切关系。PLA2可以引起包括花生四烯酸在内的一些炎性介质的产生，被认为是一种局部组织炎症发生的特殊标志，同时其自身也是一种致痛物质。有报道表明〔14〕，PLA2的大量表达是导致坐骨神经脱髓鞘化、水肿、引发神经细胞凋亡的重要原因。本研究结果提示，通阳刮痧疗法可以降低LDH大鼠背根神经节中的PGE2和PLA2含量，从而达到促进损伤修复的作用。推测因出痧过程中毛细血管破裂，皮肤局部形成的淤血斑点正是血流外溢的表现，而当血凝块消散(痧退)时，自体溶血产生的新刺激素可加强局部新陈代谢，从而达到消炎的效果。

综上所述，通阳刮痧疗法可明显降低LDH大鼠炎性细胞因子的表达，并提高其免疫功能，具有明显的抗炎及免疫调节作用。

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