老年胃间质瘤组织中DOG1表达及对预后的影响

魏 娜

(中航工业三六三医院消化内科，四川 成都 610000)

胃间质瘤(GST)是一种起源于胃间叶组织的肿瘤，是消化系统较为常见的肿瘤之一〔1〕。该肿瘤具有一定的恶性度，根据其恶性程度划分有极低，低，中，高度危险性等，对于肿瘤直径大于4 cm，核分裂象>5/50 HPF考虑恶性可能较大。该病的发病机制尚不明确，可能与c-kit基因或血小板源生长因子(PDGF)的基因突变有关〔2〕。可于各年龄段起病，但以中老年人群最为常见，其中40岁以后发病率较高。该病早期临床症状不明显，等肿瘤增长到一定程度常表现为上腹部不适，消化道出血等症状〔3〕。GST的诊断缺乏特异性的标准，临床上以免疫组化标记CD117为确诊间质瘤的重要参考〔4〕。此外需要结合肿瘤的形态学改变，例如肿瘤呈现梭形、核分裂象增多等〔5，6〕。但对于镜下形态学不典型的肿瘤常不能完全确定其来源及性质，因此，临床上急需扩充间质瘤的诊断指标，特别是能用于判断患者预后的指标。GST中发现的蛋白(DOG)1由960个氨基酸组成，可能是一种通过钙离子激活的氯离子通道蛋白，近年发现，DOG1蛋白与GST发生、发展密切相关的指标〔7〕。本研究分析DOG1在瘤体内的表达及对老年GST患者预后的判断价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 2013年1月至2016年12月在中航工业三六三医院接受外科手术治疗的老年GST患者86例，纳入标准：年龄≥60岁，经临床、影像学及病理学检测明确诊断为GST(高危)，患者及家属术前均告知相关情况，并自愿签署知情同意书。排除标准：①合并其他组织起源的恶性肿瘤；②严重的肝肾功能障碍；③合并自身免疫性疾病；④活动性感染；⑤临床资料缺失。其中男35例，女51例，平均年龄(66.1±4.2)岁，平均病程(7.3±2.6)个月。以相对DOG1水平中位数(7.26)为界，将患者分为DOG1高水平组(DOG1≥7.26，n=43)及DOG1低水平组(DOG1<7.26，n=43)。

1.2标准及检测 GST的诊断标准参照中国胃肠间质瘤诊断治疗共识(2013年版)〔8〕。患者均接受同一组医师所施行的手术治疗，术前准备及术后处理均由同一组医师评估和指导，术后留取肿瘤组织及瘤旁正常组织。手术标本一部分采用甲醛溶液固定，制作石蜡切片采用免疫组化标记CD117及DOG1。一部分手术标本采集后充分研磨，提取蛋白后采用Western印迹半定量检测CD117及DOG1的水平。比较间质瘤中不同水平DOG1患者术后1年累积复发率。

1.3统计学方法 采用SPSS21.0统计软件进行t检验，复发率应用Kaplan-Meier曲线计算，采用Log-rank检验。

2 结 果

2.1DOG1及CD117在GST中的表达 免疫组化染色证实间质瘤中表达CD117及DOG1。Western印迹检测表明，间质瘤组织中CD117(6.7±1.30)与DOG1表达水平(7.2±1.50)显著高于瘤旁正常组织(1.0±0.27，1.0±0.30)(P<0.05)。见图1和图2。

图1 GST组织DOG1和CD117表达(×200,免疫组化)

图2 DOG1及CD117在GST中的表达Western印迹检测

2.2GST中DOG1表达与CD117表达相关性 DOG1表达与CD117表达呈正相关(P<0.01)。见图3。

2.3GST中不同水平DOG1患者术后1年累积复发率的比较 DOG1高水平组术后1年累积复发率(25.58%)显著高于DOG1低水平组(9.30%)(P=0.042)，见图4。

图3 GST中DOG1表达与CD117表达相关性

图4 GST中不同水平DOG1患者术后1年累积复发率的比较

3 讨 论

胃肠道间质瘤是一种起源于胃肠道间叶组织肿瘤，其发病率在消化道系统肿瘤中约占2%，可发生消化道的任何部位，其中胃的发病率最高。男女发病相当，常见于50岁以上的中老年人，年轻患者也可发病，儿童较为罕见。李军川等〔9〕研究认为，间质瘤的危险因素和肿瘤发生部位、年龄和性别等无明显关系。间质瘤主要起源于胃肠道平滑肌，较少来源于血管和神经等组织，但却与神经功能密切相关，是一种性质不明的肿瘤。消化道间质细胞起源于中胚层，分化程度较低，具有多种分化潜能，可分化为成纤维细胞、脂肪细胞、血管内皮细胞和滑膜细胞等。由于早期无明显特异性症状，随着肿瘤生长，可表现为胃肠道系统多种症状，如腹部包块、出血、梗阻等，可出现血液转移和局部侵犯，临床容易漏诊和误诊〔10〕。部分间质瘤为恶性或可发展为恶性间质瘤。胃肠间质瘤在腹部CT和磁共振成像(MRI)表现无特异性，早期病变在内镜下主要变现为隆起型病变，对于怀疑为间质瘤患者常需结合超声内镜，操作较复杂。需和平滑肌瘤、神经鞘瘤、炎性肌纤维母细胞瘤和恶性间皮瘤等多种疾病相鉴别。胃肠间质瘤是起源于平滑肌细胞和神经组织的肿瘤，且按照其大小、镜下细胞的形态学改变，是否合并出血、坏死等鉴定其良恶性。吴红梅等〔11〕从临床病理学研究发现，肿瘤直径，手术是否残留，核分裂数及细胞形态和异形性显著影响患者预后。但近年来研究认为，其判定为良性的间质瘤也可发生转移，因此对于根据病理学镜下特点鉴别良恶性具有一定的局限性〔12〕。目前该病的确诊方法主要依靠病理学检测，特别是CD117的免疫组化检测。因间质瘤具有一定的致死率，特别是分级为高危的间质瘤，具有高复发率和低生存期。单纯依据CD117的表达来诊断间质瘤具有一定局限性，且少数间质瘤可呈现CD117阴性的情况〔12〕。DOG1是新近发现的与间质瘤发生发展密切相关的指标。DOG1定位于人类11q13上细胞周期蛋白(CCN)D1基因座，含有26个外显子，是一种8次穿膜蛋白〔12〕。研究发现DOG1分布在各种内分泌上皮细胞、视网膜和感觉神经元细胞等，肝内外胆管上皮细胞和睾丸间质细胞及胃肠间质瘤等多处〔13〕。多项研究均显示DOG1在人类胃肠道间质瘤中的表达阳性率超过90%〔10，14〕。

CD117是c-kit基因的表达产物，是多次跨膜的酪氨酸激酶受体，高度表达以胃间质瘤细胞膜和细胞质中，目前诊断胃间质瘤的主要手段采用形态学镜下观察和免疫组化，其中免疫组化重要的依据就是检测CD117的表达〔15〕。既往认为，CD117阳性是诊断间质瘤的“金标准”，近年来发现，胃间质瘤中约95%患者表达CD117，通过大体标本情况和镜下细胞形态并结合免疫组化检测CD117可准确诊断胃间质瘤，但部分患者由于c-kit基因的缺失或变异，导致CD117表达阴性，尚需要其他指标来诊断〔16，17〕。临床中对于CD117阴性患者及部分形态不典型的患者常需选取CD34蛋白辅助诊断，由于CD34在总体胃肠道间质瘤(GIST)中的阳性率约70%，且在原始造血干细胞、内皮细胞和肌成纤维细胞中均有表达，临床特异性不高。近年来研究发现，DOG1在胃肠道间质瘤中高度表达不受c-kit基因等的表达影响，DOG1是Cajal间质细胞中钙离子调节的氯通道蛋白，对于间质瘤具有高度特异性。研究表明在CD117阴性情况下，多数患者标本DOG1仍高度表达，因此对于临床特征不明显、免疫组化诊断不明时患者行DOG1检测，对于准确诊断为间质瘤具有重要意义〔18～20〕。

本研究提示DOG1与CD117类似，对间质瘤的诊断具有一定价值，这与许春伟等〔21〕研究结果一致。本文结果和李宝江等〔22〕的研究结果一致，李宝江等〔22〕认为，DOG1的表达与患者年龄、性别、肿瘤的起源部位、肿瘤的细胞起源、有无侵袭性等因素均无显著相关。提示DOG1与CD1117在胃间质瘤中均高度表达，且DOG1也具有和CD117程度相当的诊断准确性，亦有可能两种蛋白在间质瘤的发生过程中存在内在共同的联系，但具体机制尚需进一步研究以明确。间质瘤是一种具有潜在恶性行为的交界性肿瘤。虽然行边缘阴性的手术切除术有望使患者获得根治，但术后仍然有一部分患者存在复发倾向〔6，23〕。本文提示DOG1在瘤体内水平对患者术后复发具有一定辅助判断价值，为临床中预后的判断提供量化标准。本研究由于样本量有限所得结果可能存在一定的偏倚，尚需更多样本量和多中心性研究加以验证；此外，本研究虽然发现DOG1在间质瘤中的水平改变对胃间质瘤的临床预后有一定的影响，但DOG1在间质瘤发生发展中的具体作用和对复发等的影响，尚需进一步实验加以论证。

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