我国部分地区鸡、猪源沙门氏菌血清型与耐药性比较

李月华，赵建梅，张青青，曲志娜

（中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032）

沙门氏菌（Salmonella）是肠杆菌科中具有重要公共卫生学意义的人兽共患病原菌，全世界已发现2 500多种血清型，我国已发现292种血清型[1]。畜禽感染沙门氏菌后，可引起猪副伤寒、鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒等病症，降低动物的繁殖能力、生产性能及产蛋率等，甚至引起动物死亡，给畜禽养殖业造成了严重经济损失[2]。抗生素在治疗细菌引起的疾病方面发挥了不可替代的作用，但也带来了细菌耐药问题。沙门氏菌就已出现了严重的耐药及多重耐药现象，耐药谱型也在不断增多[3]。这不仅给沙门氏菌病防治增加了难度，而且人类一旦食用染病的动物源性（主要是鸡和猪）食品，可能会感染耐药沙门氏菌，引发严重的食品安全问题，对人类生命健康造成威胁[4]。因此，及时监控不同血清型畜禽沙门氏菌流行情况及耐药趋势变化，对控制沙门氏菌传播，降低食品安全隐患有着重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 2012—2017年分离自华中、华东、华北和西南地区6省份的猪场和鸡场拭子样品的283株沙门氏菌和大肠杆菌标准菌株（ATCC25922），由中国动物卫生与流行病学中心动物产品安全监测室保存。

1.1.2 主要仪器与试剂 涡旋混合仪、恒温培养箱：购自美国Luminex；生物安全柜：购自美国NUAIRE公司；可见分光光度计：购自上海仪电分析仪器有限公司；沙门氏菌抗血清：购自泰国S&A；胰蛋白大豆胨培养基、细菌琼脂粉：购自北京陆桥技术有限公司；含有青霉素类（氨苄西林）、阿莫西林/克拉维酸、头孢菌素类（头孢噻呋）、氨基糖苷类（庆大霉素、大观霉素）、四环素类（四环素、多西环素）、氯霉素类（氟苯尼考）、磺胺类（磺胺异噁唑、复方新诺明）、氟喹诺酮类（恩诺沙星、氧氟沙星）、多肽类（黏菌素E）13种药物的96孔药敏检测板：购自上海星佰生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血清型鉴定 参照GB/T 4789.4—2016，采用传统玻片凝集法，对菌株进行血清型鉴定。

1.2.2 药物敏感试验 根据美国临床实验室标准化委员会（CLSI）标准，用微量肉汤稀释法测定沙门氏菌的药物敏感性。试验操作参照药敏检测板说明书。对供试菌的最小抑菌浓度（MIC）进行数据读取，结果判定参照CLSI文件标准。测定药物共9大类13种，包括氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑、复方新诺明、恩诺沙星、氧氟沙星、黏菌素E。同时用大肠杆菌标准菌株（ATCC25922）做质控对照。

1.2.3 不同血清型的耐药性特征 以优势血清型肠炎和鼠伤寒沙门氏菌为例进行不同血清型对13种药物的耐药特征分析。

1.2.4 不同年份分离菌株耐药情况 统计2012—2017年间，不同年份沙门氏菌分离株对13种药物的耐药情况，并将其进行比较分析。

1.2.5 数据分析 通过卡方检验，分析鸡、猪源沙门氏菌在优势血清型、耐药程度和多重耐药程度等方面的差异。P＞0.05，差异不显著；P＜0.05，差异显著；P＜0.01，差异极显著。

2 结果

2.1 血清型分型

鉴定出血清型的菌株共有280株，含17种血清型。其中，鸡源菌株共有12种血清型，猪源菌株共有9种血清型。有3株鸡源菌株未鉴定出血清型。280株沙门氏菌的优势血清型为肠炎（44.64%）、鼠伤寒（22.50%）、婴儿（9.29%）、印第安纳（6.43%）和鸡白痢（6.07%），共占总数的88.93%。其中，鸡源菌株以肠炎（59.69%）、婴儿（13.61%）和鸡白痢（8.90%）为主，猪源菌株以鼠伤寒（58.43%）、肠炎（12.36%）、印第安纳（11.24%）和德尔卑（7.87%）为主。通过卡方检验，2种来源沙门氏菌的优势血清型差异极显著（P＜0.01）（图1、图2）。

图1 鸡源沙门氏菌血清型分布

图2 猪源沙门氏菌血清型分布

2.2 药敏试验

2.2.1 总体耐药/敏感 283株沙门氏菌对氨苄西林（79.86%）和磺胺甲基异噁唑（79.51%）2种药物耐药较严重，其次是多西环素（65.72%）、四环素（55.83%）和复方新诺明（55.48%），对黏菌素E、恩诺沙星和氧氟沙星3种药物耐药程度相对较轻，耐药率在9.54%～15.55%之间。从敏感程度看，有6种药物的敏感率在50.00%以上，其中最为敏感的药物是氧氟沙星（80.92%），其次是头孢噻呋（72.44%）和庆大霉素（67.84%）。氨苄西林、磺胺甲基异噁唑、大观霉素3种药物的敏感率在19.79%～28.62%之间，多西环素（18.02%）敏感程度最低。黏菌素E的耐药率虽然最低，但敏感率仅为56.18%，有34.28%为中敏菌株（表1）。

2.2.2 MIC分布 选取除阿莫西林/克拉维酸以外的12种药物（EUCAST无阿莫西林/克拉维酸监测数据），对本文所分离沙门氏菌的MIC分布与欧盟2017年公布的EUCAST监测数据进行比较。结果显示，对氨苄西林、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺甲基异噁唑、复方新诺明、恩诺沙星和氧氟沙星的耐药菌株大部分分布在高浓度区域，与EUCAST相比，这11种药物的MIC分布均有明显右移现象。选取氨苄西林和磺胺甲基异噁唑作图（图3、图4）。而对耐药率相对较低的黏菌素E，我国沙门氏菌的MIC分布相比欧盟有左移现象（图5）。

表1 283株沙门氏菌耐药/敏感结果及鸡、猪源沙门氏菌耐药差异分析

图3 氨苄西林的MIC分布

图4 磺胺甲基异噁唑的MIC分布

图5 黏菌素E的MIC分布

2.2.3 鸡猪源分离菌株耐药比较 从耐药结果（表1和图6）来看，猪源菌株比鸡源菌株耐药严重，对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺甲基异噁唑、复方新诺明、恩诺沙星和氧氟沙星11种药物的耐药率均高于鸡源菌株，仅对头孢噻呋和黏菌素E的耐药率低于鸡源菌株。经过卡方检验，2种来源的分离菌株对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星和氧氟沙星的差异均极显著（P＜0.01），对黏菌素E的耐药率差异显著（P＜0.05），对氨苄西林、磺胺甲基异噁唑和复方新诺明的耐药率差异不显著（P＞0.05）。

图6 鸡猪源分离菌株耐药结果比较

2.3 多重耐药

2.3.1 总体多重耐药 按药品大类进行多重耐药统计，283株沙门氏菌中有240株为多重耐药菌株，多重耐药率为84.81%（表2）。

表2 283株沙门氏菌多重耐药情况

2.3.2 鸡猪源分离菌株多重耐药比较 194株鸡源菌株中有166株为多重耐药菌株，多重耐药率为85.57%，89株猪源菌株中有74株为多重耐药菌株，多重耐药率为83.15%，差异不明显。猪源菌株的高耐问题较为突出，主要集中在5耐以上，占比65.17%，鸡源菌株主要集中在5耐以下，5耐以上菌株仅占比40.21%。经过卡方检验，两者5耐以上的菌株比例差异极显著（P＜0.01）（表2、图7）。

图7 鸡猪源分离菌株多重耐药比较

2.4 不同血清型沙门氏菌的耐药特征

耐药结果表明鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌对13种药物的耐药程度有差异（图8）。其中，肠炎沙门氏菌对黏菌素E的耐药率为70.89%，而鼠伤寒沙门氏菌对其全部敏感。经卡方检验，2种血清型沙门氏菌对阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑和黏菌素E的耐药率差异极显著（P＜0.01），对氨苄西林耐药率差异显著（P＜0.05）。

图8 不同血清型耐药情况

2.5 不同年份沙门氏菌的耐药情况

2012——2017年猪禽源沙门氏菌分离株对13种药物耐药性比较结果显示不同年份之间存在差异（表3）。经统计学分析，氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、氟苯尼考、复方新诺明、恩诺沙星和黏菌素E差异极显著（P＜0.01）；多西环素和氧氟沙星差异显著（P＜0.05）；而磺胺异噁唑没有显著性差异。

3 讨论

经本实验血清型鉴定的280株沙门氏菌共分为17种血清型，其中优势血清型为肠炎（44.64%）、鼠伤寒（22.50%）、婴儿（9.29%）、印第安纳（6.43%）和鸡白痢（6.07%）。这与陈健皓等[5]对江苏省鸡、猪源沙门氏菌血清型的研究结果基本一致，但所占比例存在差异。本研究结果显示，鸡源沙门氏菌血清型以肠炎（59.69%）、婴儿（13.61%）和鸡白痢（8.90%）为主，猪源菌株血清型以鼠伤寒（58.43%）、肠炎（12.36%）、印第安纳（11.24%）和德尔卑（7.87%）为主。经过卡方检验，2种来源的沙门氏菌优势血清型差异极显著。郝红珊等[6]在调查广西省、广东省、福建省和上海市超市的鸡肉时发现，沙门氏菌的主导血清型为肠炎（20.20%）、印第安纳（15.60%）和汤普逊（10.80%）。龙梅等[7]对四川省的鸡肉和鸡蛋生产加工过程中的沙门氏菌进行血清型鉴定，发现肠炎沙门氏菌普遍流行（44.10%），其次为德尔卑（19.50%）和鼠伤寒（9.70%）。四川省猪场拭子样品中沙门氏菌血清型以德尔卑为主（60.26%），其次是鼠伤寒（16.56%）和罗森（6.60%）[8]。哈尔滨市猪直肠样品中猪霍乱（71.40%）为最主要血清型，其次为猪伤寒（22.90%）和鼠伤寒（5.70%）[9]。上述结果均表明沙门氏菌血清型受地域和宿主差异影响，且肠炎沙门氏菌主要来源于鸡，鼠伤寒沙门氏菌主要来源于猪，这与国内外部分报告相似[10-12]。

从耐药结果看，沙门氏菌对磺胺类、青霉素类、氨基糖苷类和四环素类药物耐药较为严重，这与刘艳红等[13]的研究结果一致。通过与欧盟EUCAST监测数据比较发现，我国沙门氏菌对氨苄西林、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺甲基异噁唑、复方新诺明、恩诺沙星和氧氟沙星的MIC分布均有明显的右移现象，耐药问题比较突出，这也提示在今后的兽药研发、用药范围和用药剂量等方面要进行严谨规范。与鸡源菌株相比，猪源菌株的耐药问题更为严重，对11种抗菌药物的耐药率均高于鸡源菌株。经过卡方检验，2种来源的分离菌株除了对氨苄西林、磺胺甲基异噁唑和复方新诺明的耐药率差异不显著外，对其他10种药物的差异均较为显著，这与宋雪等[14]对吉林、江西和新疆的鸡、猪源沙门氏菌耐药差异结果基本吻合。肠炎和鼠伤寒沙门氏菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺甲基异噁唑和黏菌素E的耐药差异显著，而且在2012—2017年6省的沙门氏菌分离株对13种药物的耐药率除磺胺异噁唑外的12种药物都存在显著差异。北京市和陕西省[15]的鸡源沙门氏菌对黏菌素的耐药率最高，其次为磺胺甲基异噁唑、氨苄西林和多西环素。四川省[8]的猪源沙门氏菌对氨苄西林、奥格门丁、大观霉素、四环素和磺胺甲基异噁唑的耐药率均在91.4%以上。这说明不同来源的沙门氏菌耐药性呈现区域性耐药特点，这可能与当地菌株的流行病学特征和兽医用药情况有关。

表3 不同年份沙门氏菌分离株耐药情况

283株沙门氏菌的多重耐药率为84.81%，与目前山东、四川和广西等地的沙门氏菌多重耐药率持平[8、16-17]。鸡源菌株多重耐药率为85.57%，猪源菌株多重耐药率为83.15%，差异不明显。猪源分离菌株的高耐问题较为突出，与鸡源菌株在5耐以上的菌株比例差异极显著，这说明在饲养、预防和临床治疗上，养猪业亟需规范抗菌药的合理使用，以遏制沙门氏菌耐药性的发展。

4 结论

本研究对2012—2017年间我国部分地区鸡、猪源沙门氏菌进行了血清型鉴定和耐药性比较。结果表明：肠炎和鼠伤寒分别是我国部分地区鸡、猪源沙门氏菌的优势血清型；沙门氏菌耐药性与动物来源、血清型和分离年份相关，且鸡、猪源沙门氏菌耐药情况比欧盟国家严重。本研究结果揭示了不同动物来源沙门氏菌的流行特征和耐药情况，为控制沙门氏菌的传播，降低食品安全隐患，保障消费者健康提供了数据支撑。

[1] 赵翠，张庆，郭树源，等. 山东省动物源沙门氏菌MLST和血清分型与分布研究[J]. 中国人兽共患病学报，2017，33（9）：793-799.

[2] 张璐，张雪伟，袁宗辉，等. 畜禽沙门氏菌病防制研究进展[J]. 中国畜牧兽医，2017，44（7）：2103-2111.

[3] 王娟，刘鲜鲜，张倩，等. 山东生猪屠宰环节沙门氏菌血清型及耐药性测试[J]. 中国人兽共患病学报，2017，33（6）：517-521.

[4] 吴荔琴，刘佩怡，伍宏凯，等. 2014—2016年广州市屠宰场分离沙门氏菌血清学鉴定和耐药性分析[J]. 中国兽药杂志，2017，51（7）：15-20.

[5] 陈健皓. 沙门氏菌快速检测方法的筛选与应用和鸡源、猪源菌株MLST分子溯源及耐药性研究[D]. 扬州：扬州大学，2017.

[6] 郝宏珊. 八省市鸡肉源沙门氏菌污染状况调查及其特性研究[D]. 西安：西北农林科技大学，2012.

[7] 龙梅. 鸡肉、鸡蛋生产加工过程中沙门氏菌的血清型变化及其对消毒剂耐药性研究[C]//中国食品科学技术学会，美国食品科技学会. 中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛论文摘要集.北京：中国食品科学技术学会，美国食品科技学会，2015：2.

[8] 岳秀英，葛荣，汪开毓，等. 四川省猪源沙门氏菌及耐药性变迁调查[J]. 四川动物，2015，34（5）：707-713.

[9] 加春生，毛泽明，王晓楠，等. 猪沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性分析[J]. 东北农业大学学报，2014，45（8）：49-54.

[10] STEPAN R M，SHERWOOD J S，PETERMANN S R，et al. Molecular and comparative analysis of Salmonella enterica Senftenberg from humans and animals using PFGE，MLST and NARMS[J]. Biomed central microbiology，2011（11）：153.

[11] JING L，CONGMING W，CHENBIN W，et al.Serotype distribution and antibiotic resistance of Salmonella in food-producing animals in Shandong Province of China，2009 and 2012[J]. International journal of food microbiology，2014，180（3）：30-38.

[12] AUTHORITY E F S. The European Union summary report on trends and sources of zooneses，zoonotic agents and food-born outbreaks in 2012[J]. European food safety authority journal，2014，12（2）：96-98.

[13] 刘艳红. 沙门氏菌和大肠杆菌耐药性及耐药基因的研究[D]. 沈阳：沈阳农业大学，2016.

[14] 宋雪，赵格，刘文化，等. 不同来源沙门氏菌的毒力基因检测与耐药性分析[J]. 中国动物检疫，2017，34（5）：40-46.

[15] 邹明，魏蕊蕊，张纯萍，等. 鸡源沙门氏菌的血清型、耐药性和耐药机制调查[J]. 农业生物技术学报，2013，21（7）：855-862.

[16] 孙璐，王娟，黄秀梅，等. 肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌耐药基因检测及耐药相关性分析[J]. 中国动物检疫，2017，34（1）：35-39.

[17] 黄福标，卢冰霞，刘磊，等. 屠宰猪肠道沙门氏菌的分离鉴定、耐药性分析及致病性试验[J]. 中国畜牧兽医，2012，39（1）：172-177.