鹅掌楸属GST家族基因的克隆与表达分析

成彦丽，王 曦，司卫杰，朱腾飞，李火根

(南京林业大学 南方现代林业协同创新中心, 南京 210037)

谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase，GSTs, EC 2.5.1.18)是一种普遍存在于生物体内，具有不同功能的一组同工酶[1]。Booth等于1961年首次在动物中发现了谷胱甘肽S-转移酶，1970年Shimabukuro等在研究玉米时首次发现了植物中的谷胱甘肽S-转移酶，随着对GST基因研究的不断深入，人们发现GST基因家族成员众多、非常庞大，关于其分类与功能研究也随之展开[2-4]。最新的分类系统根据GST家族的基因结构、蛋白序列的保守性、底物的特异性及免疫交叉反应特性等，将其分为8个亚类：phi、tau、theta、zeta、lambda、 DHA(dehydroascorbate reductase，谷胱甘肽依赖的抗坏血酸还原酶)、TCHQD(tetra chloro hydro quinine dehalogenase，四氯代氢醌脱卤素酶)和微粒体的GSTs[5]。GST家族蛋白质可清除细胞异源物质，具有解毒作用；能够跨膜运输定位，将植物中很多次级代谢物质定位到合适的部位；保护细胞免受氧化损失；GSTs还可以作为配体蛋白，因此GST家族基因在植物响应多种非生物胁迫过程中起到了重要作用[6]。

鹅掌楸(Liriodendronchinense Sarg.)和北美鹅掌楸(LiriodendrontulipiferaLinn.)是木兰科(Magnoliaceae)鹅掌楸亚科(Subfam. Liriodendronideae)鹅掌楸属(Liriodendron)现仅存的2个种[7-8]。该属树种树干通直、生长迅速、叶形奇特、花大而美、材性佳，对二氧化硫和氯气抗性较强，是一类良好的生态、园林绿化和用材树种；同时该属树种还有药用价值，亦可作为生物能源，用途广泛，具有很高的价值[7-9]。尽管北美鹅掌楸与鹅掌楸是形态十分相似的姊妹树种，但北美鹅掌楸作为极具优势的先锋树种，广泛分布于美国东部及加拿大南部，并在阿拉巴契亚山区及宾夕法尼亚至佐治亚地区集中而连续分布[10-11]；鹅掌楸则星散分布于长江流域以南，是中国稀有的第三纪孑遗树种，由于种群规模小、天然群体种子萌发率低、不利环境、人为破坏等原因，已被列入中国珍惜濒危物种名录，并被IUCN红色名录列为濒危物种，是国家二级保护植物[7, 12-14]；进一步的研究表明北美鹅掌楸多态性水平高、遗传资源丰富、适应能力强于鹅掌楸[7-8, 15-17]。

鹅掌楸属是优良的用材与观赏树种，开展鹅掌楸抗逆性相关基因的克隆与表达分析，对于鹅掌楸抗逆基因的挖掘及应用有理论与实践价值。本研究从鹅掌楸属数据库中筛选出在植物抗逆过程中起重要作用的GST基因家族成员，克隆了4个GST基因的全长序列，采用生物信息学软件对其序列和编码的蛋白质进行了分析，研究了该基因在北美鹅掌楸不同组织中的表达差异，期望为探索GST家族基因的功能和鹅掌楸属适应性的研究提供参考。

1 材料和方法

1.1 植物材料

2016年春季,在南京林业大学下属实习林场的鹅掌揪属种源试验林内,分别选取鹅掌楸(庐山种源, LS)和北美鹅掌揪 (美国路易斯安那州种源, LYS)各1株，采集两者的花瓣用于基因克隆。同时采集LYS种源植株的嫩叶、花瓣、花萼、雄蕊、雌蕊、花芽、叶芽和茎，用于基因组织特异性表达分析。将采集的植株样品冷冻于液氮中带回实验室,于-80 ℃冰箱中保存备用[18]。

1.2 试验方法

1.2.1RNA提取和cDNA第一链的合成利用RNAprep Pure植物总RNA提取试剂盒提取鹅掌楸与北美鹅掌楸花瓣及北美鹅掌楸嫩叶、花瓣、花萼、雄蕊、雌蕊、花芽、叶芽、茎的RNA(天根生化科技有限公司) 。以鹅掌楸与北美鹅掌楸花瓣中的RNA为模板,利用RevertAid strand cDNA Synthesis Kit(赛默飞世尔科技有限公司)合成cDNA第一链；利用5′Full RACE Kit反转录试剂盒(宝生物工程有限公司)合成5′-RACE的cDNA；利用3′-Full RACE Core Set with PrimeScript RTase和SMARTer®RACE 5′/3′ Kit反转录试剂盒(宝生物工程有限公司)合成3′-RACE的 cDNA。以北美鹅掌楸花瓣、花萼、雄蕊、雌蕊、花芽、叶、叶芽、茎的RNA为模板，利用PrimeScriptTMRT Master Mix (Perfect Real Time)试剂盒进行反转录(宝生物工程有限公司)。

1.2.2GST基因家族EST序列的挖掘根据GST和glutathione-S-transferase 2个基因注释, 在北美鹅掌楸转录组数据库(http://ancangio.uga.edu/)与鹅掌楸转录组数据库中寻找GST家族基因的EST片段[19]。在NCBI数据库中，利用Blastn工具，对搜索到的EST片段在Nucleotide collection(nr/nt)数据库中进行比对分析。按照其比对得分的信息，将EST序列归类于GST基因家族中的各亚类下,然后利用clustalx、DNAMAN软件进一步比对确认。

1.2.3GSTs基因全长的扩增及ORF的预测与验证以转录组数据库中搜寻出的EST序列为基础，利用Oligo7软件设计中间片段引物。RACE引物在中间片段的基础上设计。ORF引物则以拼接得到的全长来设计，利用ORF finder (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/orfig.cgi)预测GSTs基因的开放阅读框,并在非翻译区(UTR)设计ORF引物。中间片段、RACE克隆、ORF验证所用的特异性引物序列及引物的退火温度见表1。

中间片段、RACE和ORF序列均通过PCR扩增得到，其中RACE采用巢式PCR。以北美鹅掌楸EST序列为基础的基因克隆，用北美鹅掌楸的cDNA模板，以鹅掌楸EST序列为基础的基因克隆，用鹅掌楸的cDNA模板。中间片段、RACE序列克隆中所用到的PCR反应体系总量为50 μL，包括：10×LATaqPCR Buffer II(Mg2+Free)缓冲液5 μL, MgCl2(25 mmol/L) 5 μL, dNTP Mixture (2.5 mmol/L each) 8 μL, 上游/下游引物(2.5 mmol/L each) 各2 μL,LATaq酶(5 U/μL) 0.5 μL, cDNA 2 μL, ddH2O 25.5 μL；相应的PCR反应程序为94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s, 退火温度 30 s, 72 ℃ 1 min, 35次循环；72 ℃ 10 min；4 ℃保存。ORF验证使用的为高保真酶，其PCR反应体系总量是50 μL，具体为：2×TransStart FastPfu PCR SuperMix 25 μL、ORF上游/下游引物(2.5 mmol/L each) 各2 μL、cDNA 2 μL、ddH2O 19 μL；PCR相应的反应程序为94 ℃ 3 min；94 ℃ 20 s, 50 ℃ 20 s, 72 ℃ 1 min, 循环35次；72 ℃ 10 min；4 ℃保存。将反应得到的PCR产物混合适量的5×Loading Buffer,进行琼脂糖凝胶电泳检测。把目的条带切胶回收，将回收产物连入pEASY-T1载体(ORF的PCR产物转入pEASY®-Blunt克隆载体),转入感受态,涂板,过夜培养(载体购自北京全式金公司)。最后进行阳性克隆检测,将菌液送至南京金斯瑞公司测序。

1.2.4GSTs基因的生物信息学预测利用NCBI数据库中的Blastn和Blastp程序,对LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1这4个基因的同源序列和同源蛋白质进行搜索比对。选取与LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1相似性高的蛋白质序列及拟南芥数据库(http://www.arabidopsis.org/)中GST家族的蛋白质序列，利用MEGA6.0软件，采用邻接法(Neighborhood-Join, NJ)，将Bootstrap设为1 000次重复，构建分子系统进化树,预测鹅掌楸属GSTs蛋白质与其他物种GSTs蛋白质的亲缘关系[20]。使用在线软件Expasy ProtParam (http://web.expasy.org/protparam/)预测LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1这4个基因编码蛋白质的理化性质。通过在线工具TargetP (http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/)对LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1蛋白质的亚细胞定位进行预测。利用SOPMA (http://npsa-pbil.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_autom,AT.pl?page=npsa_sopma.html)预测LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1蛋白质的二级结构。通过NCBI中的CCD (Conserved Domains)程序分析这4个蛋白质的保守结构域。

1.2.5GSTs基因的组织特异性表达分析以Actin引物为内参基因, 同时设计LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1 的实时荧光定量引物，对GST家族基因在北美鹅掌楸花瓣、花萼、雄蕊、雌蕊、花芽、叶、叶芽、茎8个不同组织中的表达量进行分析(表1)[21]。实时荧光定量PCR的反应体系为20 μL，包括：SYBRPremix Ex Taq(Tli RNaseH Plus)(2×) 10 μL,上游/下游引物(10 μmol/L each)各0.4 μL, ROX Reference Dye(50×) 0.4 μL, DNA模板2 μL, ddH2O 6.8 μL。反应程序为95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s, 60 ℃ 13 s, 循环40次；95 ℃ 15 s；95 ℃ 1 min, 60 ℃ 15 s, 循环1次。定量实验在本实验室ABI SteponePlus仪器上进行。

表1 GST家族基因克隆所用的引物序列

2 结果与分析

2.1 鹅掌楸属GST家族基因的筛选

根据GST、glutathione-S-transferase注释，在北美鹅掌楸和鹅掌楸转录组数据库中分别筛选出46条和14条GST基因家族的EST片段。利用Blastn比对，将所有GST的EST序列统一为5′到3′的顺序，并根据NCBI同源序列比对结果的注释，将60条EST序列进行初步分类。其中54条EST序列与GST基因家族序列相似度高，通过DNAMAN、 ClustalX、Mega6.0软件进行比对鉴定出19条GST家族基因的EST序列，分别来自于GST基因家族的Tau、Zeta、Theta及Phi 4个亚类。其中，Tau类搜索出8个基因；Zeta类和Theta类各鉴定出2个基因；Phi类包括7个基因；各个基因包括的EST参考序列见表2。此外，还有6条EST序列长度较短且与其它物种的GST家族基因序列相似度低，因而被排除。

2.2 GSTs基因的克隆

根据从Tau、Zeta、Theta和Phi类中选出的4条EST序列(gnl|Liriodendron|b4_rep_c76383、gnl|Liriodendron|b4_rep_c83858、gnl|Liriodendron|b4_c37453、comp90152_c0)设计中间片段引物，克隆得到4条长度分别为961、594、788和713bp的中间片段 (图1，A、E、I和M)；通过3′-RACE克隆技术，扩增出4条长度分别为293、351、247和629 bp的3′端序列(图1，B、F、J和N)，其中编码为gnl|Liriodendron|b4_rep_c76383的EST序列，其3′端序列扩增采用的是利用SMARTer®RACE 5′/3′Kit合成的cDNA，其余均采用3′-Full RACE Core Set with PrimeScript RTase反转录的cDNA；通过5′-RACE技术，扩增出4条长度分别为446、368、483和347 bp的5′端序列(图1，C、G、K和O)。将这4条基因的中间片段、3′端序列、5′端序列分别进行拼接，得到4条全长分别为1 150、932、1 022和1 067 bp的cDNA。利用ORF finder预测这4条基因全长的开放阅读框，发现其开放阅读框(open reading frame, ORF)长度分别为663、675、651和750 bp，编码氨基酸的个数分别是220、224、216和249 aa。进一步设计ORF引物验证预测的ORF，测序结果与全长序列比对后一致，表明该基因克隆正确(图1，D、H、L和P)。

A～D、E～H、I～L、M～P分别为LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、 LcGSTT1基因的中间片段、3′端产物、5′端产物和ORF产物; M1. DL5000; M2. DL2000; M3. DL1500图1 GST家族基因扩增产物电泳图A-D, E-H, I-L, M-P are intermediate fragments, 3′ RACE fragments, 5′ RACE fragments, ORF fragments of LtGSTparCb, LtGSTZ-like, LtGSTF13a，LcGSTT1 genes; M1. DL5000; M2. DL2000; M3. DL1500Fig.1 Agarose gel electrophoresis of PCR products about GST family genes

2.3 GSTs基因的同源分析

将这4条GSTs基因的全长序列在NCBI数据库中进行Blastn、Blastp比对，发现这些序列与其他物种中的GST家族基因高度同源。根据相似性高的比对结果，将这4个基因分别命名为LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1。选取其他物种中与鹅掌楸属这4条基因编码蛋白质相似度高的同源蛋白质序列及拟南芥中GST家族的蛋白质序列进行比对，并用MEGA6.0软件，采用邻接法及1 000次Bootstrap重复，构建分子系统进化树(图2)。分子系统进化树显示，68条来自不同物种GST家族的蛋白质序列被分为5类，分别是Lambda、Phi、Tau、Theta和Zeta。LtGSTparCb属于Tau类；LtGSTZ-like与Zeta类聚为一支；LtGSTF13a与Phi类分为一类；LcGSTT1属于Theta类。

2.4 GSTs蛋白质的理化性质分析

根据氨基酸的理化性质推测这4个基因编码蛋白质的一级结构。分析表明, LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1蛋白质的分子质量分别约为25.174 28、25.335 30、24.487 21和28.085 71 kD。LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a蛋白质的等电点分别为5.60、6.53、6.66, 属于酸性蛋白；LcGSTT1的等电点是9.20，属于碱性蛋白。LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1蛋白质的不稳定系数分别是33.01、36.97、 43.19 和47.96,因此LtGSTparCb、LtGSTZ-like为稳定蛋白, LtGSTF13a、LcGSTT1是不稳定蛋白。LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1蛋白质的亲水性系数分别为89.95、101.56、86.25和98.35；平均亲水性系数分别是-0.209、-0.065、-0.275和-0.133，这4种蛋白质的平均亲水性系数值均大于-0.5, 有一定的亲水性。

LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1用▲标出；分支上的数值为邻接法1 000次Bootstrap检验的自引导值图2 LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1蛋白质与其他植物中同源蛋白质序列的系统进化树LtGSTparCb, LtGSTZ-like, LtGSTF13a, LcGSTT1 were labeled with ▲; The numbers above the branches are the Bootstrap values using Neighbor-joining method of 1 000 times bootstrappingFig.2 Phylogenetic tree of LtGSTparCb, LtGSTZ-like, LtGSTF13a, LcGSTT1 proteins with homologous GST proteins from other species

名称Name长度Length/aa叶绿体导肽cTP线粒体导肽mTP信号肽SP其他类型Other位置Location可靠性级别RCLtGSTparCb2200.0510.2410.2470.641_4LtGSTZ-like2240.1140.2580.0580.307_5LtGSTZ-like2160.0230.1210.3550.739_4LcGSTT12490.0080.2650.1030.845_3

表4 GSTs蛋白质的二级结构分析

2.5 GSTs蛋白质的亚细胞定位预测

使用TargetP对LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1蛋白质的亚细胞定位进行预测(表3)。预测结果表明LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1蛋白质极有可能是除叶绿体导肽、线粒体导肽、信号肽之外的其他类型蛋白质(other)。LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1是其他类型蛋白质的预测值分别为0.641、0307、0.739、0.845,均高于这4种蛋白质是叶绿体导肽、线粒体导肽、信号肽的预测值。“Loc”是基于蛋白质类型的分值预测出该蛋白质的位置, _指该蛋白质可能位于除叶绿体、线粒体、分泌通路的其他位置,这与上述分析一致。该预测结果的可靠性级别RC (reliablity class)为1级,即diff>0.800,可靠性很高。

2.6 GSTs蛋白质的二级结构预测

通过SOPMA对LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1这4个蛋白质的二级结构进行预测，发现这4个蛋白质中α螺旋(alpha helix)的含量均为最高,其次是无规则卷曲(random coil),延伸链(extended strand)和β转角(beta turn)的含量最低(表4)。分析表明α螺旋是这4个蛋白质二级结构的主要成分。

2.7 GSTs蛋白质保守结构域分析

使用CCD预测LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1蛋白质的保守结构域。预测结果发现LtGSTparCb在5～80 bp和90～215 bp之间分别有一个高度保守的结构功能域GST_N_Tau (cd03058)和 GST_C_Tau (cd03185)。LtGSTZ-like和LtGSTF13a分别在第15～215 bp和1～210 bp之间有一个高度保守的结构功能域GstA super family(cl25459)。LcGSTT1在1～80和90～230 bp之间分别有一个高度保守的结构功能域GST_N_Theta(cd03050)和GST_C_Theta(cd03183)。

2.8 GSTs基因的组织特异性表达分析

通过实时荧光定量PCR技术分析这4个基因在北美鹅掌楸花瓣、花萼、雄蕊、雌蕊、花芽、叶、叶芽和茎8个不同组织中的表达量。 图3表明,LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1在8个组织中均有表达。但LtGSTparCb和LtGSTF13a在叶中的表达量远远高于其他组织中的表达量。LtGSTZ-like在花器官中的表达量高于其他组织，在叶中的表达量最低，在其他组织中的表达量居于两者之间。LcGSTT1在叶中表达量最高, 花部器官其次,在茎和叶芽中的表达量偏低。

图3 GSTs基因在北美鹅掌楸8个不同组织中的表达Fig.3 Expression of GST genes among eight different tissues in L. tulipifera

3 讨 论

在鹅掌楸属转录组数据库鉴定出的4个GST基因家族的亚类中，Tau、Phi亚类的成员较多，分别为8个和7个成员，Zeta、Theta亚类的成员较少，均只包含2个成员。这与其他植物中GST基因家族成员数量分布类似，Tau和Phi作为植物特有的GST类型，在植物中通常具有较多的成员数目[22]。GST是一个较大的基因家族：大豆中有25个成员，玉米中有42个，拟南芥中有48个家族成员[23]，本研究在鹅掌楸属转录组数据库中共鉴定出19个成员。鉴于RNA的表达具有时空性，转录组是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的集合[24]，因此本研究挖掘的GST基因家族成员虽然可能仍有遗漏，但对于了解鹅掌楸属GST基因家族成员有较大的参考意义。

LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1 4个基因分别属于GST基因家族的Tau、Zeta、Phi及Theta 4个亚类。Phi类GST基因在植物的抗逆反应、细胞信号转导和植物抗病等方面发挥着重要作用[25-26]。Tau类GST基因可以响应并减轻由病原体攻击、物理伤害、重金属中毒、氧化胁迫和温度胁迫等一系列內源或外源的压力引起的伤害[27-28]。尽管Phi类和Tau类蛋白质都可以在除草剂解毒过程中起到关键作用，但Phi类GST蛋白质可以高效作用于对氯乙酰苯胺和硫代氨基甲酸酯类除草剂，而Tau类蛋白质则作用于二苯醚和芳氧基丙酸类除草剂[29]。Theta类GSTs与谷胱甘肽过氧化物酶类似，它能减少氧化胁迫产生的过氧化物[22, 30]。Zeta类蛋白质参与酪氨酸降解，催化依赖GSH的马来酰乙醜乙酸转化为延胡索酰乙酰乙酸盐，因此是依赖GSH的异构酶[22]。

LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1蛋白质的分子质量分别是25.17、25.34、24.49和28.09 kD，这和Frova于2003总结的GSTs蛋白质结构的结论类似，即大多数可溶性GSTs以同源或异源二聚体的形式发挥催化活性，单体大小在23～30 kD左右[31]。LcGSTT1的等电点较LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a高出很多，被划分为碱性蛋白，这与拟南芥的Theta类蛋白质类似，拟南芥中Theta类蛋白质等电点均很高，pH在8.9～9.5之间[22]。TargetP亚细胞预测结果表明，LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1这4个蛋白质可能位于除叶绿体、线粒体、分泌通路的其他位置，结合生化和免疫学方面的研究结果，即植物体内可溶性GSTs可能大都定位到细胞质中，预测LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a、LcGSTT1蛋白质极有可能位于细胞质之内，对于此结论尚需进一步的实验验证[32]。LtGSTparCb、LcGSTT1蛋白质N端和C端的保守结构域对于其行使功能具有重要作用，GSH 可以结合到GST蛋白质N端的氧化还原结构域GST_N_Tau(cd03058) 和GST_N_Theta(cd03050)上，疏水性物质则结合到C端的GST_C_Tau(cd03185)和GST_C_Theta(cd03183)结构域构成的α螺旋中[5, 31-33]。LtGSTZ-like和LtGSTF13a均拥有GstA super family(cl25459)结构域，关于该结构的功能描述较少，需要进一步研究。

LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1 4个基因在北美鹅掌楸各个组织中均有表达，说明这4个基因均为组成型表达。海南龙血树(Dracaenacambodiana)的DcGSTU5基因与本研究中的LtGSTparCb相似度高，其在海南龙血树中的表达与类黄酮的生物合成基因相关，并与龙血的积累量一致[34]；DcGSTU5基因在海南龙血树叶中的表达量最高，其次是根和果实，在花和茎中的表达量极低，这与LtGSTparCb在北美鹅掌楸嫩叶中的表达量远远高于其他组织的趋势类似,可为该基因在北美鹅掌楸中的功能研究提供方向[34]。刘迪秋等于2012年克隆得到火把梨(Pyruspyrifolia)中的PpGST基因，该基因属于zeta类GST，与本研究中的LtGSTZ-like基因相似度极高，该基因在火把梨光照的果皮和没有光照的果皮中大量表达，而在幼嫩叶片中表达量很低，几乎检测不到，他们推测PpGST基因在果皮中表达量较高与维持火把梨果实发育过程中的氧化还原平衡及应答逆境胁迫有关[30]；LtGSTZ-like在北美鹅掌楸嫩叶中的表达量最低，这与刘迪秋等的研究结果类似，但对于其在花器官中具有较高表达量的原因需要进一步分析。从荔枝(LitchichinensisSonn.)中克隆的LcGST4基因与本研究中的LtGSTF13a序列很相似，其在荔枝成熟的红色果皮中表达量最高，其次是嫩叶，在成熟叶、假种皮、成熟叶中不表达，这与荔枝中花青素积累所在的组织一致，即推测LcGST4基因的表达可能与花青素的合成有关[35]；LtGSTF13a在北美鹅掌楸花器官中表达量较低，有研究表明北美鹅掌楸的花被片不含花青素，据此推测LtGSTF13a基因在北美鹅掌楸的表达极有可能与花青素的合成有关[36]。本研究中LcGSTT1基因在叶中表达量最高，其次是花部器官，在茎和叶芽中的表达量偏低，与之序列相似的基因与植物的抗逆性有关，对于该基因确切的功能尚需进一步的实验验证[1]。

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