NOB1在宫颈癌及癌前病变中的表达及其与高危型HPV感染的关系

赵洪萍 冯琴琴 黄俊杰 俞巧稚

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，我国每年新增患者占全球宫颈癌新发病例数的1/4以上[1-2]，寻求宫颈癌相关生物学指标，是早期诊断、制定个体化治疗方案以及预后的关键。人乳头瘤病毒(human papilloma virus， HPV)感染是宫颈癌的主要致病因素，文献报道超过95%的宫颈癌组织中含有HPV[3]。NOB1蛋白是一种锌指蛋白，有文献报道NOB1参与了核糖体的组装和蛋白酶体的合成，与肿瘤的形成和发展均有直接关系[4]。本研究对宫颈癌组织中NOB1的表达及高危型HPV(HR-HPV)的感染情况进行了分析，旨在探讨NOB1与HR-HPV感染的关系，为宫颈癌的早期诊断、治疗及预后提供理论依据。

对象与方法

一、一般资料

选取2014年8月至2017年10月我院收治的宫颈病变患者的组织标本114例进行研究，其中宫颈癌53例、宫颈上皮内瘤变42例、慢性宫颈炎19例，均经病理活检证实。患者年龄32～70岁，平均年龄(47.6±6.5)岁，病程4个月～5年，平均(1.9±0.8)年。排除标准：①非首次发病就诊患者；②近3个月内接受了抗肿瘤或抗HPV病毒治疗患者；③具有自身免疫性疾病患者；④有严重心、肝、肾脏疾病史患者。

二、NOB1的检测及结果判定

10%福尔马林固定标本，经清洗脱水后进行石蜡包埋、切片、脱蜡及染色，采用En Vision二步法，按试验盒说明书进行操作。NOB1多克隆抗体来自Proteintech Group公司，试剂盒采用广州健仑生物科技有限公司。依据高倍光镜下细胞的特征进行评分：①无色、浅棕色、棕黄色、棕褐色分别为0、1、2、3分；②染色的阳性细胞数占比≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，≥51%为3分。将染色程度和阳性细胞比例相乘后划分等级：0～1分为阴性(-)，2～3分为弱阳(+)，4～6分为中度阳(++)，7～9分为强阳(+++)。

三、HR-HPV的检测及结果判定

采用美国Digene公司生产的试剂盒检测样本中HPV-DNA的含量，按照试剂盒说明书进行操作，试剂一次可检测13种HR-HPV(包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68)。根据样本检测出的HPV-DNA的RLU与标准阳性对照样本的RLU的比值进行分级，比值≥1.0相当于标本中检出的HPV-DNA含量>l.0 pg/ml，可以判定为HR-HPV阳性，<1.0判定为阴性。根据比值大小计算病毒负荷量具体值，包括1～100(不包括100)、100～1 000(不包括1 000)、≥1 000。

四、统计学方法

结 果

一、HR-HPV阳性率及DNA负荷量比较

宫颈癌HR-HPV阳性率为83.0%，显著高于宫颈上皮内瘤变(46.5%)和慢性宫颈炎(26.3%)，3组之间差异具有统计学意义(P<0.05)；随着宫颈病变的恶化进展，HR-HPV DNA负荷量逐渐增加(Z=13.35)。见表1。

二、NOB1蛋白表达水平比较

宫颈癌NOB1蛋白质阳性表达率为73.6%，显著高于宫颈上皮内瘤变(35.7%)和慢性宫颈炎(10.5%)，3组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 不同组别间HR-HPV阳性率及DNA负荷量比较[n(%)]

与慢性宫颈炎比较aP<0.05；与宫颈上皮内瘤变比较bP<0.05

表2 不同组别间NOB1蛋白表达水平比较[n(%)]

与慢性宫颈炎比较aP<0.05；与宫颈上皮内瘤变比较bP<0.05

三、NOB1的表达及HR-HPV感染与宫颈癌临床病理参数的相关性

HR-HPV感染阳性率与宫颈癌各临床病理参数均无明显相关(P>0.05)；NOB1表达阳性率与宫颈癌组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05)，与组织学类型、FIGO分期及肌层浸润深度等因素均无关(P>0.05)。见表3。

表3 不同临床病理参数的宫颈癌中NOB1表达及HR-HPV感染阳性率[n(%)]

四、宫颈癌NOB1的表达与HR-HPV DNA负荷量的相关性

Spearman秩相关分析表明，宫颈癌NOB1的表达与HR-HPV DNA负荷量具有显著的正相关关系(r=0.457，P<0.05)。

讨 论

宫颈癌是威胁妇女健康的主要妇科恶性肿瘤，宫颈癌的发展主要经历癌前病变、早期浸润癌及浸润癌3个阶段，及时明确宫颈癌相关生物学指标，早期筛查并进行干预，是避免宫颈病变发展为宫颈癌、提高预后质量的关键[5]。有报道显示，HR-HPV病毒感染是导致宫颈细胞加速恶变的主要原因，DNA负荷量可以反映宫颈病变的恶化程度[6]。本研究表明，宫颈癌HR-HPV阳性率为83.0%，显著高于宫颈上皮内瘤变(46.5%)和慢性宫颈炎(26.3%)，3组之间差异具有统计学意义，且随着宫颈癌病变的恶化，HR-HPV DNA负荷量逐渐增加(Z=13.35)，此研究结论与王宇华等[7]的研究结果一致，表明HR-HPV感染可诱导宫颈上皮的恶性转化，同时进一步说明了宫颈癌病变与HR-HPV病毒感染密切相关。

NOB1蛋白是一种锌指蛋白，在核糖体、蛋白酶体生物形成过程中起关键作用。当NOB1的表达出现异常时，核糖体合成受到影响，进而影响细胞生长周期的调控作用[8-9]。目前，关于NOB1基因在宫颈癌中表达的报道较少。本研究结果显示，随着宫颈的恶性病变增强，NOB1蛋白质阳性表达率逐渐增加，宫颈癌NOB1蛋白质阳性表达率为73.6%，显著高于宫颈上皮内瘤变(35.7%)和慢性宫颈炎(10.5%)，3组之间差异具有统计学意义，表明NOB1过表达可能在宫颈癌变过程中发挥显著作用。本研究还表明，HR-HPV感染阳性率与宫颈癌各临床病理参数均无明显相关(P>0.05)；NOB1表达阳性率与宫颈癌组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05)，与其他病理因素无显著相关(P>0.05)，此研究结论与卢洪胜等[10]、杨桂春等[11]的研究一致。本研究同时还表明宫颈癌NOB1的表达与HR-HPV DNA负荷量具有显著的正相关关系，NOB1表达阳性与恶性程度高(分化程度低)有关，而与淋巴结转移负相关，推测其与HR-HPV共同参与了宫颈癌的发展和恶化过程。

综上所述，宫颈癌患者普遍存在NOB1的过度表达，且与HR-HPV感染密切相关，两者共同参与了宫颈癌的发生、发展过程。进一步深入研究NOB1与HR-HPV感染在宫颈癌中的作用机制意义重大。