自拟补肾养血益精汤治疗斑秃的疗效及对血管内皮细胞生长因子和毛囊中相关分子表达的影响

侯占英，李华明

(1.深圳市龙华新区中心医院，深圳 518110；2.广东中医药大学临床学院，广东 广州 510000)

斑秃发病机制复杂，与免疫系统、炎症反应和微血管循环等多种因素有关，西医治疗主要以激素和免疫抑制剂为主，但由于毒副作用和不良反应，停药后容易复发，临床治疗效果不尽满意[1-3]。近年来中医药治疗斑秃取得了较好的临床疗效，中医学认为，斑秃与肝、肾、气、血功能失调，风邪入侵有关，滋补肝肾、养血益精、祛风生发可标本兼治，促进毛发生长[4-6]。本研究选取70例斑秃患者，观察自拟补肾养血益精汤治疗斑秃的临床疗效，体外建立游离毛囊培养模型，探讨补肾养血益精汤含药血清对血管内皮细胞生长因子和毛囊中相关分子表达的影响，为斑秃的中医药治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年1月—2015年12月我院收拾的70例斑秃患者为研究对象，所有患者均为首诊，符合斑秃的诊断标准[7]，且证属肝肾不足型患者，近期未接受激素或免疫抑制剂治疗。排除血热生风、血瘀毛窍等其他证型患者，久治不愈者，近期接受激素或免疫抑制剂治疗，急慢性感染者，合并血液病、恶性肿瘤、全身及免疫性疾病患者。按照随机数字表法分为对照组(35例)和观察组(35例)，两组患者性别、年龄、病程及斑秃皮损评分等资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比较性，具体情况见表1。并收集同期20例健康志愿者血清进行体外游离毛囊研究。

表1 两组患者一般资料比较

1.2 治疗方法

对照组患者给予50 mg醋酸曲安奈德(上海旭东海普药业有限公司，批号20131024)和1.0 ml 2%利多卡因(黑龙江哈尔滨医大药业有限公司，批号20131102)混合液皮损局部注射，0.1 ml/处，局部按摩促进药物吸收，1次/周，共4周。观察组在对照组患者的基础上给予自拟补肾养血益精汤口服治疗。组方：党参12 g，生地黄15 g，熟地黄15 g，天门冬9 g，麦门冬9 g，黄精6 g，制何首乌12 g，茯苓12 g，墨旱莲15 g，女贞子18 g，枸杞子12 g，桑葚子9 g，甘草9 g。取上述配方颗粒加入200 ml温水，每日早晚分2次使用，1剂/d，连续治疗4周。

1.3 体外游离毛囊培养

取整形外手术患者新鲜头皮标本，生理盐水漂洗，剪除多余毛发和脂肪组织，将头皮标本剪成0.3 cm×0.5 cm皮条，眼科手术剪分离真皮与皮下组织，弃去真皮和表皮部分。显微外科镊夹紧毛根远端，拔出完整毛囊，置无菌培养液中。选取结构完整的生长期毛囊，小心转移至24孔板内，1根毛囊/孔，再加入0.5 ml毛囊培养基，37℃培养箱内培养。将培养的游离毛囊分为4组，分别为空白血清组、健康血清组、观察组患者治疗前血清组和治疗后血清组，空白血清组加入不含任何血清的培养基，健康血清组加入含健康志愿者血清的培养基，治疗前血清组加入含观察组患者治疗前血清培养基,治疗后血清组加入含治疗后观察组患者血清的培养基，培养3 d后进行观察检测。

1.4 观察指标

治疗后观察患者的临床疗效，1个月内开始生发，3个月内恢复正常为痊愈；1个月内开始生发，3个月内尚有小范围秃发或头发稀疏为显效；2个月内有生发反应，且长期停留为有效；3个月无生发反应为无效。

总有效率=(痊愈+显效+有效)/总例数×100%

采用ELISA法检测血清和毛囊中干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10)含量，试剂盒购于南京建成生物科技有限公司，严格按照试剂盒说明书操作。采用RT-PCR法检测毛囊血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Fas和FasL mRNA表达，逆转录试剂盒、提取试剂盒、引物等均购于上海生工技术有限公司。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较

治疗14 d后观察组的总有效率97.15%，明显高于对照组74.29%，差异有统计学意义(χ2=7.467，P=0.006)。结果见表2。

表2 两组患者临床疗效比较[n(%)]

2.2 两组患者治疗前后炎症因子比较

治疗前两组患者血清IFN-γ、TNF-α、TGF-β、IL-4和IL-10含量比较，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后观察组患者血清IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于对照组，而IL-4和IL-10含量高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表3。

表3 两组患者治疗前后血清炎症因子比较

注：与本组治疗前比较，aP<0.05；与对照组治疗后比较，bP<0.05

2.3 毛囊中VEGF、Fas和FasL表达比较

空白血清组、健康血清组、治疗前血清组VEGF、Fas和FasL比较，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后血清组游离毛囊的VEGF表达低于其他三组，而Fas和FasL表达高于其他三组，差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表4。

表4 血清毛囊VEGF、Fas和FasL表达

注：与治疗后血清组比较，aP<0.05

2.4 患者毛囊炎症因子比较

空白血清组、健康血清组、治疗前血清组的IFN-γ、TNF-α、TGF-β、IL-4和IL-10含量比较，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后血清组游离毛囊的IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于其他三组，而IL-4和IL-10含量高于其他三组，差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表5。

表5 患者毛囊中炎症因子比较

注：与治疗后血清组比较，aP<0.05

3 讨论

斑秃是一种累及头皮的慢性炎症性皮肤疾病，以毛发脱落为特征，给患者带来心理和精神压力，严重者影响患者的工作和生活。目前斑秃的病因病机尚不完全清楚，可能与自身免疫反应、细胞因子和微血管循环等有关，毛囊微循环中血管内皮细胞生长因子，血清炎症因子等在斑秃的发病过程中起着关键作用[8-9]。临床治疗主要以全身或局部使用皮质类固醇激素、毛囊刺激剂米诺地尔等，可抑制免疫反应和炎症反应，有临床疗效，但副作用大，依赖性强、减药或停药后容易复发。中医学认为,斑秃为肝、肾、气血功能失调，风邪入侵致经脉不畅，发根失养而致病，斑秃应以滋补肝肾、养血益精、祛风生发等为治疗原则[10-11]。补肾养血益精汤为我院治疗斑秃的临床经验方，具有良好的临床疗效，但其作用机制不明[12]。本研究旨在通过观察自拟补肾养血益精汤治疗斑秃的效果和补肾养血益精汤血清对游离毛囊培养模型的作用，探讨自拟补肾养血益精汤治疗斑秃的疗效及对血管内皮细胞生长因子和毛囊中相关分子表达的影响，为临床有效治疗斑秃提供理论依据。

斑秃的发病机制尚不明确，与T 淋巴细胞介导的免疫细胞大量分泌炎症因子，导致外周血IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量升高，IL-4和IL-10含量降低，毛囊角质细胞分化异常，Fas/FasL 低表达诱导角质细胞发生凋亡，造成局部毛囊发生损伤，诱发毛囊周围毛细血管增生，VEGF过表达等因素密切相关。本研究发现，治疗14 d后观察组的总有效率97.15%，明显高于对照组74.29%，差异有统计学意义,说明自拟补肾养血益精汤治疗斑秃的临床疗效确切。可能是由于补肾养血益精汤滋补肝肾、养血活血、益气化湿功效，可标本兼顾，促进毛发生长。观察组患者IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于对照组，而IL-4和IL-10含量高于对照组，差异有统计学意义,说明自拟补肾养血益精汤可减轻患者的炎症反应。补肾养血益精汤方中党参补中益气、生津、养血，生地黄清热凉血、养阴生津，熟地黄补血滋阴、益精填髓，天门冬养阴润燥、清火生津，麦门冬养阴润肺、益胃生津、清心除烦，黄精滋肾润肺、补脾益气，制何首乌补益精血、固肾乌须，抑制皮脂溢出，茯苓利水渗湿、健脾安神，墨旱莲和女贞子补肝肾阴、凉血止血，调理内分泌，枸杞子补肝肾，菟丝子补肾固经、养肝明目，桑椹子滋阴补血、生津润肠,甘草调和诸药药性。全方用药精当，配伍合理，可调节机体免疫功能,改善微循环，减轻局部炎症反应[13]。治疗后血清组游离毛囊的VEGF表达低于其他三组，而Fas和FasL高于其他三组，治疗后血清组游离毛囊的IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于其他三组，而IL-4和IL-10含量高于其他三组，差异有统计学意义。说明补肾养血益精汤含药血清可减轻体外游离毛囊的炎症因子水平和改善微循环。可能是由于方中墨旱莲和女贞子降低全血黏度，改善血液的高黏状态，调节免疫功能，桑葚促进造血细胞生长，甘草促进IL-4释放，抑制T细胞活性，具抗炎、抗变态反应等作用有关[14-15]。

综上所述，自拟补肾养血益精汤治疗斑秃具有较好的临床疗效，可降低血管内皮细胞生长因子表达，改善毛囊中相关分子表达，值得临床推广应用。

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