三七皂苷组方对家兔血浆t-PA、PAI-1活性的影响

曾伟成 黄 颖 许光辉

（厦门市医药研究所，福建 厦门 361008）

三七的主要成分为皂甙，从三七的不同部位分离的皂甙成分有60余种，其中所含人参皂甙有15种左右。三七具有良好的止血、活血化瘀双向调节药理作用，双向调节功效是其所含多种活性成分综合作用所致[1]。我们在前面的研究中发现三七总皂苷的不同分离组分对凝血酶和尿激酶活性的影响情况不同[2]，某些组分可以增强凝血酶或尿激酶活性，另一些组分则可以抑制凝血酶或尿激酶活性。通过进一步的实验弄清三七皂苷各组分作用机制，将有助于对传统中医的理解。实验及临床研究表明血浆中组织型纤溶酶原激化物（tissue type plasminogen

activator，t-PA）和纤溶酶原激活物抑制剂（type 1 plasminogen activator inhibitor，PAI-1）水平与血栓形成相关；三七皂苷Rg1在体内外对家兔血小板PAI-1活性及血浆t-PA和PAI-1活性有影响[3]。本文着重检测三七皂苷的不同分离组分对家兔血浆t-PA和PAI-1活性的影响，筛选出可能对治疗心血管疾病有较好疗效的药方。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验药物和试剂：ELISA试剂盒：兔子组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）（购自R&D），纤溶酶原抑制剂（PAI-1）（购自R&D）；三七总皂苷、人参皂苷Rg1购自南京泽朗医药科技有限公司，三七皂苷配方组由本所天然药物化学实验室制备；健康家兔，雄性，体质量2.5 kg，厦门大学医学院实验动物中心提供。

1.1.2 仪器：酶标仪（ELX800，美国BIO-TEK公司）；傅里叶红外光谱仪（Nicolet iS5，美国热电thermo公司）；电子天平（BL310，德国Sartorius公司）；离心机（ROTINA420，德国Hettich公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 样品制备精确称取三七总皂苷粉末8.00 g放于500 mL的烧杯中，加入甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂按一定比例混合形成的溶液100 mL，用玻璃棒不断搅拌，生成黄色黏稠物质后静置一段时间，倒出上清液于另一烧杯中，上清液用水浴锅蒸干，真空干燥得到的固体标记为组分A。剩下的固体真空干燥后标记为组分B。按上述方法继续称取三七总皂苷，按另外比例重新组合甲醇和乙酸乙酯混合液100 mL浸提，得到上清液组分C和沉淀物D。从组分B可继续分离得到组分E。这些分离得到的三七皂苷组分A、B、C、D和E中分别加入一定量的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等单体，组合成三七皂苷新配方。取三七总皂苷及新三七总皂苷新配方的干燥粉末分别在傅里叶红外光谱仪进行测定，对红外光谱图谱图进行比较分析。

1.2.2 血浆制备：3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，心脏采血，低温1000 r/min离心10 min，小心吸取上层血浆于-70 ℃冻存备用。

三七皂苷Rg1、实验中分离得到的各三七皂苷成分按一定比例重新配合，形成5个新的三七皂苷混合物。三七皂苷对家兔血浆PAI-1和t-PA活性的影响实验共分为7个组别进行。组①为空白对照组，组②-⑥为三七皂苷配方组，组⑦为三七总皂苷。称取三七总皂苷及新组方各10 mg用1 mL的PBS溶解，然后各取0.1 mL加入到1 mL的血浆中，PBS作空白对照，均设6个复孔。上述制备的血浆样品在37 ℃温育45 min，5000 r/min离心5 min，吸取上清液使用酶标仪按试剂盒步骤应用双抗夹心法测定标本中兔血清t-PA、PAI-1水平。450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），同时做标准曲线，由此计算血浆中t-PA和PAI-1的浓度。

1.2.3 统计学处理方法：采用SPSS18.0统计软件进行分析。所有数据以均数±标准差（±s）表示，进行方差分析，P＜0.05具有统计学差异。

2 实验结果

2.1 三七皂苷对家兔血浆t-PA活性的影响：结果显示:新组合形成的5个配方和三七总皂苷组相比较，三七皂苷配方④明显提高血浆t-PA活性（P＜0.01），三七皂苷配方⑥降低血浆t-PA的活性（P＜0.01）。具体结果见图1。

2.2 三七皂苷对家兔血浆PAI-1活性的影响：新组合形成的5个配方和三七总皂苷比较，三七皂苷配方③明显降低血浆PAI-1活性（P＜0.01），其余组分PAI-1含量变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05），具体结果见图2。

2.3 图3给出了三七总皂苷和三七皂苷新配方②号红外谱图，通过红外光谱仪QCheck功能显示出二者的相似度为0.9。从高精度QCheck的分析结果，可以比较清晰的看出三七总皂苷与三七皂苷新配方②号之间存在差异，即二者所含成分相似，但是某些成分的含量存在差别。

图3 三七总皂苷和三七皂苷新配方②号红外光谱图（3000～2800 cm-1范围）

3 讨 论

t-PA是纤溶系统的启动因子，评估血管功能的指标之一即有测定血浆中t-PA抗原[4]。PAI-1为t-PA的生理快速抑制剂，PAI-1过多或是过少都没有益处，PAI-1过多会使活性纤溶酶生成减少，使得纤维蛋白降解减少，从而导致血栓形成；但是PAI-1活性过弱则会引起凝血障碍。所以，适量的PAI-1是纤溶系统的调节因子，它能够与纤溶酶原激活物t-PA进行结合，快速失去活性从而发挥抗纤溶系统的作用，以此来保持纤溶系统与凝血系统在人体正常血液中的动态平衡。已有文献报道传统药物可能通过对血管内皮凝血纤溶物质的影响，降低PAI-1的上升；增加主动脉组织t-PA的表达，恢复纤溶系统的平衡状态[5]；根据我们已做的三七皂甙对凝血酶和尿激酶实验结果分析，不同的三七皂甙对凝血酶和尿激酶产生的影响有很大的区别，可以推测不同的皂苷单体对t-PA、PAI-1的活性也有着不一样的作用。在三七总皂甙中各皂甙单体含量是固定的，因而它在功能上是不变的。本实验通过对三七总皂甙各皂甙单体含量进行调整，使得新的配方在抑制或激活t-PA、PAI-1功能上有所加强，但仍保持一定的双向调节能力。筛选出的三七皂苷配方④号能明显提高家兔血浆t-PA活性，三七皂苷配方③号明显降低血浆PAI-1活性，新的三七皂苷配方配方是三七总皂苷的加强版，用于抗血栓治疗效力更强。因此，优选出的配方用于心血管疾病的治疗会更有针对性。

[1] 王兴文.水提三七总皂苷[J].云南中医学院学报,2001,24(3):1-3.

[2] 曾伟成,黄颖,杨辉.三七总皂苷及分离成分对尿激酶和凝血酶活性的影响[J].福建医药杂志,2013,35(2):77-79.

[3] 詹合琴,李平法,杨锦南,等.三七皂苷Rg1对t-PA和PAI-1水平的影响[J].中国药理学通报,2006,22(7):869-872.

[4] 李卫征,高重阳.急性脑梗死患者血浆t-PA及PAI-1的变化及意义[J].中国社区医师,2014,30(7):96-99.

[5] 郝蔷薇,麻春杰,曾寒泊,等.额尔敦-乌日勒对动脉粥样硬化易损斑块家兔凝血纤溶物质t-PA、PAI-1、Fbg的影响[J].中药新药与临床药理2015,26(6):778-781.