四数九里香不同提取液的急性毒性试验研究

2017-11-30

中国民族民间医药 2017年21期

1.广西南宁市第八人民医院，广西南宁 530001；2.广西民族医药研究院，广西南宁 530001

四数九里香不同提取液的急性毒性试验研究

黄小秋1杨其波1黄小玉1杨增艳2

1.广西南宁市第八人民医院，广西南宁 530001；2.广西民族医药研究院，广西南宁 530001

目的研究四数九里香不同提取液的急性毒性。方法采用改良寇氏法对四数九里香水和75%乙醇提取液的急性毒性进行研究，按最大给药体积40mL/kg灌胃给药后，观察小鼠的活动、饮食、二便、存亡等情况。结果四数九里香水提取液的LD50值为69.18 g/kg，95%的可信限为63.10～75.86 g/kg；75%乙醇提取液LD50值为183.44 g/kg，95%的可信限为169.82～199.53 g/kg。结论四数九里香水提取液和75%乙醇提取液均具有一定的药理毒性。

四数九里香；不同提取液；急性毒性

四数九里香MurrayatetrameraHuang又称千里香、满山香、过山香、千只眼等，为芸香科九里香属植物，民间常用于感冒发热、支气管炎、哮喘、风湿麻木、筋骨疼痛、跌打瘀血肿痛、皮肤瘙痒、湿疹、毒蛇咬伤、疟疾、胃痛、水肿等[1]。龚志强等[2]分别采用水蒸气蒸馏、超临界CO2流体萃取及超声波溶剂萃取3种方法对四数九里香挥发油进行成分鉴定及对比研究，牙启康等[3]通过硅胶柱层析和重结晶方法对四数九里香非挥发性成分进行研究，从四数九里香乙醇提取物中首次分离得到5个单体化合物，黄蓓等[4]的现代药理研究表明四数九里香水提取物具有良好的抗炎和镇痛作用，但有关四数九里香的毒性试验研究未见有报道。研究采用改良寇氏法[5]对四数九里香水提取液和75%乙醇提取液进行急性毒性试验研究，为进一步研究开发该药提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 药品与试剂药材四数九里香采于2015年12月百色市靖西县，经广西民族医药研究院蓝日春副主任中药师鉴定为芸香科九里香属植物四数九里香的茎叶，药材阴干后备用。

1.2 仪器 CF-1000H系列高精度电子教学计重秤(上海华德衡器有限公司)。

1.3 动物 SPF级昆明种小鼠200只，雌雄各半，体重(20±2) g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号为SCXK桂2014-0002。

2 方法

2.1 四数九里香水提取液的制备称取四数九里香粗粉800g，加入8倍量的水，浸泡40min后大火煮沸，保持微沸1h，用纱布过滤；剩下药渣继续加入8倍量的水，同法第2次煎煮，过滤，将两次滤液合并后浓缩成335mL浓浸膏，相当于2.38g原药材/mL。

2.2 四数九里香乙醇提取液的制备称取四数九里香粗粉800g，加入8倍量的75%乙醇溶液，浸泡30min后水浴加热回流提取1h，过滤；剩余药渣加入8倍量的75%乙醇溶液，按上法回流提取，过滤，将2次滤液合并后浓缩，得到流浸膏175mL，相当于4.57g原药材/mL。

2.3 急性毒性实验参照经典的小鼠急性毒性实验方法进行测定预试，求最大耐受量 MTD、最大给药量[5]MLD 和半数致死量LD50。通过对小鼠灌胃给药，进行急性毒性正式研究，连续观察14d，记录小鼠的中毒反应及死亡率。

2.3.1 四数九里香水提取液、醇提取液急性毒性预试验取10只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，实验前禁食12h，按最大给药体积40mL/kg灌胃给药，给药后观察小鼠的中毒情况，给药24h后10只小鼠全部死亡。根据小鼠死亡的情况适当的调整给药剂量，分别找出引起小鼠0 %(Dn)死亡和 100%(Dm)死亡的剂量，并找出相应的剂量组间距 r值，然后测定LD50值，并根据预试验结果进行正式试验。

2.3.2 四数九里香水提取液急性毒性实验取50只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，根据改良寇氏法，将小鼠随机分为5个剂量组，每组雌雄各5只，根据预实验结果确定组间剂量比为1∶0.85，各组剂量含生药材分别为95.20、80.92、68.78 、58.46、49.70 g/kg。实验前禁食12h，按最大给药体积40mL/kg灌胃给药，药后给予自由饮水摄食，观察小鼠的活动、饮食、二便、存亡等情况。

2.3.3 四数九里香醇提取液急性毒性实验取40只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，根据改良寇氏法，将小鼠随机分为4个剂量组，每组雌雄各5只，根据预实验结果确定组间剂量比为1∶0.85，各组剂量含生药材分别为215.06、182.8、155.38、132.07 g/kg。实验前禁食12h，按最大给药体积40mL/kg灌胃给药，药后给予自由饮水摄食，观察小鼠的活动、饮食、二便、存亡等情况。

2.4 LD50值的计算根据公式计算得。

四数九里香水提取液半数致死量为：

95%的可信限为log-1=[lg(69.18±1.96)×0.02156]=log-1(1.84±0.0422)

上限为75.86 g/kg，下限为63.10 g/kg

四数九里香醇提取液半数致死量为：

标准误

上限为199.53 g/kg，下限为169.82 g/kg

3 结果

3.1 一般情况对小鼠经口攻毒灌胃给药后24h内密切观察小鼠的异常反应。给药后30min内，一些动物出现活动减少、竖毛、目光呆滞、步履蹒跚、呼吸急促、食欲减退等初始中毒现象，最终呼吸麻痹而死亡。给药48h内部分小鼠相继出现中毒死亡，剩余小鼠活动量趋于正常，饮水摄食一般，大小便颜色正常。连续观察14d，其余小鼠再无死亡现象。

3.2 LD50值四数九里香水提取液急性毒性试验中，1组动物(给药剂量95.20g/kg)的死亡率为90%，5组动物(给药剂量49.70g/kg)死亡率为20%，动物死亡率随着给药剂量的减少而降低。四数九里香水提取液LD50值为69.18 g/kg，95%的可信限为63.10～75.86 g/kg。当给予75%乙醇提取液215.06g/kg时，小鼠的死亡率为80%，而给药剂量降至132.07g/kg时，小鼠100%存活下来，无中毒迹象。四数九里香乙醇提取液LD50值为183.44 g/kg，95%的可信限为169.82～199.53g/kg。见表1、2。

表1 四数九里香水提取液对小鼠的经口攻毒急性毒性试验结果

表2 四数九里香75%乙醇提取液对小鼠的经口攻毒急性毒性试验结果

4 讨论

4.1 四数九里香水提取液的急性毒性与药物浓度的量效关系分析从表1可知，本实验对四数九里香水提取液进行了5个剂量组(组间剂量比为1∶0.85)的小鼠经口灌胃给药，当给药剂量从95.20g/kg下降至49.70g/kg时，动物存活率从10%上升至 80%，由此可推测四数九里香水提取液的急性毒性与药物浓度之间存在一定的正比关系。

4.2 四数九里香醇提取液的急性毒性与药物浓度的量效关系分析根据急性毒性预试验结果进行分析后，对四数九里香醇提取液进行了4个剂量组(组间剂量比为1∶0.85)的小鼠经口灌胃给药，当给药剂量组分别为215.06、182.8、155.38 、132.07 g/kg时，动物死亡率由80%依次下降为50%、20%、0%，药物毒性大大降低，如表2所示。

4.3 四数九里香两种不同提取液均具有一定的药理毒性通过对四数九里香两种不同提取液的急性毒性试验进行比较，结果显示无论是水提取液还是醇提取液，均具有一定的药理毒性，且两者的动物死亡率随着给药剂量的增加而升高。

四数九里香水提取液和醇提取液的LD50值分别为69.18、183.44 g/kg，可见其水提取液的动物半数致死量明显小于醇提取液，即前者急性毒性大于后者。而水提取液多为非挥发性成分，75%乙醇提取液含有较多的挥发性成分，由实验结果可推理，四数九里香的药理毒性与其挥发性成分存在一定的量效关系。

本实验对四数九里香两种不同提取液的急性毒性进行了的初步探讨，实验结果表明其存在一定程度的药理毒性。四数九里香虽为民间常用药，但应避免大剂量使用，以免发生中毒反应。至于四数九里香不同提取液的毒性作用部位和作用机制，有待于进一步深入研究。

[1]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(上册)[M].北京:人民卫生出版社,1996:10.

[2]龚志强，谈远锋，黄敏，等. 不同方法提取四数九里香挥发油气质联用分析[J]. 湖南师范大学自然科学学报，2014，37(2)：48-50.

[3]牙启康，卢文杰，陈家源，等．四数九里香的化学成分研究[J].广西科学，2010，17(4) : 347-348.

[4]黄蓓，毛长智，庾志斌．四数九里香水提物抗炎及镇痛作用研究[J].中国民族民间医药，2011，20(14)：32-33.

[5]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,2006:819．

2017-09-13 编辑：梁志庆)

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