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龙灯胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

2017-11-30*

中国民族民间医药 2017年21期
关键词:花素龙灯灯盏

*

1.江西省余干县人民医院,江西 余干 335100;2.昆明医科大学,云南 昆明 650500

龙灯胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

程先睿1张兰春2于浩飞2梁新新2胡炜彦2张荣平2*

1.江西省余干县人民医院,江西 余干 335100;2.昆明医科大学,云南 昆明 650500

目的观察龙灯胶囊(LDJN)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法将80只SD大鼠,随机分为正常组,模型组,灯盏花素提取物、地龙提取物和LDJN三种药物的低(170mg/kg·d)、高(680mg/kg·d)剂量组,每组10只,其中灯盏花素提取物为阳性对照组。结扎各组大鼠冠状动脉左前降支(LAD)40min,松扎再灌注120min,以复制心肌缺血再灌注损伤模型。造模成功后,采用红四氮唑(TTC)染色测量大鼠心肌梗死面积,以图像处理软件(IPP)测定大鼠心肌缺血面积的改变。结果与模型组比较,灯盏花素提取物(170、680mg/kg)和地龙提取物(170、680mg/kg)的缺血面积百分比明显缩小(Plt;0.01);地龙提取物(170mg/kg)的心肌梗死面积明显缩小(Plt;0.01),LDJN(680mg/kg)与模型组比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。结论LDJN可以通过减小心肌梗死面积,发挥对大鼠心肌缺血再灌注损伤的护作用。

龙灯胶囊;心肌缺血再灌注;心肌梗死面积;保护

伴随溶栓疗法、经皮冠状动脉介入技术(PCI)、动脉搭桥术等方法的广泛应用,缺血心肌恢复血流灌注的同时可能引起的心肌再灌注损伤(Myocardial Ischemia Reperfusion Injury,MIRI)也越来越受到重视,表现为再灌注后缺血的心肌出现舒缩功能降低、再灌注心律失常、心肌能量代谢障碍、超微结构的变化及血管无复流等现象[1]。研究开发能够有效改善心肌缺血再灌注损伤的药物及治疗方法,成为有效改善缺血性心脏病患者预后效果的关键。灯盏花素(Bre) 是从灯盏花中提取的黄酮类成分,主要用于治疗心、脑血管等疾病,疗效确切,能明显缓解心绞痛症状,改善心肌缺血,减少缺血再灌注造成的心肌损伤,临床用于治疗冠心病心绞痛及辅助治疗急性心肌梗死[2-3]。地龙俗称蚯蚓,为钜蚓科动物参环毛蚓,具有清热平肝、止咳平喘、通经活络作用,其药理作用包括调节心血管、调节血液循环系统、调节免疫系统、调节肝脏功能、调节肾脏功能、抗肿瘤、抗氧化等[4]。现代研究发现其运用于心脑血管,主要功效为降压、溶栓、抗凝、神经保护、降低血液黏稠度并改善微循环等[5]。

龙灯胶囊(LDJN)的主要成分是灯盏花素和地龙,本研究拟在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的基础上,观察大鼠心肌梗死范围的改变,探讨龙灯胶囊对大鼠心肌缺血再灌住损伤的保护作用,为下一步开展研究提供基础与依据。

1 材料与方法

1.1 动物 健康Sprague-Dawley(SD)大鼠,体质量(200±20)g,雌雄各半,由昆明医科大学实验动物学部提供,SPF级,动物合格证号: SCXK(滇)2015-0002。

1.2 药品与试剂 龙灯胶囊(LDJN,批号:S141201-1)为米黄色,粉末状,主要成分是地龙提取物126.4g(50.56%),灯盏花素提取物50.6g(20.24%);灯盏花素(EBHM,批号:S141201-2)为淡黄色,粉末状,主要成分是灯盏花素提取物50.6g(20.24%);地龙(DL-01,批号:S141201-3)为淡黄色,粉末状,主要成分是地龙提取物126.4g(50.56%);3个样品均由昆明医科大学药物化学教研室提供。氯化三苯基四氮唑(TTC,批号:101060270,美国Sigma公司);生理盐水(浙江国镜药业,批号:c150927);10%乌拉坦注射液;4%甲醛溶液(重庆茂业,批号:20161016)。

1.3 仪器 ALC-V9动物呼吸机(上海奥尔科特生物科技有限公司);SHA-B水浴恒温振荡器(上海比朗仪器有限公司);WZ-50C6微量注射泵(浙江史密斯医学仪器有限公司);ES-1000E电子天平(湘仪天平仪器设备有限公司);手术器械若干。

1.4 方法

1.4.1 分组及给药 取80只健康SD大鼠随机分为8组,正常组,模型组,灯盏花素提取物(EBHM)、地龙提取物(DL-01)和LDJN三种药物的低(170mg/kg·d)、高(680mg/kg·d)剂量组,每组10只,雌雄各半,各组动物分别进行标记。术前3天灌胃给药(2mL/100g),正常组和模型组给予生理盐水,其余各组按相应的剂量分别给以灌胃,每天给药1次,第4天给药之后立即手术。

1.4.2 动物模型制备 各组大鼠均参照徐叔云等[6]报道的方法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型:大鼠腹腔注射10%乌拉坦(1mL/100g)实施麻醉,固定,四肢皮下插入针形电极,以监测标准肢体II导联心电图。采用18g、38mm笔筒型动静脉留置针经口插入大鼠气管中,行气管插管,连接小动物呼吸机进行人工呼吸(参数设置为:呼吸频率73次/min,呼吸比1∶1,潮气量11cc)。稳定5min后,胸部去毛,沿胸骨左缘剪开皮肤,钝性分离肌肉,剪断第3、4肋骨,暴露胸腔,小心剪开心包膜,暴露心脏,拉出胸腺固定,以左心耳肺动脉圆锥交界处的左冠状静脉为标志,在左心耳下缘1~2mm处与肺动脉圆锥间穿5-0号缝合线,取一小段直径约为1~1.5mm的线压在结扎部位之上,后拉紧丝线,形成心肌缺血,心尖处变为苍白色为缺血成功标志。40min后开胸剪去结扎线再灌注120min。

1.4.3 心肌梗死面积的测定 打开胸腔取出心脏,置于预冷的生理盐水中洗去血渍,后去除心房、右心室及筋膜组织。后将心脏置于-20℃冰箱中5min以便于切片,后取出用自制刀片沿横切面将心脏均匀切成厚度1mm薄片。将心脏切片放入37℃预热的1%TTC溶液中,置于水浴恒温振荡器中在37℃下振荡染色10~15min,用4%甲醛溶液固定,观察染色结果,非梗死心肌组织为红色,缺血坏死心肌组织为苍白色。将染色的心脏切片置于生理盐水中,用直尺设定好标尺后照相,用Image-Pro Plus(IPP)图像处理软件计算得出缺血面积,计算心肌缺血面积占心室面积的百分比。

2 结果

2.1 对心肌梗死的影响 以心尖处变为苍白色为心肌梗死缺血的成功标志,然后采用红四氮唑(TTC)进行心脏染色,正常组心尖显现粉红色,在模型组中,心脏切片染色结果显示苍白色的范围较广,说明与正常组模型组缺血坏死心肌组织较多;与模型组比较,EBHM、DL-01和LDJN 6个不同治疗组的心脏切片染色结果也出现不同程度的苍白色,但范围没有模型组明显,说明各治疗组能有效缩小心肌梗死范围,在一定程度上可保存更多的存活心肌。见图1。图中缺血为浅色,正常为深色。

2.2 对心肌梗死范围的影响 与模型组比较,灯盏花素提取物EBHM(170mg/kg、680mg/kg)和地龙提取物DL-01(170mg/kg、680mg/kg)的心肌梗死范围明显缩小(Plt;0.01); 同时,LDJN(170mg/kg)的心肌梗死范围也明显缩小(Plt;0.01),而LDJN(680mg/kg)与模型组比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。说明一定剂量LDJN发挥了EBHM和DL-01对大鼠心肌缺血再灌住损伤的保护作用,能有效缩小心肌梗死范围,在一定程度上可保存更多的存活心肌。见表1。

3 讨论

心肌缺血再灌注损伤是指在病理损伤过程中,心肌细胞、组织在一段时间内出现缺血,当血液恢复灌流后,出现较再灌注之前更为严重的功能性损伤,心肌短时间内恢复供血使血液运行通畅,等同于“破血”,而“破血”将会对机体的气血造成损伤,使血瘀加重并伴有脏腑之气不足,在中医学中,根据据其病位及胸闷、胸痛等临床表现,将心肌缺血再灌注归属为“胸痹”、“心悸”等范畴[7]。大量的动物实验及临床研究已经证实中药提取物、单味中药、中药复方以及针灸可通过清除自由基、抗氧化、抑制炎症及钙超载等途径对缺血再灌注损伤心肌起保护作用[8]。

表1 龙灯胶囊对心肌缺血再灌损伤大鼠心肌梗死范围的影响

注:与模型组比较,*Plt;0.05,△Plt;0.01。

灯盏花素具有降低外周血管阻力,改善微循环,保护心脏,促进纤溶活性,提高血脑屏障的通透性,改善脑循环等药效作用[9],对人体内自由基具有较好的清除效果,能明显降低急性心肌梗死患者血清C-反应蛋白的水平[10];通过抑制心肌缺血再灌注大鼠心电图T波变化的幅度,降低心肌缺血再灌注大鼠心律失常发生率,使心肌组织形态学损伤减轻,改善受损的心肌功能,从而对心肌起到保护作用[11]。地龙其味咸性寒,入肝、脾、肺、膀胱经,具有镇静、抗惊厥、解热、平喘、抗血栓等生物活性,是中医药治疗高热惊厥、心脑血管疾病、支气管哮喘的代表药物[12]。地龙提取物主要活性成分为高度不饱和脂肪酸、蛋白质、 脂类、核苷酸、酶类、微量元素等,能改善血液流变学和抗血栓,现代研究发现地龙还有抗血抗肿瘤、调节免疫、降压、抗心律失常、降血脂、镇痛消炎、促进伤口愈合等作用[13]。

灯龙胶囊(LDJN)的主要成分灯盏花素和地龙毒副作用小,资源丰富,疗效确切,单味药对心肌缺血性损伤具有较好的保护作用,阳性对照药灯盏花素提取物能有效缩小心肌梗死范围,但价格昂贵;地龙提取物也能有效缩小心肌梗死范围,资源丰富,价格便宜;龙灯胶囊(LDJN)以灯盏花素和地龙合适的比例配置,实验发现低剂量的龙灯胶囊能有效能有效缩小心肌梗死范围,在一定程度上可保存更多的存活心肌;进而达到资源有效利用和发挥较好的药效学作用。实验在此基础上进一步证实LDJN对心肌缺血性损伤的保护作用,结果表明,LDJN能显著降低MIRI大鼠心肌梗死面积,有效地减轻缺血再灌注对其心肌细胞造成的损伤,使心肌病变的程度明显减轻,以发挥对心肌的保护作用,对心肌缺血性疾病的防治可能具有潜在的开发价值。

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ProtectiveEffectofLongdengCapsuleonMyocardialIschemiaReperfusionInjuryinRats

CHENG Xianrui1ZHANG Lanchun2YU Haofei2LIANG Xinxin2HU Weiyan2ZHANG Rongping2*

1 .Jiangxi Yugan County People’s Hospital,Yugan 335100,China;2 .Kunming Medical University,Kunming 650500,China

ObjectiveTo observe the protective effect of Longdeng capsule(LDJN) on myocardial ischemia reperfusion injury in rats.MethodsTotally 80 SD rats were randomly divided into control group,model group,Dengzhanhuasu extract 170,680mg/kg control groups, earthworm extract 170,680mg/kg treated groups, and LDJN 170,680mg/kg treated groups(n=10). The myocardial ischemia reperfusion injury model was established through occluding the left anterior descending branch of coronary artery for 40 min and removing the ligation later to reperfuse for 30 min in vivo.Different doses of aqueous extract were intragastrically administered once per day for 4 days before operation.Using TTC(TTC) staining measure myocardial infarct size, and image processing software(IPP) was used to gauge the size vary from myocardial ischemia area.ResultsCompared with myocardial ischemia reperfusion control group,the percentage of ischemic area with Dengzhanhuasu extract 170,680mg/kg groups and earthworm extract 170,680mg/kg groups were significantly decreased(Plt;0.01); myocardial infarct size of LDJN 170mg/kg was significantly decreased(Plt;0.01).ConclusionLDJN has protective effect on myocardial ischemia reperfusion injury in rats by reducing the myocardial infarct area.

LDJN; Myocardium Ischemia-Reperfusion; Myocardial Infarction Range; Protection

十二五国家科技支撑计划(2014BAI01B01~04);云南省应用基础研究——昆明医科大学联合专项(2017FE467(-024);2015FB006); 云南省天然药物药理重点实验室开放基金(2014G003)。

程先睿(1976-),男,汉族,本科,副主任医师,研究方向为临床医学普通外科。E-mail:26261550@qq.com

张荣平(1964-)男,汉族,博士研究生,教授,研究方向为天然药物化学及新药研究。E-mail:zhrpkm@163.com

R285.5

A

1007-8517(2017)21-0029-04

2017-09-09 编辑:梁志庆)

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