HPLC法测定咳喘宁口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

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1.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600；2.大连医科大学药理教研室，辽宁 大连 116044

HPLC法测定咳喘宁口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

曹燕妮1李传勋2吕佳1*周艺璇1

1.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600；2.大连医科大学药理教研室，辽宁 大连 116044

目的采用高效液相色谱法测定出咳喘宁口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。方法选取Welch ultimate XB-C18(4.6mm×200mm, 5μm)色谱柱；乙腈-水(含0.1%磷酸，每100mL中需加入0.3 g十二烷基硫酸钠)(38∶62)为流动相；流速1mL/min；检测波长206 nm。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分别在一定的浓度范围内与各自的峰面积线性关系良好，平均回收率分别为101.291%、99.760%，RSD分别为0.306%、2.19%(n=6)。结论此方法专属性强，操作简单，能在同一色谱条件下同时测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，测量结果准确。

咳喘宁口服液；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；高效液相色谱法；含量测定

咳喘是肺病的主要症状，发病原因有外感内伤之别，病机有寒热虚实之分，咳喘与痰密切相关，咳喘每多夹痰，痰也会导致咳喘。由此可见治疗咳喘的同时应结合祛痰。近年来，经济快速发展，人民生活水平不断提高，生活节奏加快，同时伴随着环境污染问题的严重，饮食因素、情志因素和环境因素等均可诱发咳喘。咳喘还会引发支气管炎、胸膜炎、肺结核、喉水肿等各种并发症，故对于咳喘不容小觑。因此研发一类疗效明显的既止咳又能祛痰、平喘的中药处方显得愈发有价值[1-2]。

咳喘宁口服液为复方制剂，该处方是在咳喘类药方的基础上研究形成的一个制剂。处方由麻黄、黄芩、前胡等六味药组成，具有清热化痰、止咳平喘的功效，主要用于肺热咳喘疾病，临床效果良好。原为汤剂，经改进制成口服液，方中麻黄可宣通肺气，止咳平喘，临床应用广泛，疗效明显[3-4]，其主要有效成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的药理作用十分广泛，其中盐酸麻黄碱有显著的平喘效果[5-6]。盐酸伪麻黄碱能有效缓解感冒时的鼻塞、流鼻涕、打喷嚏等症状。为控制制剂质量，研究采用高效液相色谱(HPLC)法，选择在同一色谱条件下，同时测定咳喘宁口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，为该产品的质量控制分析打下良好的基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC-2010HT高效液相色谱仪(包含四元泵，VWD检测器，自动进样器，ChemStation化学工作站，日本岛津有限公司)；AE240型十万分之一电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2 试药 咳喘宁口服液(批号：20170301、20170302、20170303)；盐酸麻黄碱(批号：171241-201508)、盐酸伪麻黄碱对照品(批号：171237-201510)均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂采用分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：月旭Welch ultimate XB-C18(4.6mm×200mm，5μm)；流动相：乙腈-水(含0.1%磷酸，每100 mL中需加入0.3g十二烷基硫酸钠)(38∶62)；流速：1.0 mL/min；检测波长：206 nm；进样量：10 μL；柱温：30℃。理论塔板数均不得低于5000。

2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品10.56 mg和盐酸伪麻黄碱对照品11.12 mg，分别置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，作为盐酸麻黄碱对照品溶液(浓度为0.1056 mg/mL)和盐酸伪麻黄碱对照品溶液(浓度为0.1112 mg/mL)。分别精密吸取上述配置好的溶液各5 mL置同一10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液(混合对照品中盐酸麻黄碱浓度为0.0528 mg/mL，盐酸伪麻黄碱浓度为0.0556 mg/mL)。

2.3 供试品溶液的制备 精密吸取咳喘宁口服液1mL于10mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 精密量取处方中缺麻黄的阴性样品1mL，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.5 专属性试验 分别取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，依次按“2.1”项下色谱条件进样测定，并记录色谱图，结果显示阴性对照无干扰，见图1。

2.6 线性关系考察 吸取“2.2”项下制备好的混合对照品溶液2、5、10、15、20、25μL，按“2.1”项下色谱条件分别进样，记录各自峰面积。以混合对照品的进样量(μg)为横坐标，与之相对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，求得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱回归方程分别为：

Y1= 2338194X-38237.9，r1=0.9999和Y2=2402344X-29017.9，r2= 0.9999。线性范围分别为0.1056～1.32 μg和0.1112～1.39 μg。结果显示，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进样量分别在一定的浓度范围内与各自的峰面积线性关系良好。

2.7 精密度试验 取“2.2”项下制备好的混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，依次连续进样6次，记录峰面积。计算得盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD分别为0.072%和0.151%，此结果表明仪器的精密度良好。

2.8 稳定性试验 取批号20170301的供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，选择在0、2、4、8、12、24h进样测定，记录峰面积。计算得盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD(n=6)分别为1.03%和1.04%，说明供试品溶液24h内是稳定不变的。

2.9 重复性试验 取批号20170301的同一样品6份，按“2.1”项下色谱条件依次进样，记录各自峰面积，计算其含量。得盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱平均含量分别为0.8656mg/mL和0.4133mg/mL，RSD分别为0.15%和0.45%，说明该方法的重复性良好。

2.10 加样回收率试验 精密量取6份已知含量的批号20170301的样品，每份0.5mL，依次加入盐酸麻黄碱对照品溶液(0.0965 mg/mL)4mL和盐酸伪麻黄碱对照品溶液(0.1112mg/mL)2mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，且按“2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，计算盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，从而计算加样回收率，结果得盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均回收率分别为101.291%和99.760%，RSD分别为0.306%和2.19%。见表1和表2。

表1 盐酸麻黄碱回收率考察结果 (n=6)

表2 盐酸伪麻黄碱回收率考察结果 (n=6)

2.11 样品测定 取批号20170301，20170302，20170303的咳喘宁口服液样品各3份，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果得咳喘宁供试品中盐酸麻黄碱的含量分别为0.8623、0.8536、0.8447mg/mL，RSD分别为0.121%、0.828%、0.149%。盐酸伪麻黄碱的含量分别为0.4184、0.4154、0.4082mg/mL，RSD分别为0.452%、0.230%、0.957%。

3 讨论

3.1 方法考察 实验起初尝试了乙腈-水体系，并在其中添加磷酸盐缓冲液或添加三乙胺，结果发现色谱图中麻黄碱拖尾严重，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱无法分离，系统适应性差，无法得到满意的色谱峰型。后尝试在体系中添加离子对试剂十二烷基硫酸钠后，可以有效改善麻黄碱色谱峰的拖尾现象，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分离效果好，二者的含量可以准确测定，符合系统适应性的要求。

3.2 耐用性考察 在选择流动相乙腈-水体系比例时，分别尝试了乙腈-水为37∶63、38∶62、39∶61、40∶60、41∶59等各个不同的比例，结果发现当乙腈-水的比例为39∶61时盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱这两个峰刚好可以分离，且与供试品中其它峰分离效果好，大于此比例时盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱分离效果不佳，且与供试品中其它峰分离效果不理想，小于此比例时盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分离效果较好，但保留时间过长，综合考虑，最后选定乙腈-水的比例为38∶62，此条件下分离效果最佳，见表3。

表3 流动相比例变动考察结果

3.3 色谱柱柱温考察 分别考察了25℃，30℃，35℃等间隔5℃的不同温度对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱行为的影响，结果发现不同的温度对二者的系统适应性参数及保留时间没有明显影响，故最终柱温选择30℃。见表4。

3.4 流速变动考察 分别选择了流速为0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min等多个流速对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱行为的影响，结果发现不同的流速对二者的系统适应性参数及保留时间没有明显影响，故最终流速选择1.0mL/min。见表5。

表4 柱温变动考察结果

表5 流速变动考察结果

3.5 波长变动考察 分别考察了201nm、206nm、211nm等多个波长对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱行为的影响，结果发现不同的波长对二者的影响较大，且波长在206nm时二者的峰面积最大，故波长设定为206nm。

3.6 色谱柱变动考察 分别考察了色谱柱1月旭Welch μltimate XB-C18(4.6 mm×200 mm, 5μm; Part Number: Wel518420; Serial Nmber: W11211672; Lot Nmber: W1801.19)，色谱柱2 InertSustain C18(4.6 mm×150 mm, 5μm; C/N 5020-07345 S/N 3JR97103; GL 5ciences Inc. Made in Japan.)，色谱柱3 Agilent TC-C18(Agilent; 4.6 mm×250 mm, 5μm; PN 518925-902 SN USEGK04898 LN MP10570002. Made in Japan.)对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱行为的影响，结果发现在色谱柱2条件下，两者峰之间有重叠，无法达到准确分离的效果。色谱柱3的保留时间增加，分离效果也不及色谱柱1，故色谱柱1为最佳选择。

综上，实验在药典中麻黄碱含量测定方法的基础上进行了改进，选择在同一色谱条件下同时测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，方法简便，易于操作，且有效缩短了实验时间，提高了咳喘宁口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量测定结果的准确性，具有一定的实用价值。

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DeterminationofEphedrineHydrochlorideandPseudoephedrineHydrochlorideinKeChuanNingOralLiquidbyHPLC

CAO Yanni1LI Chuanxun2LV Jia1*ZHOU Yixuan1

1.College of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China；2. College of Pharmacy, Dalian Medical University, Dalian 116600, China

ObjectiveHPLC method was used for determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Ke chuan ning oral solution.MethodsTo select the Welch ultimate XB-C18(4.6mm×200mm, 5μm); the mobile phase consisted of acetonitrile-water(including 0.1% phosphoric aid, 0.3g dodecyl sodium sulfate was added into 100mL solution)(38∶62); the flow rate is 1mL/min; the detection wavelength was 206nm.ResultsEphedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride respectively showed the good linear relationship between their respective peak area, and the average recoveries were 101.291% and 99.760%,RSDwere 0.306% and 2.19%(n=6),respectively.ConclusionThe method is highly proprietary and easy to operate, and can be used to determine the content of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride simultaneously, and the results show that the measurement results are accurate.

Ke Chuan Ning Oral Liquid; Ephedrine Hydrochloride; Pseudoephedrine Hydrochloride; HPLC; Content Determination

曹燕妮(1987-)，女，汉族，硕士研究生，研究方向为中药药剂学。E-mail:963834657@qq.com

吕佳(1970-)，女，汉族，硕士研究生，副教授，研究方向为中药药剂学。E-mail:lvjiaemail@163.com

R284.1

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1007-8517(2017)21-0022-04

2017-09-22 编辑：邓佳丽)