HPLC法测定粪箕笃中肉桂酸的含量

广西中医药大学药学院，广西 南宁 530200

药物研究

HPLC法测定粪箕笃中肉桂酸的含量

庞丹清魏中璇陈勇*阙祖亮魏江存张昕

广西中医药大学药学院，广西 南宁 530200

目的建立高效液相色谱法定量测定粪箕笃中肉桂酸的含量。方法采用色谱柱：Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸(24∶76)；流速：1mL/min；柱温：30℃；检测波长：285nm。结果肉桂酸在0.0217～0.0760μg范围内呈良好线性关系，加样回收率为100.46%，RSD为2.20%，含量在0.004%～0.022%之间。结论该方法简便准确，重复性好，可用于粪箕笃的质量控制。

粪箕笃；肉桂酸；HPLC

粪萁笃(StephanialongaLour.)为防己科千金藤属植物，味苦，性寒，中医认为其具有清热解毒、利湿消肿、祛风活络等功效，壮医认为该药材具有清热毒，祛风毒，调龙路、火路，通谷道等功效，主要用于痢疾、水肿、黄疸等[1]。研究表明，粪箕笃药材具有利尿、镇痛、治疗前列腺增生等作用[2-3]。粪箕笃的化学成分主要含有莲花烷类生物碱成分和肉桂酸等非碱性物质[4-6]。肉桂酸具有抗炎、抗真菌作用，作为植物生长促进剂、长效杀菌剂、果品蔬菜的防腐剂和作为测定铀、钒及分离钍的试剂，是合成药品治疗冠心冠“可心安”的重要中间体[7-8]；肉桂酸将是一种有前途的防治心肌缺血再灌注损伤的药物[9]。综合各因素考虑，实验选择肉桂酸成分为粪箕笃药材中的指标物质进行含量测定，为粪箕笃的质量控制提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪(G1311B四元梯度泵，G1314F紫外检测器，美国Agilent公司)；SQP电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；TGL-16G离心机(上海安亭科学仪器厂)；KQ5200B型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 乙腈、甲醇(色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司)；甲醇、乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；超纯水(法国默克密里博纯水仪)；磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)；肉桂酸对照品(批号：20160610，宝鸡市辰光生物科技有限公司)。

粪箕笃药材来源于广西壮族自治区，经广西中医药大学药学院郭敏副教授和梁子宁副教授鉴定为防己科千金藤属植物粪箕笃(StephanialongaLour.)的地上部分。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸(24∶76)；检测波长：285nm；流速：1mL/min；柱温30℃；进样量：10μL。色谱图如图1、2所示。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品适量，加甲醇溶液制成浓度为0.53mg/mL的肉桂酸对照品储备液，取上述溶液800μL，置于5mL的容量瓶中，加甲醇定容，配置成每1mL含有8.48μg 的肉桂酸对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 称取粪箕笃药材粉末1g，精密称定，置50mL锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液10mL，摇匀，超声提取60min，放置室温后，补足减失的重量，滤过，取续滤液，13000r离心10min，即得供试品溶液[10-11]。

2.4 线性关系的考察 取肉桂酸对照品溶液适量，置于2mL容量瓶，用甲醇定容，置成每1mL含有5.43μg的肉桂酸对照品溶液，分别进样4、6、8、10、12、14μL。用肉桂酸含量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，进行线性回归：Y=8200.1429X-0.3582，相关系数r2=0.9995，结果(如图2所示)表明肉桂酸在0.0217～0.0760μg范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度实验 取上述对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定肉桂酸的峰面积。结果肉桂酸峰面积RSD为0.63%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性实验 取6份同一批次粪箕笃药材粉末1g，精密称定，按照“2.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进样，记录色谱峰面积，计算肉桂酸的含量及RSD，平均含量为0.0556mg/g，RSD=0.60%，表明此方法具有良好的重复性。

2.7 稳定性实验 取1份粪箕笃药材粉末1g，精密称定，按照“2.3”项方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h按“2.1”项色谱条件进样记录色谱峰面积，计算RSD为0.50%， 表明供试品溶液在24h内具有良好的稳定性。

2.8 加样回收实验 取6份已知含量的粪箕笃药材粉末，置于锥形瓶，每份约0.5g，精密称定。各加入0.0265mg肉桂酸对照品，按照“2.3”项制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进样，记录色谱峰面积，计算肉桂酸含量及RSD，计算加样回收率，平均回收率为100.46%，RSD为2.20%，结果见表1。由以上结果表明，该方法准确性良好。

表1 肉桂酸加样回收结果 (n=6)

2.9 样品含量测定 11批粪箕笃药材均来源于广西壮族自治区,取不同产地和采集时间的粪箕笃药材粉末各1g，精密称定，按照“2.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进样，记录色谱峰面积，计算含量。结果见表2。

表2 粪箕笃药材中肉桂酸含量

由上表实验结果可知，在11批粪箕笃药材中，2014年7月在广西横县采集的药材中肉桂酸的含量最高，为0.2225mg/g；而在对广西钦州与上林两地的药材进行肉桂酸的含量测定时，由于峰面积太小无法积分难以计算出肉桂酸的含量。

3 讨论

通过测定11批不同批次的粪箕笃药材中的肉桂酸成分发现，各产地药材中肉桂酸的含量差异较大，实验研究初步判断肉桂酸在药材中含量的差异是由于各地区土壤的差异及不同采集时间对植物的影响造成的，仍待进一步研究观察。但本实验建立的实验方法简便、易操作、稳定性好，且重现性强，可为粪箕笃的质量标准提供参考。

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DeterminationofCinnamicAcidinPlantsofStephanialongaLour.byHPLC

PANG Danqing WEI Zhongxuan CHEN Yong*QUE Zuliang WEI Jiangcun ZHANG Xin

Guangxi University of Chinese Traditional Medicine, Nanning 530200, China

ObjectiveTo establish a method for determining catechin ofStephanialongaLour. by HPLC.MethodsStephanialongaLour. was determined by HPLC on a Inertsil Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm) column，acetonitrile -0.1% phosphoricacid solution(24∶76)as mobile phase，flow rate wsa 1mL/min，column temperature was main-tained at 30℃,and detection wavelength was set at 285nm.ResultsCinnamic acid showed good linear relationship within 0.0217～0.0760μg, the recovery was 100.46%,RSDwas 2.20%, The content was within the 0.004%～0.022%.ConclusionThe method is simple and accurate, It can be used for the quality control ofStephanialongaLour.

StephanialongaLour.;Cinnamic acid;HPLC

国家自然科学基金(NO:81260673，81660701)；广西中医药大学科。研创新项目(NO:JS201625)；广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室(桂教科研〔2014〕6号)。

庞丹清(1993-)，女，汉族，硕士研究生，研究方向为药物质量控制。E-mail: 1450358251@qq.com

陈勇(1961-)，男，汉族，本科，教授，硕士研究生导师，研究方向为中药及其制剂质量分析。E-mail: cy6381@163.com

R284.1

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1007-8517(2017)21-0010-03

2017-09-15 编辑：邓佳丽)