高效液相色谱法测定食品中肉桂酸钾的含量

袁 明，余春平

（武汉能迈科实业有限公司，湖北武汉 430010）

肉桂酸钾在食品添加剂、香精香料、畜牧业、日化用品等工农业领域有着极其广泛的应用。肉桂酸钾具有较强的抑菌能力，尤其是对引起食品腐败的霉菌、细菌和酵母菌作用明显，且由于其良好的溶解性，是一种广泛使用的食品防腐保鲜剂，且属于无公害的环保防腐剂，可替代苯甲酸钠，山梨酸钾等产品[1-3]。张志军等[4]研究了用乙醇和硫酸将食品中的肉桂酸钾衍生为肉桂酸后提取，利用高效气相色谱仪来测定提取后得到的肉桂酸含量，从而计算出食品中的肉桂酸钾含量，并通过正交试验对衍生条件进行了优化，最终肉桂酸钾的回收率达到了97.51%，但衍生过程比较烦琐，不够简便。王李平等[5]同样是通过将食品中的肉桂酸钾用酸衍生为肉桂酸，再通过二氯甲烷来萃取肉桂酸，利用气相色谱质谱联用仪来测定肉桂酸的含量，从而计算得到食品中肉桂酸钾的含量，取得了较好的效果，但上述方法检测过程同样比较烦琐，且质谱仪设备昂贵，无法大规模推广，且尚未见到肉桂酸钾的液相检测方法的相关报道，本文通过检测过程中液相色谱设备的重复性，样品处理方法的稳定性和肉桂酸钾的回收率，样品配制后的稳定性等来研究该方法的可行性，建立了一种高效、稳定、无毒的检测食品中肉桂酸钾含量的高效液相色谱法，提高肉桂酸钾测定的准确度。

1 材料与方法

1.1 材料

食品样品香辣萝卜干由客户提供。

1.2 仪器与试剂

南京科捷高效液相色谱仪LC600，配备了UVD检测器；色谱柱为南京杰岛C18反相柱，规格为250 mm×4.6 mm，5 μm；语盟超声波清洗机；肉桂酸钾标准品由国药集团化学试剂有限公司生产，纯度99.81%；蒸馏水为自制二重蒸馏水；甲醇为色谱级；其他试剂均为分析纯。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件

流动相：甲醇-0.5%磷酸（50∶50，V/V）溶液；流动相流速：1 mL/min；检测器光源波长：285 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。

1.3.2 标准溶液制备

精密称取肉桂酸钾标准品100.0 mg，置于100 mL洁净的容量瓶中，加适量甲醇溶解并定容至刻度线，摇匀并超声脱气，作为储备液，制作标准曲线时，移液管精密移取一定量的标准溶液储备液稀释成一系列所需浓度的标准溶液。

1.3.3 样品的制备

精密称取待测样品若干，使用洁净的研钵将样品捣碎后转移至烧杯中，适量甲醇冲洗研钵后，向烧杯中添加15 mL甲醇，混合物超声提取后离心，收集上清液，离心得到的固体再次使用15 mL甲醇冲洗，混合物超声提取后离心，收集上清液，重复上述步骤3次，提取样品中的肉桂酸钾，集合所收集的上清液，经0.22 μm微孔过滤膜过滤，定容至100 mL容量瓶，超声脱气，作为待测液。

1.3.4 测定方法

（1）高效液相色谱仪重复性测试方法。取同一标准溶液，连续进样3次，测定肉桂酸钾峰面积，计算峰面积的相对标准偏差。

（2）样品处理方法重复性测试方法。精密称取同一样品3份，按上述样品处理方法进行处理，测定肉桂酸钾峰面积，计算峰面积相对标准偏差。

（3）样品中肉桂酸钾的回收率测试方法。采用样品加标回收率验证，精密称取同一样品6份，向3份样品中加入一定量的肉桂酸钾标准品，3份样品作为对照品，6份样品均按上述样品的制备方法处理样品，测定肉桂酸钾峰面积，计算肉桂酸钾的回收率以及相对标准偏差。

（4）样品稳定性测试方法。精密称取待测样品1份，按上述样品处理方法处理样品，每隔3 h进样，测定肉桂酸钾峰面积，计算峰面积的相对标准偏差。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

配制浓度为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL和1.0 mg/mL的肉桂酸钾标准溶液，测定肉桂酸钾峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，见图1。由图1可知，肉桂酸钾浓度在0～1.0 mg/mL，外标曲线拟合度达到0.999 4，肉桂酸钾浓度与峰面积的线性关系较好。

图1 肉桂酸钾浓度标准曲线

2.2 HPLC重复性验证

取0.2 mg/mL的肉桂酸钾标准溶液重复进样3次，肉桂酸钾的峰面积和保留时间如表1所示。由表1可知，肉桂酸钾标准溶液重复进样3次的峰面积相对标准偏差为0.94%，保留时间基本一致，说明HPLC设备的重复性较好。

表1 肉桂酸钾峰面积和保留时间

2.3 样品处理方法重复性和肉桂酸钾回收验证

精密称取香辣萝卜干6份，每份10.000 0 g，编号为1～6号样品，其中4～6号样品中均添加肉桂酸钾标准品20.0 mg，1～3号样品为对照样品，4～6号样品为加标样品，6份样品均按上述样品处理方法进行处理，1～3号样品的肉桂酸钾的峰面积和保留时间结果如表2所示。4～6号样品的肉桂酸钾的回收率结果如表3所示。

表2 肉桂酸钾峰面积和保留时间

表3 肉桂酸钾回收率

由表2、表3可知，1～3号样品按上述样品处理方法处理后，所测得的肉桂酸钾相对标准偏差为0.89%，保留时间基本一致，4～6号样品的肉桂酸钾的相对标准偏差为1.23%，说明上述样品处理方法稳定、可靠，能较好地提取出待测样品中的肉桂酸钾。

2.4 样品稳定性验证

将上述1号样品分别静置3 h和6 h后进样，测得的肉桂酸钾峰面积和保留时间如表4所示。

表4 肉桂酸钾峰面积和保留时间

由表4可知，其峰面积相对标准偏差0.98%，保留时间基本一致，说明样品的稳定性较好，放置6 h并不会对样品中肉桂酸钾含量的测定造成影响。

2.5 样品中肉桂酸钾含量的测定

精密称取香辣萝卜干1.000 0 g，按上述样品处理方法处理后上机检测，样品中肉桂酸钾含量测定的液相谱图见图2。将峰面积带入到式（1）计算样品中肉桂酸钾添加量为0.329 0 mg/g。

图2 产品液相测定谱图

式中：w为肉桂酸钾的添加量，mg/g；m为样品的质量，g；A为峰面积，mAu·s。

3 结论

该方法能较高效、稳定、无毒地检测出食品中肉桂酸钾的含量，所测得的数据可靠性高，对于测定食品及其他化工品中肉桂酸钾的含量和鉴定商品肉桂酸钾的质量具有一定的参考作用。