云南松松塔水部位对豚鼠离体回肠的影响

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1.大理大学，云南 大理 671000；2.保山中医药高等专科学校，云南 保山 678000

实验研究

云南松松塔水部位对豚鼠离体回肠的影响

张美玲1刘晓波1赵建荣2李冬梅1刘光明1郭美仙1*

1.大理大学，云南 大理 671000；2.保山中医药高等专科学校，云南 保山 678000

目的初步探讨云南松松塔水部位对豚鼠离体回肠的活性。方法观察云南松松塔水部位对正常和阿托品或苯海拉明预收缩豚鼠离体回肠的影响。结果云南松松塔水部位终浓度在300 ～1200 μg/mL之间可以使豚鼠正常离体回肠平滑肌的张力和面积均明显增大；终浓度大于300 μg/mL的云南松松塔水部位可以使苯海拉明诱导下豚鼠离体回肠平滑肌的张力和面积均有所增大；云南松松塔水部位对阿托品诱导下豚鼠离体回肠平滑肌无影响。结论在一定剂量范围内，云南松松塔水部位对豚鼠离体回肠有兴奋作用，其机制可能与M受体有关，与H受体无关。

云南松松塔；豚鼠；离体肠肌

云南松(PinusyunnanensisFranch.)为松科松属的常绿乔木，分布于西藏东部、四川西部及西南部、云南、贵州西部及西南部和广西西北部[1]。松塔是松科松属植物的球果，又名松果，在我国的药用历史悠久，《本草纲目》记载松塔性温味苦，可入药，具有祛痰、止咳平喘、祛风、润肠、安神等功效。现代研究发现，松塔含有黄酮、二萜、三萜、木质素等多种化学成分[2]，具有抗肿瘤[3]、抗病毒(HIV)[4]、抗炎和抗氧化[5]、增强免疫[6]和保肝[7]等活性。本课题组前期研究证明云南松松塔水部位对豚鼠离体气管平滑肌有收缩作用[8]，但至今未见云南松松塔对豚鼠消化道平滑肌作用的报道，故建立实验探讨云南松松塔水部位对豚鼠离体肠肌的作用。现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 动物 健康豚鼠20只，普通级，雌雄不限，体重250～ 350 g，购自昆明医科大学实验动物中心，生产许可证号为SCXK(滇)2011-0004。

1.2 样品提取 云南松松塔采自云南省大理白族自治州苍山，由大理大学生药学教研室张德全副教授鉴定为松科松属植物云南松(PinusyunnanensisFranch.)的松塔(Pine cone)。提取：松塔(10 kg)粉碎，用85%乙醇浸泡6d，收集浸泡液减压浓缩回收溶剂，即得乙醇提取物280 g，再将提取物加适量水混悬，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，剩余为水溶性部分，将水溶性部分减压浓缩，即得水部位76g，冷冻干燥备用。

1.3 试剂 组织胺(批号：100703，上海如吉生物科技发展有限公司)；毛果芸香碱(批号：20061130，上海三爱思试剂有限公司)；苯海拉明(批号：100315，沈阳第四制药厂)；阿托品(批号：100501，郑州羚锐制药股份有限公司)；营养液(NaCl，KCl，CaCl2，NaH2PO4·2H2O，NaHCO3，MgSO4·7H2O，葡萄糖均为分析纯，配置方法参考文献[9])。

1.4 仪器 BL-420F生物机能采集与分析系统(成都泰盟科技有限公司)；HW-400S恒温平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)；张力换能器(航天工程医学工程研究所)。

2 方法

2.1 样品配置 称取云南松松塔的水提取物24 g置于烧杯中，然后取一定量的生理盐水于容量瓶中溶解，后转移至量筒中，定容至50mL即得到48mg/mL的混悬液，然后依次倍比稀释，得到24、12、6 mg/mL混悬液备用[8]。

2.2 标本制备与固定 处死豚鼠，迅速剖腹，取近盲肠部约10 cm的肠肌，置于冷营养液，剪去肠系膜，剪取1.5～2.0 cm左右小段肠管作为标本。固定标本于张力换能器上，放入装有19.5 mL营养液的浴槽内(水温(37± 0.5)℃，通氧1～ 2个/s)，调节基础负荷1.5～ 2.0 g，稳定平衡20 min[9-10]。

2.3 对豚鼠正常离体肠肌的影响 开始试验，先记录5min正常肠肌收缩曲线，加入1.0mg/mL组织胺0.5mL，记录给药后5min肠肌收缩曲线，暂停实验，换洗3次；曲线收缩正常后，重复实验，分别依次加入生理盐水，6、12、24、48 mg/mL云南松松塔水部位，分别依次记录给药后5 min肠肌收缩曲线[9-10]。

2.4 对苯海拉明诱导下豚鼠离体肠肌的影响 开始试验，先记录5 min正常肠肌收缩曲线，加入1.0mg/mL组胺0.5 mL，记录给药后5 min肠肌收缩曲线，暂停实验，换洗3次；加入19.0mL新鲜营养液，曲线收缩正常后，加入1.0mg/mL苯海拉明0.5 mL，抑制作用明显后立即加入生理盐水0.5mL，记录给药后5 min肠肌收缩曲线，暂停实验，换洗3次；加入19.0 mL新鲜营养液，曲线收缩正常后，重复实验，分别依次加入12、24、48 mg/mL云南松松塔水部位，分别依次记录给药后5 min肠肌收缩曲线[9-10]。

2.5 对阿托品诱导下豚鼠离体肠肌的影响 实验方法同2.4。

3 结果

3.1 对豚鼠正常离体肠肌的影响 由表1可知，与生理盐水组比较，云南松松塔水部位终浓度在300～ 1200 μg/mL之间可以使豚鼠正常离体回肠平滑肌的最大张力、最小张力、平均张力和面积均明显增大，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。

组别终浓度/μg/mL最大张力/g最小张力/g平均张力/g张力面积/g·s正常184±015165±013175±01652529±4826组织胺316±043167±010239±02881722±8569生理盐水182±015163±016173±01451790±4270松塔剂量1100189±031166±014178±01554674±4938松塔剂量2300231±024∗∗178±022∗∗204±021∗∗72546±6205∗∗松塔剂量3600208±019∗174±021∗189±020∗63856±6031∗∗松塔剂量41200197±016∗168±015182±019∗55312±4765∗

注：与生理盐水组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01。

3.2 对苯海拉明诱导下豚鼠离体肠肌的影响 由表2可知，与生理盐水组比较，终浓度大于300μg/mL的云南松松塔水部位可以使苯海拉明诱导下豚鼠离体回肠平滑肌的最大张力、平均张力和面积均明显增大，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。

组别终浓度/μg/mL最大张力/g最小张力/g平均张力/g张力面积/g∗s正常177±012164±011169±01251783±3450组织胺315±021∗∗173±009236±011∗∗79675±3179∗∗苯海拉明+生理盐水176±009161±008165±00949183±262苯海拉明+松塔剂量2300268±017∗∗172±007∗230±025∗∗78027±7364∗∗苯海拉明+松塔剂量3600232±025∗∗169±015199±015∗∗69580±4645∗∗苯海拉明+松塔剂量41200195±010∗168±016182±011∗56182±3294∗

注：与生理盐水组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01。

3.3 云南松松塔水部位对阿托品诱导下豚鼠离体肠肌的影响 由表3可知，与生理盐水组比较，云南松松塔水部位各剂量组对阿托品诱导下豚鼠离体回肠平滑肌的最大张力、最小张力、平均张力和面积均无影响，差异无统计学意义(P>0.05)。

组别终浓度/μg/mL最大张力/g最小张力/g平均张力/g张力面积/g×s正常185±013170±014180±01255272±3554毛果芸香碱377±056∗∗288±040∗∗310±041∗∗92969±12248∗∗阿托品+生理盐水178±009156±005167±00950394±2827阿托品+松塔剂量2300185±010160±010171±01051982±3041阿托品+松塔剂量3600179±007157±008168±00951053±2635阿托品+松塔剂量41200172±015154±011163±01450681±4252

注：与生理盐水组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01。

4 讨论

在适宜的体外环境中，消化道平滑肌仍能进行自主的节律性运动，对某些化学物质的刺激特别敏感，如微量毛果芸香碱能激动消化道平滑肌上的M受体，使其收缩，而阿托品能竞争性拮抗M受体，阻断胆碱能受体激动药与M受体结合，从而拮抗其激动作用；微量组织胺能激动消化道平滑肌上的H受体，使其收缩，而苯海拉明能竞争性地与H1受体结合，阻断H受体激动剂与H1受体作用，从而抑制其兴奋作用[9,11]。

实验结果显示：云南松松塔水部位终浓度在300～1200 μg/mL之间，对豚鼠正常离体回肠平滑肌自发收缩有增强作用；当豚鼠离体回肠平滑肌被苯海拉明阻断后，终浓度为300μg/mL、600μg/mL和1200μg/mL的云南松松塔水部位对其均有兴奋作用；当豚鼠离体回肠平滑肌被阿托品阻断后，云南松松塔水部位对其基本无影响。因此，云南松松塔水部位在一定剂量范围内对正常豚鼠离体回肠平滑肌有兴奋作用；其兴奋作用可能与激动M受体有关，与H受体无关。但是云南松松塔水部位兴奋回肠平滑肌的确切有效剂量和具体作用机制还有待进一步研究。

[1]中国科学院昆明植物研究所.云南种子植物名录(上册)[M] .昆明：云南人民出版社，1984: 9.

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[3]于冬梅，李冬梅，刘熙，等.云南松松塔提取物对人肝癌细胞增殖的影响[J].时珍国医国药，2014，25(12): 2835-2837.

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[5]张宇，王莉，傅宇明，等.樟子松松塔抗氧化及抗炎作用研究[J].时珍国医国药，2010，21(6):1549.

[6]刘中禄，吕铁钢，张永亮.松子壳多糖对小鼠主要免疫细胞功能的影响[J].中国比较医学杂志，2010,20(10):33-37.

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[9]魏伟，吴希美，李元建.药理实验方法学[M].4版.北京：人民卫生出版社，2010.

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EffectsofWaterExtractsfromYunnanPineConeonIsolatedIleumofGuineaPig

ZHANG Meiling1LIU Xiaobo1ZHAO Jianrong2LI Dongmei1LIU Guangming1GUO Meixian1*

1.Dali University, Dali 671000,China; 2.Baoshan College of Traditional Chinese Medicine, Baoshan 678000,China

ObjectiveTo study the effects of water extracts from Yunnan pine cone on isolated ileum in guinea pig.MethodsTo observe the effects of different concentrations of water extracts from Yunnan pine cone on the contraction of normal isolated ileum or atropine or diphenhydramine induced contracted isolated ileum.ResultsThe water extracts from Yunnan pine cone at the final concentration of 100 μg/mL to 300 μg/mL could enhance the tension and the area of normal isolated ileal smooth muscle in guinea pigs; The water extracts from Yunnan pine cone at the concentration of 300 μg/mL could enhance the tension and the area of isolated ileal smooth muscle after diphenhydramine in guinea pigs; The water extracts from Yunnan pine cone had no effect on isolated ileal smooth muscle after atropine.ConclusionIn certain dose, the water extract from Yunnan pine cone could stimulate isolated ileum of guinea pigs, and the responding mechanism may be related to the M receptor but not the H receptor.

Yunnan Pine Cone; Guinea Pig; Isolated Ileal Muscle

R285.5

A

1007-8517(2017)19-0018-03

2017-08-18 编辑：邓佳丽)

国家自然科学基金项目(NO:81260632) ；云南省自然科学基金项目(NO:2012FD036)。

张美玲(1996-)，女，汉族，本科，研究方向为药学。E-mail：850046828@qq.com

郭美仙(1980-)，女，汉族，本科，实验师，研究方向为中药药理学。E-mail：yndllyo@126.com