通过参加美国病理学家学会能力验证活动提高实验室寄生虫检验水平

黄冬悦 ，周文杰，邹盛杰，于凡

(四川大学华西第二医院a.检验科,b.出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室，成都 610041)

·质量管理研究·

通过参加美国病理学家学会能力验证活动提高实验室寄生虫检验水平

黄冬悦a,b，周文杰a，邹盛杰a，于凡a

(四川大学华西第二医院a.检验科,b.出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室，成都 610041)

目的通过参加美国病理学家学会(College of American Pathologists,CAP)能力验证(proficiency testing，PT)活动，评价临床实验室寄生虫检验水平并改进检验质量。方法将CAP寄生虫PT标本按常规标本分析，在10个工作日内通过互联网向CAP报送结果，根据回报结果分析临床实验室寄生虫检验水平。结果2011至2015年75份PT标本中5份鉴定错误，错误率为6.3%；15份因未能获得80%一致的结果，CAP未给予评价结果。结论临床实验室寄生虫检验水平有待提高。

寄生虫；形态；能力验证；美国病理学家学会

随着世界范围内交流的增多，输入性寄生虫的增加，寄生虫病的诊断和流行区域的关联逐渐被减弱，呈现出复杂性与多样性的变化。寄生虫的实验室检查仍然是临床实验室的重点工作，由于国内目前尚无来自患者的寄生虫标本用于质量控制活动，而卫生和计划生育委员会(简称“卫计委”)临床检验中心下发的寄生虫图片无法满足提高寄生虫检测水平的质量控制需求。因此，我检验科参加了美国病理学家学会(College of American Pathologists,CAP)关于寄生虫的能力验证(proficiency testing，PT)的实验室间质量评价活动，现将收获与同行交流，以供参考。

1 材料与方法

1.1仪器 尼康Ci-S照相显微镜，5%复方碘溶液。

1.2资料 2011至2015年CAP寄生虫PT标本共75份，代码为P3。

1.3方法 CAP每年发放3次寄生虫PT标本，编号分别为P-A、P-B和P-C。按照粪便湿片标本检测方法将标本混匀，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片，用城垛法浏览全片。在低倍镜下发现疑似寄生虫后，再用高倍镜确认，同时计数全片寄生虫数量。查见1～2个寄生虫为少量(few)，3～9个寄生虫为中量(moderate)，10个及以上为大量(many)，若全片未查见寄生虫则上报未见(no parasites seen)。

工作人员在收到标本时，先检查包装是否有破损，观察标本数量、代码是否正确。在上报截止日期前检测完毕，将试验结果相应代码输入CAP网站，确认后上传结果。一个月之后可进入CAP网站查看结果反馈，实验室再根据试验结果评价。

CAP寄生虫PT结果评价前提为至少80%的参考实验室结果一致。参加了1年以上CAP寄生虫PT活动的实验室，将被随机选为参考实验室。若CAP发放的某一标本的结果未能获得80%一致的结果，则该标本不参与结果评价。

2 结果

我检验科2011至2015年参加CAP寄生虫PT成绩见表1。

75份标本中5份鉴定错误，错误率为6.7%；15份因未能获得80%一致的结果，CAP未评价。在5份鉴定错误的标本中，2次漏检了十二指肠贾第虫包囊；1次误检，将大便中的纤维丝误认为粪类圆线虫幼虫，同时漏检十二指肠贾第虫包囊；1次错检，将结肠小袋纤毛虫滋养体误鉴定为日本血吸虫虫卵；最后一次是将微小膜壳绦虫卵错误鉴定为缩小膜壳绦虫卵。

75份标本中查见寄生虫的有51份，未查见寄生虫的有24份。涉及蠕虫11种，其中，蛔虫卵出现4次，钩虫卵出现5次，鞭毛虫卵出现5次，肺吸虫卵出现1次，带绦虫卵出现2次，布氏姜片吸虫卵出现2次，肝片吸虫卵出现1次，微小膜壳绦虫卵出现1次，缩小膜壳绦虫卵出现2次，阔节裂头绦虫卵出现4次，粪类圆线虫蚴虫出现5次。涉及原虫4种，结肠内阿米巴包囊出现4次，溶组织阿米巴包囊出现1次，蓝氏贾第虫包囊出现2次，结肠小袋纤毛虫滋养体出现1次，蓝氏(或)十二指肠贾第虫包囊出现4次。

从2014年的P-A开始，CAP将候选项更改为：蓝氏(或)十二指肠贾第虫包囊，蓝氏贾第虫包囊不再单独列出。

表1 2011至2015年我室CAP寄生虫PT成绩

续表

注：*，参加实验室未能达到80%一致的意见，故CAP未评分，CAP默认结果正确。

3 讨论

粪类圆线虫幼虫呈长线形，大小约为1.0×(0.05～0.075)mm，头部钝圆，尾端尖细[1-2]，见图1。纤维丝折光性强，不具有头部钝圆，尾部尖细的特征。结肠小袋纤毛虫滋养体存在大小明显差异的两种类型[3]，大滋养体体长约150 μm，小滋养体在50 μm以下，外形为卵圆形或椭圆形[4-5]。图2为同一标本内高倍镜视野下查见的结肠小袋纤毛虫滋养体，其全身披有纤毛，前端有一凹陷的胞口(cytostome)，胞口处纤毛长而致密，胞肛(cytopyge)位于后端，是食物残体排出的通道，可见有大量食物泡(food vacuole)。而日本血吸虫卵虫卵大小为89×67 μm，两者外部结构有较大差别。

微小膜壳绦虫卵大小为(48～60)×(36～48)μm，无色透明，圆形或近圆形，卵壳薄，其内有较厚的胚膜，胚膜两端略突起并由该处各发出4～8根丝状物，弯曲延伸在卵壳和胚膜之间，胚膜内含有一个六钩蚴[6]。缩小膜壳绦虫卵(见图3)比微小膜壳绦虫卵稍大，大小为(60～79)×(72～86)μm，多为长圆形，黄褐色，卵壳较厚，胚膜两端无丝状物，但卵壳与胚膜间有透明胶状物，人体感染较少见，二者较易混淆。

图1 粪类圆线虫幼虫(左)和十二指肠贾第虫(碘染色，×40)

图2 结肠小袋纤毛虫滋养体(×40)

注：A，×10；B，×40。

图3 缩小膜壳绦虫卵

卫计委临床检验中心下发的寄生虫图片，主要针对国内常见的寄生虫进行考核。CAP的寄生虫PT活动提供了一种盲处理的挑战，需要自行寻找寄生虫，更加接近实际工作中的操作，特别是要排除标本中含有杂质的干扰，对少见虫卵的鉴定，对相似形态虫卵的鉴别，标本中含有杂质的干扰，这些都是在临床工作中可能出现的问题[7]。在2015年P-B的一例标本中同时检出了结肠内阿米巴包囊和鞭毛虫卵，提醒我们寄生虫的感染并非是单一的，混合型的感染也会出现，在日常的工作需要特别注意。每一份的PT标本都有其对应的描述，如该标本来自于哪个地区，患者的基本信息，临床症状等，从侧面也让我们了解到了寄生虫的国际变化趋势，例如我们发现阔节裂头绦虫卵在历次PT标本出现的概率并不低，由阔节裂头绦虫寄生于人体小肠引起的疾病，多见于亚寒带及温带的湖泊水域，欧洲、北美和亚洲的一些国家，如日本及菲律宾就有流行，我国报道的病例很少，由于PT标本是在美国制作并发放给参加PT活动的实验室，可见该寄生虫的感染在北美较为常见，但随着我国已成为世界第二大经济体，人员出入境也将会更加频繁，对这些输入性的寄生虫我们应该保持警惕。在目前临床检验工作中，大量自动化和智能化仪器的应用，不仅提高了工作效率，而且提高了检验结果的准确度，但是检验人员的形

态学辨识能力却因为自动化程度的提高而呈下降的趋势。形态学检验是临床检验诊断的基础，是最经典、最直接、最有效、最经济的疾病诊断和鉴别诊断手段，有时甚至是诊断疾病的“金标准”，也是专业性和技术性较高的检验项目。形态学检查不同于一般的临床检验，操作者需要具备一定的临床知识和综合分析能力，保持对寄生虫形态学的认识，故而通过参加CAP寄生虫PT活动，我室人员相关的检验能力也获得提升，并制定出符合自身的培训计划，促使我们持续改进，这达到了预期目的。

[1]Wilkins PP，Qvarnstrom Y，Whelen AC，etal． The current status of laboratory diagnosis of Angiostrongylus cantonensis infections in humans using serologic and molecular methods[J]． Hawaii J Med Public Health，2013,72(6)：55-57．

[2]周艺燕，马晓波，王冰斌，等.2例粪类圆线虫活体杆状蚴、丝状蚴及虫卵的形态分析[J].临床检验杂志，2012,30(2):127-129.

[3]石团员，服媛，鲍国连，等.猪源结肠小袋纤毛虫培养、分子鉴定和显微观察[J].浙江农业学报，2015,27(3)：354-359.

[4]Bilal CQ，Khan MS，Avais M，etal. Prevalence and chemotherapy of Balantidium coli in cattle in the River Ravi region，Lahore(Pakistan)[J]. Vet Parasitol，2009,163(1-2)：15-17.

[5]Hussanjak M，Rajkovic J，Bisnic S. Endoparasite infections of cattle on family owned farms[J]. Praxis Veterinaria Zagreb，1997,45：87-90.

[6]孙晓林，才学鹏，景志忠，等.猪带绦虫六钩蚴超微结构的观察[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2009,27(1):35-37.

[7]黄玉霞，邓三鹰，黄倩，等.大便镜检中形态相似和少见寄生虫的形态特征及鉴别[J].四川医学，2013,34(5):730-732.

R446;R53

A

2017-07-11)

(本文编辑王海燕)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.09.15

黄冬悦,1985年生，男，技师，大学本科，主要从事临床检验工作。

于凡，主管技师，E-mail:29105978@qq.com。