浸润性乳腺癌高频超声表现与分子生物学指标的相关性研究

杨伟伟，王志勇，韩洁洁，尹国莲

（山东省德州市第二人民医院超声科，山东 德州 253000）

浸润性乳腺癌高频超声表现与分子生物学指标的相关性研究

杨伟伟，王志勇，韩洁洁，尹国莲

（山东省德州市第二人民医院超声科，山东 德州 253000）

目的：探讨浸润性乳腺癌（IDC）高频超声征象与分子生物学指标的相关性。方法：对96例（102个肿块）IDC术前行高频超声检查，分析其高频超声声像表现（大小、形态、边界、微钙化、内血流量、腋窝淋巴结转移与否）与分子生物学指标雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、原癌基因（CerbB-2）、Ki-67 表达的相关性。 结果：102 个肿块大小、形态与 ER、PR、CerbB-2、Ki-67 均无相关性；边界毛刺征与ER阳性表达相关；肿块内微钙化与CerbB-2、Ki-67阳性表达相关；肿块内部血流量、腋窝淋巴结转移与CerbB-2阳性表达相关。结论：乳腺癌的高频超声声像表现与其分子生物学指标间存在一定的关联，据此可评估肿瘤的生物学行为和预后，为临床治疗方案制订提供参考。

乳腺肿瘤；超声检查；受体，雌激素；受体，孕激素；原癌基因；Ki-67抗原

近年来，超声检查技术已由单纯的二维解剖声像学向功能声像学、分子生物学方向发展，迈入了分子声像学发展的新时代［1］。本研究将乳腺癌超声声像表现与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、原癌基因（CerbB-2）、Ki-67等免疫分子生物学指标结合分析其关联性，以期通过超声声像改变揭示乳腺癌的分子生物学行为，对其选择临床治疗方案及评估预后提供一定的影像学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2012年11月至2014年12月我院收治的经手术病理证实的96例（102个肿块）浸润性乳腺癌（IDC）的临床及高频超声检查等资料。患者均为女性，年龄30～78岁，平均（52.05±0.92）岁。术前均未行穿刺、化疗、放疗、辅助治疗。

1.2 仪器与方法 采用GE Voluson E8彩色多普勒高频线阵超声诊断仪，探头频率7～12 MHz。患者充分暴露乳腺及腋窝部位，取常规仰卧位，双臂展开，双手抱头。细致检查乳腺内上、内下、外下、外上4个象限及乳晕区、腋窝部位。

1.3 超声结果评价标准 观察肿块的数目、大小、形态、边界、内部微钙化及腋窝淋巴结（axillary nodes，ALN）转移的数目。①超声诊断形态学分析：依据肿块大小，分为≤2 cm和＞2 cm 2组；肿块形态分为较规则和不规则；肿块边界分为较规则和毛糙（毛刺征）；肿块内含微钙化与否分为有与无。②按Adler分级［2］分为 4 级（0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级），其中 0～Ⅰ级为乏血供，Ⅱ～Ⅲ级为富血供。③按ALN转移与否分为转移和无转移。

1.4 病理学检查及免疫组化判断标准 ①96例乳腺癌改良根治术标本离体切开并用10%中性甲醛溶液固定，常规组织脱水、石蜡包埋，厚度4 μm制作组织切片，苏木素-伊红常规染色，由2名主治以上职称病理医师阅片。②免疫组化方法：用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（streptavidin-perosidaseSP 法）对肿物组织进行 ER、PR、CerbB-2、Ki-67 的表达检测。阴性对照用蒸馏水代替一抗实验时的阳性切片作为阳性对照。③免疫组化判断标准：ER、PR、Ki-67均定位于癌细胞的细胞核，出现棕黄色颗粒为（+），其中 ER、PR 无表达为 ER（-）、PR（-）；癌细胞表达 1%～25%为（+），＞25%～50%为（++），＞50%～75%为（+++），＞75%为（++++）；Ki-67＜14%为低表达，Ki-67≥14%为高表达；CerbB-2染色定位于细胞膜判断参照检测指南评分。

1.5 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件，计量资料采用χ2检验，用Spearman等级相关分析IDC高频超声图像特征与分子生物学指标的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IDC高频超声表现 96例IDC共102个病灶，均为肿块型（图1～4）。①肿块最大径≤2 cm占52.9%（54/102），＞2 cm 占 47.1%（48/102）；②肿块形态：较规则形和不规则形分别占10.8%（11/102）、89.2%（91/102）；③肿块边界：规整和毛糙（毛刺）分别占 11.8%（12/102）、88.2%（90/102）；④肿块内微钙化占 54.9%（56/102）；⑤肿块内血流信号（CDFI）：乏血供（0～Ⅰ级）、富血供（Ⅱ～Ⅲ级）分别占31.4%（32/102）、68.6%（70/102）；⑥ALN 转移占 68.6%（70/102），其中转移 1枚、2枚、多枚分别占 40.2%（41/102）、44.1%（45/102）、15.7%（16/102）。

2.2 免疫组织化学染色结果 102个肿块ER阳性表达72个，占70.6%；PR阳性表达80个，占78.4%；CerbB-2阳性表达41个，占40.2%；Ki-67阳性表达52 个，占 51.0%（图 5）。

2.3 IDC高频超声表现与分子生物学指标的相关性（表 1） ①肿块大小与 ER、PR、CerbB-2、Ki-67均无明显相关性（均 P＞0.05）；②肿块形态与 ER、PR、CerbB-2、Ki-67 均无明显相关性（均 P＞0.05）；③肿块边缘毛刺征与ER阳性表达相关（P＜0.05），与PR、CerbB-2、Ki-67 无明显相关性（均 P＞0.05）；④肿块内微钙化与CerbB-2、Ki-67阳性表达相关（均P＜0.05），与ER、PR无明显相关性（均P＞0.05）；⑤肿块内部血流与 CerbB-2 阳性表达相关（P＜0.05），与 ER、PR、Ki-67无明显相关性（均P＞0.05）；⑥ALN转移与ER、PR、Ki-67 均无明显相关性（均 P＞0.05），与 CerbB-2表达呈正相关（P＜0.05）。

表1 102个乳腺癌肿块超声征象与分子生物学指标的相关性 个

3 讨论

3.1 分子标记物在IDC中表达意义 ER、PR、CerbB-2、Ki-67基因是目前预测乳腺癌生物学行为最具代表性的标记物，还可作为评估预后、指导临床治疗的标准。其中ER、PR为核受体家族中的激素类抗体，参与调节乳腺细胞的生长发育，在正常细胞异型增殖为癌细胞的过程中，ER、PR表现为不同程度的缺失，其内分泌治疗疗效也不同程度下降。研究［3］认为，ER、PR阳性表达的患者内分泌治疗疗效可达60%～70%，而两者均为阴性表达时疗效不足10%。国外也有研究［4］认为，ER阴性表达是降低IDC患者5年生存率的主要因素。因此，ER和（或）PR为阳性表达时，辅助内分泌治疗能延长患者的总生存时间。CerbB-2又称neu，是一种细胞膜黏蛋白，属原癌基因，当其产物过度表达（+++）时，常提示癌细胞分化程度低，侵袭性强，易早期转移，已成为评价乳腺癌预后的重要指标［5］，目前临床上也已将其认定为评价预后的独立指标。 研究［6］表明，CerbB-2与ER、PR表达呈负相关，且三者均与淋巴结转移有关。Ki-67抗原是一种细胞增殖相关蛋白，是作为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠指标之一，在普通型IDC中处于高增殖状态［7-8］。

3.2 IDC高频超声表现与分子生物学指标的关系乳腺癌的分子生物学行为决定着其病理组织学的改变，进而影响超声声像图改变和血流动力学改变：①本研究中肿块大小与ER、PR、CerbB-2、Ki-67无相关性（P＞ 0.05），与多数学者［9］研究一致。 肿瘤大小与检出时间、肿瘤自身增殖活性及生长速度等多因素有关。②通常将形态不规则视为恶性征象［10］。本研究中形态不规则占89.2%（91/101）。但关于肿瘤的形态与生物学指标之间的关系，报道不一，曾红艳等［11］认为：形态规则与ER、PR两者阳性表达相关，形态不规则与CerbB-2相关。本研究显示，肿瘤形态与ER、PR、CerbB-2均无明显相关性（P＞0.05）。③边界毛刺征是诊断恶性肿瘤的经典指标之一［12］。本研究显示，肿块的毛刺征与ER阳性表达呈正相关。这反映出肿瘤的毛刺征愈明显，恶性程度愈低，其内分泌治疗效果愈好。此与毛刺征形成的原理一致：由癌细胞向各方向浸润及周围纤维结缔组织抵制性增生所致。④微钙化分为散在、簇状、弥漫型（即“满天星样”）钙化，直径多＜1 mm。林韵等［13］认为肿内微钙化是一种营养不良性钙化，恶性细胞由于代谢旺盛，处于相对缺氧缺血状态，坏死后细胞碎片及细胞分泌物中均含有丰富的钙磷等矿物质，易沉积在导管及小腺泡内。本研究显示，微钙化56例，占54.9%，其中52例为浸润性导管癌，这一结果表明微小钙化多见于导管癌。且含微钙化肿块与CerbB-2、Ki-67呈正相关，差异有统计学意义（χ2=9.289、9.029，均 P＜0.05）。这表明含微钙化的肿块细胞增殖活跃、侵袭力强，预后差，此结果与文献［14-15］报道一致。⑤恶性肿瘤细胞释放一种血管生成因子，诱发新生毛细血管，是CDFI的病理组织学基础，有助于判断肿瘤的侵袭性［16］。本研究中102例肿块中富血供70例（68.6%），表明恶性肿瘤中以富血供为主；富血供者与CerbB-2表达呈正相关，差异有统计学意义（ χ2=6.219，P＜0.05），表明富血供乳腺癌较乏血供者预后差。⑥本研究显示，ALN转移与CerbB-2呈正相关，差异有统计学意义（ χ2=12.540，P＜0.05）。 这表明恶性肿瘤细胞增生活跃，增殖速度快，易出现早期ALN转移，预后差，与徐乐等［15］研究一致。

综上所述，乳腺癌的分子生物学指标决定了其组织病理学的改变，进而影响着超声表现。通过分析超声表现与分子生物学指标间的关系，揭示两者间的关联性，这对从超声角度评估肿瘤生物学行为、指导临床及判定预后均有一定的参考价值。

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Correlation between high frequency ultrasonography features with molecular biological indicator in invasive breast cancer

YANG Weiwei，WANG Zhiyong，HAN Jiejie，YIN Guolian.Department of Ultrasound，the Second People’s Hospital in Dezhou City，Dezhou，253000，China.

Objective：To investigate the correlation between high frequency ultrasonographic features and molecular biological indicator in invasive breast cancer.Methods：High frequency ultrasonography were performed in 96 patients of 102 masses，including tumor size，shape，edge，microcalcification，inner blood flow，axillary lymph node metastasis，with the relationship between high frequency ultrasonography and the expression of estrogen receptor （ER），progesterone receptor （PR），CerbB-2 and Ki-67.Results：Among the 102 cases of breast masses，tumor size，shape，axillary lymph node metastasis were not correlated with the expression of ER，PR，CerbB-2 and Ki-67；speculated margins was positively correlated with the expression of ER；microcalcification was positively with the expression of CerbB-2 and Ki-67；inner blood flow and axillary lymph node metastasis were related with the positive expression of CerbB-2.Conclusion：There is certain correlation between high frequency ultrasonographic features and molecular markers such as ER，PR，CerbB-2，and Ki-67.The biologic behavior and prognosis of the breast cancer can be assessed according to high frequency ultrasonographic features，which may help to guide the clinical treatment options.

Breast neoplasm；Ultrasonography；Receptors，estrogen；Receptors，progestins；Proto-oncogenes；Ki-67 antigen

2016-12-27）

10.3969/j.issn.1672-0512.2017.05.013

杨伟伟，E-mail：ziweiyangwei@163.com。